陳福將 吳鐵峰 蔡振蕩

毛細(xì)支氣管炎磷酸化p38MAPK水平及與MCP-4的相關(guān)性

陳福將 吳鐵峰 蔡振蕩

目的 觀察毛細(xì)支氣管炎患兒血清、鼻咽分泌物（NPS）中磷酸化p38MAPK（P-p38MAPK）水平與單核細(xì)胞趨化蛋白4（MCP-4）的相關(guān)性，探討P-p38MAPK的臨床意義。方法 毛細(xì)支氣管炎患兒31例為觀察組及同期體檢健康兒童30例為對(duì)照組，毛細(xì)支氣管炎急性期、恢復(fù)期分別抽取NPS標(biāo)本，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清、NPS中P-p38MAPK、MCP-4含量。結(jié)果 在急性期毛細(xì)支氣管炎患兒血清P-p38MAPK、MCP-4含量與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；中、重度組血清P-p38MAPK、MCP-4含量與輕度組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；毛細(xì)支氣管炎患兒急性期NPS中P-p38MAPK、MCP-4含量與恢復(fù)期比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。毛細(xì)支氣管炎患兒血清中P-p38MAPK含量與MCP-4含量呈顯著正相關(guān)（r=0.609，P＜0.01，n=31）。毛細(xì)支氣管炎患兒急性期NPS中P-p38MAPK含量與MCP-4含量呈顯著正相關(guān)（r=0.742，P＜0.01，n=30）。結(jié)論 毛細(xì)支氣管炎患兒急性期血清、NPS中存在p38MAPK活化增加，并與MCP-4密切相關(guān)，提示p38MAPK通路參與調(diào)節(jié)毛細(xì)支氣管炎的氣道炎癥。

毛細(xì)支氣管炎 磷酸化p38MAPK 單核細(xì)胞趨化蛋白4

毛細(xì)支氣管炎是嬰幼兒最常見的下呼吸道感染。研究表明，絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在氣道炎癥中起重要作用，機(jī)體發(fā)生炎癥反應(yīng)均與p38MAPK的激活緊密相關(guān)［1］。單核細(xì)胞趨化蛋白4（MCP-4）是C-C趨化因子，能選擇性的將Th2細(xì)胞從外周募集至炎癥部位，從而引起Th2介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)［2］。作者觀察毛細(xì)支氣管炎患兒血清、NPS中P-p38MAPK水平及MCP-4的相關(guān)性，報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 觀察組：選擇本院2012年9月至2013年3月毛細(xì)支氣管炎住院患兒31例，男17例，女l4例；平均（7.8±4.2）月齡。入院前病程（3.47±1.65）d，診斷符合＜＜實(shí)用兒科學(xué)＞＞［3］第七版，均為首次發(fā)病，無基礎(chǔ)心肺疾病。臨床分度參考Bearman等［4］提出的標(biāo)準(zhǔn)，分為輕、中、重度。對(duì)照組：同期保健門診體檢健康兒30例，男16例，女l4例；平均（8.5±4.1）月齡。無個(gè)人和家族特應(yīng)癥（如支氣管哮喘、過敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎等）病史。兩組性別、月齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本項(xiàng)目獲院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會(huì)的批準(zhǔn)并得到患兒家長的知情同意。

1.2 方法 血液標(biāo)本采集：所有對(duì)象于入院后次日早晨抽取空腹靜脈血2ml，室溫20～25℃，放置60min，2000r/min，離心10min，離心半徑17.8cm，留取血清-70℃凍存?zhèn)錅y(cè)。鼻咽分泌物（NPS）標(biāo)本采集：毛細(xì)支氣管炎患兒入院后第1天、第5天分別抽取NPS，經(jīng)處理后將NPS吸入抽提管內(nèi)，反復(fù)2～3次。取NPS 0.5ml，按1：2體積加入生理鹽水，再加入抗黏液劑二硫蘇糖醇（DTT）2～3滴，用吸管反復(fù)吹打至痰液稀薄，約3～5min，3000r/min，離心10min，離心半徑17.8cm，留取上清液-70℃凍存?zhèn)錅y(cè)。

1.3 ELISA測(cè)定 所有對(duì)象標(biāo)本采用酶聯(lián)免疫吸附分析法測(cè)定血清及NPS中P-p38MAPK、MCP-4濃度，P-p38MAPK試劑盒購自BIOSOURCE公司，MCP-4試劑盒購自R＆DSystems公司，均按說明書進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件。數(shù)據(jù)以（x±s）表示。采用t檢驗(yàn)，兩變量相關(guān)分析采用Bivariate過程的Pearson等級(jí)相關(guān)法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清中P-p38MAPK、MCP-4含量比較 見表1。

表1 兩組血清中P-p38MAPK、MCP-4含量比較（x±s）

2.2 毛細(xì)支氣管炎患兒NPS急性期與恢復(fù)期中P-p38MAPK、MCP-4含量比較 見表2。

表2 NPS急性期與恢復(fù)期中P-p38MAPK、MCP-4含量比較（x±s）

2.3 毛細(xì)支氣管炎患兒輕度、中重度血清P-p38MAPK、MCP-4比較 見表3。

表3 急性期輕度、中重度血清P-p38MAPK、MCP-4的含量比較（x±s）

2.4 相關(guān)性分析 毛細(xì)支氣管炎患兒血清中P-p38MAPK含量與MCP-4含量呈顯著正相關(guān)（r=0.609，P＜0.001，n=31）。毛細(xì)支氣管炎患兒急性期NPS中P-p38MAPK含量與MCP-4含量呈顯著正相關(guān)（r=0.742，P＜0.01，n=30）。

