杜娟娟，劉夢婷，李飛

(南京師范大學(xué)泰州學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，江蘇泰州225300)

豬苓是一種藥用真菌，其性平味甘，具有利水滲濕、祛痰解毒的功能［1］，而天然多糖是一類重要的生物活性物質(zhì)，具有抗腫瘤、抗病毒、降血糖、降血脂及提高免疫功能等多種藥理作用［2－4］。大量近代藥理和臨床實踐證明，豬苓的提取物——豬苓多糖是一種非特異性細胞免疫刺激劑，可以抑制癌細胞生長，目前被廣泛用于癌癥的輔助治療，在治療病毒性肝炎、肝硬化、抗輻射和白血病方面具有良好的效果［5］。而常規(guī)的豬苓多糖采取水提取法，消耗資源多，成本高，收率低，價格昂貴，使其不能在臨床上廣泛使用。筆者采取超聲波提取法對豬苓多糖的提取工藝進行優(yōu)化，為更好地開發(fā)利用豬苓提供可靠的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 豬苓中藥飲片購自泰州中醫(yī)院;蒽酮、正丁醇、氯仿、無水乙醇等(分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司)。

1.2 試驗方法

1.2.1 豬苓的預(yù)處理。將豬苓用粉碎機粉碎后，干燥過篩(40目)備用。

1.2.2 豬苓多糖超聲波提取。

1.2.2.1 最佳提取固液比的選擇。稱取豬苓粉末按照固液比 1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50，混勻后在超聲功率為 100 W、70℃條件下，浸提60 min，取樣待用。

1.2.2.2 最佳提取時間的選擇。稱取豬苓粉末按照固液比1∶40，混勻后在超聲功率100 W、70℃條件下，分別浸提15、30、45、60、75 min，取樣待用。

1.2.2.3 最佳提取溫度的選擇。稱取豬苓粉末按照固液比1∶40，混勻后在超聲功率為100 W條件下，分別在50、60、70、80℃下浸提60 min，取樣待用。

1.2.2.4 最佳超聲波提取功率的選擇。稱取豬苓粉末按照固液比1∶40，混勻后分別在超聲功率為 50、60、80、100 W 條件下，于70℃下浸提60 min，取樣待用。

1.2.3 豬苓多糖的純化。將多糖提取液濃縮至原體積的1/10，加入4倍量無水乙醇于4℃靜置15 h后，10 000 r/min離心10 min，將沉淀用10 ml無水乙醇洗滌后干燥，得到豬苓粗多糖。將粗多糖溶于熱水后，加入等體積的三氯甲烷∶正丁醇=4∶1溶液去除蛋白，直至不出現(xiàn)白色絮狀沉淀為止。上清液用乙醇沉淀后，將沉淀加水溶解，用于測定多糖含量。

1.2.4 多糖含量的測定。采用硫酸－蒽酮法測定多糖含量。取適當(dāng)稀釋的精制多糖溶液1 ml，加入4 ml 0.2%的硫酸蒽酮溶液，混勻后靜置5 min，于沸水浴10 min，冷卻后于620 nm下測定吸光度。按照標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算多糖含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 最佳提取固液比 由圖1可知，一定范圍內(nèi)，豬苓多糖含量隨固液比的增大而提高。在固液比為1∶40時，多糖含量達到最大值19.41 mg/g。超聲波在液相中的吸收度大于在固相中的吸收度，若加入的溶劑量過少，材料本身吸收一定量后，會使得作為超聲波介質(zhì)的液體減少，因而隨料液比的增大，超聲波作用于液體產(chǎn)生的氣泡增加，即超聲波對細胞的空化效應(yīng)增強，細胞破碎程度加大，使得細胞內(nèi)的多糖物質(zhì)逐漸向外擴散［6］，此時多糖的含量隨之增大。當(dāng)料液比繼續(xù)增大時，細胞破碎程度達到飽和，多糖含量趨于下降。因此，豬苓多糖在固液比1∶40時提取最佳。

2.2 最佳提取時間 由圖2可知，多糖含量隨提取時間延長而升高，在超聲波時間達到60 min時，多糖含量達最大值25 mg/g，若提取時間繼續(xù)延長，多糖提取效果趨于平緩。隨著超聲時間延長，空化效應(yīng)的作用力逐漸減小，使得豬苓顆粒表面吸附的提取物質(zhì)增多，從而大大降低了多糖提取率和多糖含量［6］。此外，超聲處理時間延長也可能對多糖的結(jié)構(gòu)造成破壞，使多糖的含量降低。因此，豬苓多糖最佳提取時間在60 min左右。

2.3 最佳提取溫度 由圖3可知，在70℃時多糖含量達到最大值24.98 mg/g，當(dāng)提取溫度繼續(xù)升高時，多糖含量有所下降。隨溫度的升高，液體的蒸汽壓增加，而液體介質(zhì)的表面張力和黏度降低，因而液體介質(zhì)之間很容易形成空化氣泡，從而即使在較低超聲波強度下也可產(chǎn)生空化作用?？栈饔迷龃罅藢毎钠茐模龠M細胞內(nèi)部的多糖物質(zhì)向外擴散，故此時多糖含量和多糖提取率都有所提高［6］。因此，豬苓多糖提取溫度在70℃左右較適宜。

2.4 最佳超聲波提取功率 由圖4可知，多糖含量隨超聲波功率的增大而增大，在100 W時達到最大值。因此，豬苓多糖最佳超聲波提取功率為100 W。

3 結(jié)論與討論

豬苓多糖為由中藥豬苓提取的多糖類物質(zhì)，主要用于提高機體的細胞免疫功能?，F(xiàn)有資料表明，多糖具有抗感染、免疫促進、腫瘤防治、病毒性肝炎、類風(fēng)濕癥、艾滋病等免疫損傷或免疫缺損癥和抗氧化等功能和生物活性［7－10］。因而豬苓多糖的開發(fā)為天然藥物免疫促進劑和調(diào)節(jié)劑應(yīng)用于疾病的防治方面提供了更廣闊的前景。

該試驗探究了豬苓多糖超聲波提取的最佳條件，從固液比、提取時間、溫度、超聲波功率4方面探究，結(jié)果表明，最佳單因子條件:固液比為1∶40(g∶ml)，提取時間為 60 min，溫度為70℃，超聲功率為100 W，與常規(guī)的水提取法比較，超聲提取能顯著提高豬苓多糖含量、縮短提取時間、減小料液比和降低提取溫度。我國對多糖的研究起步較晚，但近年來的工作取得了較大的進展，愈來愈多的多糖被發(fā)現(xiàn)，并證實它們具有復(fù)雜、廣泛的生物活性和功能。隨著對多糖生物活性的深入研究，多糖的生物活性機理、功效因子會更加明確，其應(yīng)用領(lǐng)域也將更加拓寬。

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