王爭爭，平麗娟，郭明剛，王艷飛，張琦

（蒙牛乳業(yè)（焦作）有限公司，河南 焦作 454000）

0 引言

目前，關(guān)于乳制品中有機氯類農(nóng)藥殘留的檢測條件不明確，雜質(zhì)干擾嚴(yán)重，不能很好的分離目標(biāo)峰與雜質(zhì)峰，不能滿足檢測需求。本文通過對乳制品中有機氯類農(nóng)藥殘留檢測條件的探索，尋找最佳檢測條件。

1 材料與儀器設(shè)備

α -六六六，β -六六六，γ -六六六（林丹），δ -六六六，p，p'-滴滴伊，p,p'-滴滴滴，o,p'-滴滴涕，p,p'-滴滴涕，艾氏劑，狄氏劑，七氯，環(huán)氧七氯，α-硫丹，β-硫丹，硫丹硫酸酯，順式氯丹，反式氯丹，氧化氯丹。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的儲備液：以正己烷或者丙酮配制各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的儲備液。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的工作液：以正己烷配制混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（建議濃度為檢出限的100倍）。

氯化鈉（分析純）、硫酸鎂（分析純）、乙腈（色譜純）、正己烷（國產(chǎn)色譜純）、正己烷（進(jìn)口色譜純）。

50 mL離心管：聚乙烯材質(zhì)、聚丙烯材質(zhì)、玻璃材質(zhì)。Varian450-GC氣相色譜儀（配ECD檢測器、配自動進(jìn)樣器）。

2 檢測條件

2.1 儀器條件

進(jìn)樣口溫度270℃；檢測器溫度300℃。

柱溫舊升溫程序：初始溫度85℃，保持2 min，以40℃/min升至165℃，保持10 min，以40℃/min升至215℃，保持5 min，以10℃/min升至280℃，保持5.25 min，總時間為32 min。

柱溫新升溫程序：初始溫度85℃，保持2 min，以40℃/min升至200℃，保持8 min，以8℃/min升至235℃，保持2 min，以20℃/min升至280℃，保持6.5 min，總時間為28 min。

CP-Sil 19CB色譜柱：50m×0.25mm×0.20 μ m。最高允許柱溫280℃。載氣為高純氮氣，純度大于99.999%，分流比為關(guān)，柱流速為1.3 mL/min。

2.2 方法

稱10 g樣品于50 mL離心管中，加20 mL乙腈，3.5～4.5 g硫酸鎂和1.0～1.5 g氯化鈉，渦旋1 min，以4 500 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，有機相乙腈旋轉(zhuǎn)蒸干，用2.5 mL乙腈、5 mL純水、2.5 mL乙腈分別沖洗轉(zhuǎn)入50 mL離心管，加入10 mL正己烷，渦旋30 s，正己烷層轉(zhuǎn)移到玻璃試管，再加5 mL正己烷重復(fù)提取1次，合并提取液，氮氣吹干，加1 mL洗脫試劑（正己烷：丙酮=9：1）溶解，過SPE凈化柱，加3 mL洗脫試劑沖洗玻璃試管，倒入SPE柱，重復(fù)3次洗脫，氮氣吹干，加入1.00 mL正己烷溶解，過濾后，進(jìn)氣相色譜檢測。

圖1 舊升溫程序中標(biāo)準(zhǔn)品與原奶樣品譜圖對照

所用空白均為純水代替樣品，所用樣品均為原奶。單次或者單項目對比均在相同條件下、同一批次處理。

3 雜質(zhì)分析

3.1 升溫程序的改變對雜質(zhì)的影響

（1）用舊升溫程序單純檢測樣品時，在α-硫丹處有干擾，不影響結(jié)果出具及回收率的檢測；在β-666處有干擾，不影響結(jié)果出具，但影響回收率的檢測；在氧化氯丹處有嚴(yán)重的干擾，幾乎與標(biāo)準(zhǔn)品目標(biāo)峰重合，影響結(jié)果的出具及回收率的檢測,如圖1和表1、表2所示。

（2）通過改變儀器的升溫程序，使β-666和氧化氯丹與相應(yīng)的雜質(zhì)分離。新升溫程序檢測時，β-666和氧化氯丹處無雜質(zhì)干擾，正常結(jié)果出具及檢測回收率；在α-硫丹處有雜質(zhì)干擾，不影響結(jié)果出具及回收率的檢測；新增反式氯丹和順式氯丹處有雜質(zhì)干擾（由于升溫程序的改變，造成其他雜質(zhì)滯留于此），不影響結(jié)果出具及回收率的檢測，反式氯丹檢測回收率時需手動積分。如圖2、和表3～表7所示。