3 討論

MAPK家族是一族胞漿內(nèi)廣泛分布的含有絲氨酸蘇氨酸的蛋白激酶，其級(jí)聯(lián)激活方式相似，都通過保守的三級(jí)酶促級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致一系列下游信號(hào)的活化。p38MAPK是MAPK家族中的一個(gè)成員，能被炎癥、應(yīng)激、損傷等因素啟動(dòng)信號(hào)激活，而參與細(xì)胞的炎癥和凋亡［1］。研究表明，MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在炎癥中起重要的作用。p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路直接或間接影響單核/吞噬細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)功能，p38MAPK抑制劑能阻止單核細(xì)胞的分化和趨化遷移，以及抑制MCP-1和巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1α的趨化作用［5］。有研究證實(shí)，重癥哮喘患者的肺泡細(xì)胞存在p38MAPK活化的增加［6］。Mercado等［7］通過重癥哮喘外周血單核細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn)，IL-4、MCP-1的釋放可促使哮喘p38MAPK的活化，應(yīng)用p38MAPK抑制劑能恢復(fù)糖皮質(zhì)激素的敏感性，提示p38MAPK通路參與調(diào)控哮喘的氣道炎癥。

MCP-4是與氣道炎癥密切相關(guān)的趨化因子，可誘導(dǎo)和趨化單核細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞、、、T淋巴細(xì)胞浸潤。Kalayci 等［8］認(rèn)為哮喘慢性緩解期的血漿MCP-4平均水平顯著低于正常人的平均水平，哮喘急性發(fā)作期的血漿MCP-4平均水平也顯著高于慢性緩解期；認(rèn)為MCP-4是評(píng)價(jià)哮喘敏感性以及病情是否惡化的一個(gè)生物指標(biāo)。武帆等［9］研究發(fā)現(xiàn)，哮喘發(fā)作期組患兒血清MCP-4水平明顯高于哮喘緩解組、肺炎組及健康對(duì)照組，MCP-4參與兒童哮喘發(fā)病，并與病情嚴(yán)重程度有關(guān)，其水平可作為兒童哮喘診斷和病情評(píng)價(jià)指標(biāo)。作者前期研究［10］認(rèn)為 ，毛細(xì)支氣管炎患兒急性期血清MCP-4與臨床病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)，認(rèn)為測(cè)定血清MCP-4水平對(duì)判斷毛細(xì)支氣管炎病情嚴(yán)重程度有重要的臨床價(jià)值。本資料也顯示，毛細(xì)支氣管炎患兒急性期外周血中MCP-4水平明顯高于健康對(duì)照組，急性期NPS中MCP-4水平明顯高于恢復(fù)期。

目前尚無p38MAPK與MCP-4相關(guān)性的研究報(bào)道，作者推測(cè)與MCP-1相類似，一方面MCP-4的釋放可激活p38MAPK，另一方面，p38MAPK通過對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控作用，影響MCP-4的表達(dá)、產(chǎn)生。本資料顯示，血清中P-p38MAPK含量與MCP-4含量有顯著正相關(guān)（r=0.609，P＜0.01），且急性期NPS中與MCP-4含量也有顯著正相關(guān)（r=0.742，P＜0.01）。這表明P-p38MAPK與MCP-4密切相關(guān)，可反映毛細(xì)支氣管炎的炎癥情況。綜上所述，作者認(rèn)為毛細(xì)支氣管炎患兒急性期血清、NPS中存在p38MAPK的活化的增加，并與MCP-4密切相關(guān)，提示p38MAPK通路參與調(diào)節(jié)毛細(xì)支氣管炎的氣道炎癥。

1 Cuadrado A, Nebreda AR. Mechanisms and functions of p38 MAPK signalling. Biochem J. 2010, 429(3):403～417.

2 Odaka M, Matsukura S, Kuga H, et al. Differential Regulation of Chemokine Expression by Th1 and Th2 Cytokines and Mechanisms of Eotaxin/CCL-11 Expression in Human Airway Smooth Muscle Cells Int Arch Allergy Immunol. 2007,143(Suppl 1): 84～88.

3 胡亞美,江載芳,諸福棠.實(shí)用兒科學(xué).第七版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2008.1199～1201.

4 Bearman JE, Tal A,Baviski C, et al. Dexamethasone and salbutamol in the treatment of acute wheezing in infants. Pediatrics, 1983,71(1):13～18.

5 Ayala JM, Goyal S, Liverton NJ, et al. Serum-induced monocyte differentiation and monocyte chemotaxis are regulated by the p38 MAP kinase signal transduction pathway. J Leukoc Biol, 2000,67(6):869～875.

6 Bhavsar P, Khorasani N,Hew M, et al. Effect of p38MAPK inhibition on corticosteroid Suppression of cytokine release in severe asthma.,Eur Respir J 2010, 35(4): 750～756.

7 Mercado N, Hakim A, Kobayashi Y, et al. Restoration of corticosteroid sensitivity by p38 mitogen activated protein kinase inhibition in peripheral blood mononuclear cells from severe asthma. PLoS One. 2012,7(7): e41582.

8 Kalayci O, Sonna L A,Woodruff P G, et al. Monocyte Chemotactic Protein-4(MCP-4; CCL-13):A Biomarker of Asthma. J asthma. 2004,41(1):27～33.

9 武帆,孫中厚,衣瑞華,等.哮喘兒童外周血MCP-4、MDC、CysLTs檢測(cè)及臨床意義.中國兒童保健雜志,2013,21,(7),733～736.

10 陳福將,李昌崇,羅運(yùn)春,等. 毛細(xì)支氣管炎患兒血清MCP-4、MDC和IL-4水平及臨床意義.臨床兒科雜志,2007,25(5),361～363.

325000 浙江省溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院呼吸科