由上述可以看出，通過改變儀器方法的升溫程序，可以使影響結(jié)果出具及回收率檢測的雜質(zhì)峰與目標(biāo)峰分離，其他雜質(zhì)不影響結(jié)果的出具及回收率的檢測。

3.2 實驗器材對雜質(zhì)的影響

3.2.1 離心管之間的空白對比

圖2 新升溫程序中標(biāo)準(zhǔn)品與原奶樣品譜圖對照

表1 舊方法中β-666回收率的檢測

表2 舊方法中α-硫丹回收率的檢測

表3 新方法中β-666回收率的檢測

使用聚乙烯離心管、玻璃管和聚丙烯離心管檢測空白，然后進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)在氧化氯丹處的雜質(zhì)聚乙烯離心管（1 611 mV）較玻璃管（737 mV）和聚丙烯離心管（733 mV）大2倍，玻璃管和聚丙烯離心管處雜質(zhì)無明顯區(qū)別；β-666處均無雜質(zhì)干擾；α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處雜質(zhì)無明顯區(qū)別。

表4 新方法中氧化氯丹回收率的檢測

表5 新方法中α-硫丹回收率的檢測

表6 新方法中反式氯丹回收率的檢測

表7 新方法中順式氯丹回收率的檢測

3.2.2 有機藥品對聚丙烯離心管和聚乙烯離心管的溶出雜質(zhì)對比

（1）用聚乙烯離心管和聚丙烯離心管分別加入20 mL乙腈、3.5～4.5 g硫酸鎂和1.0～1.5 g氯化鈉，渦旋離心，有機相乙腈氮氣吹干，加入1.00 mL正己烷溶解，過濾檢測，然后進(jìn)行對比發(fā)現(xiàn)在氧化氯丹處的雜質(zhì)聚乙烯離心管（37 mV）較聚丙烯離心管（25 mV）差別不大，處于正常范圍；β-666、α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處均無雜質(zhì)干擾。

（2）用聚乙烯離心管和聚丙烯離心管分別加入5 mL乙腈和5 mL純水，加入10 mL正己烷，渦旋30 s，正己烷層轉(zhuǎn)移到玻璃試管，再加5 mL正己烷重復(fù)提取一次，氮氣吹干，加入1.00 mL正己烷溶解，過濾檢測，然后進(jìn)行對比發(fā)現(xiàn)在氧化氯丹處的雜質(zhì)聚乙烯離心管（420 mV）較聚丙烯離心管（160 mV）大2.5倍，β-666處均無雜質(zhì)干擾，α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處雜質(zhì)無明顯區(qū)別。

由上述可以看出，正己烷對玻璃管和聚丙烯離心管無溶出物質(zhì)，對聚乙烯離心管有溶出物質(zhì)；三種器具檢測的空白中β-666處均無雜質(zhì)干擾；α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處雜質(zhì)無明顯區(qū)別，玻璃管和聚丙烯離心管氧化氯丹處雜質(zhì)無明顯區(qū)別；由于有機溶劑對玻璃管無溶出物質(zhì)，所以玻璃管和聚丙烯離心管中氧化氯丹、α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處的雜質(zhì)均為藥品中的雜質(zhì)。由于玻璃管易碎，可以用聚丙烯離心管代替聚乙烯離心管，減小雜質(zhì)對檢測的影響。

3.3 藥品的排查

3.3.1 藥品之間的對比及同一廠家不同時間的藥品對比

（1）前處理中涉及到濃縮提取后上機檢測的藥品：乙腈25 mL，硫酸鎂 3.5～4.5 g，氯化鈉1.0～1.5 g，純水5 mL，正己烷25 mL，丙酮1 mL。

通過濃縮液的對比發(fā)現(xiàn)，氧化氯丹處雜質(zhì)，正己烷濃縮液為560 mV；乙腈、水、丙酮的濃縮液和氯化鈉、硫酸鎂的乙腈提取液為15 mV左右，與正己烷原液15 mV沒有區(qū)別。α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處的雜質(zhì)：正己烷濃縮液均為15 mV左右，乙腈、水、丙酮的濃縮液和氯化鈉、硫酸鎂的乙腈提取液均沒有。

（2）同一廠家同一個批次不同到貨時間的色譜純正己烷。新正己烷原液、新正己烷配制標(biāo)準(zhǔn)品與舊正己烷配制標(biāo)準(zhǔn)品對比發(fā)現(xiàn)，氧化氯丹處雜質(zhì)新正己烷（20 mV）較舊正己烷（3 mV）大近7倍，如果換算為樣品，即一個樣品需要25 mL正己烷濃縮，理論上氧化氯丹處雜質(zhì)新正己烷為500 mV、舊正己烷（75 mV）。

由上述可以看出，氧化氯丹、α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處的雜質(zhì)均為正己烷藥品中雜質(zhì)所導(dǎo)致，且同一廠家同一批次不同到貨時間的藥品之間雜質(zhì)相差較大。

（3）不同廠家之間的藥品對比。通過國產(chǎn)色譜純正己烷與進(jìn)口色譜純正己烷原液對比以及25 mL濃縮液對比發(fā)現(xiàn)：進(jìn)口色譜純正己烷在α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處均無雜質(zhì)干擾，在氧化氯丹處雜質(zhì)干擾很小。

氧化氯丹處雜質(zhì)：國產(chǎn)色譜純正己烷原液（38 mV），25 mL濃縮液（1 800 mV）；進(jìn)口色譜純正己烷原液（2.5 mV），25 mL濃縮液（13 mV），進(jìn)口色譜純正己烷25 mL濃縮液（13 mV）比國產(chǎn)色譜純正己烷原液（38 mV）還小。

由上述以看出，進(jìn)口色譜純正己烷比國產(chǎn)色譜純正己烷對目標(biāo)峰的干擾雜質(zhì)少，雜質(zhì)小。此外，檢測時：（1）最高柱溫不能超過柱子允許的最高恒溫溫度；（2）使用自動進(jìn)樣器，進(jìn)樣量準(zhǔn)確，重復(fù)性好；（3）使用氮氣做載氣時要用高純氮氣，純度大于99.999%；（4）配制標(biāo)準(zhǔn)品所用的藥品最好使用色譜純，或者分析純經(jīng)過重蒸；（5）所用標(biāo)準(zhǔn)品是國家承認(rèn)的有資質(zhì)的廠家或者研究機構(gòu)生產(chǎn)的，最好是有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

4 結(jié)果與討論

通過以上改變，使β-666和氧化氯丹與相應(yīng)的雜質(zhì)分離，β-666和氧化氯丹處無雜質(zhì)干擾，正常結(jié)果出具及檢測回收率；在α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處無雜質(zhì)干擾，正常結(jié)果出具及檢測回收率。

為了減少有機氯檢測過程中的雜質(zhì)干擾：

（1）通過對上機檢測時的升溫程序的改變：使用新升溫程序（初始溫度85℃，保持2 min，以40℃/min升至200℃，保持8 min，以8℃/min升至235℃，保持2 min，以20℃/min升至280℃，保持6.5 min，總時間為28 min。）先對干擾雜質(zhì)進(jìn)行分離，使干擾嚴(yán)重的雜質(zhì)與目標(biāo)峰進(jìn)行分離，減少雜質(zhì)對目標(biāo)峰的影響。

（2）通過對檢測時使用的玻璃器具（聚乙烯離心管、聚丙烯離心管、玻璃離心管）的排查：發(fā)現(xiàn)聚乙烯離心管有雜質(zhì)溶出，對檢測有機氯產(chǎn)生影響，雜質(zhì)干擾嚴(yán)重；玻璃離心管無雜質(zhì)溶出，但是易碎；聚丙烯離心管無雜質(zhì)溶出；最后使用聚丙烯離心管代替有雜質(zhì)溶出的聚乙烯離心管及易碎的玻璃離心管。

（3）對檢測時使用的藥品（國產(chǎn)色譜純正己烷、進(jìn)口色譜純正己烷）的排查：發(fā)現(xiàn)國產(chǎn)色譜純正己烷對檢測有機氯產(chǎn)生影響，雜質(zhì)干擾嚴(yán)重；進(jìn)口色譜純正己烷雜質(zhì)干擾很??；最后使用進(jìn)口色譜純正己烷代替國產(chǎn)色譜純正己烷。

通過這三處改變可減少雜質(zhì)干擾，減少對回收率的影響，減少對結(jié)果出具的影響。

[1]GB/T 5009.19-2008食品中有機氯農(nóng)藥多組分殘留量的測定[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009.3

[2]GB/T 5009.162-2008動物性食品中有機氯農(nóng)藥和擬除蟲菊酯農(nóng)藥多組分殘留量的測定[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009.3

[3]GB/T 23210-2008牛奶和奶粉中511種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定氣相色譜-質(zhì)譜法[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009.5