歐雁方

(四川省德陽市旌陽區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科，四川德陽 618000)

炎癥性腸病(IBD)指累及直腸、回腸、結(jié)腸的腸道炎性疾病，包括潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病(CD)［1－3］。IBD 的發(fā)病機(jī)制尚未明確，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為腸道黏膜免疫系統(tǒng)異常是IBD發(fā)病的主要原因［4－7］，且受遺傳、環(huán)境、感染等多因素影響。IBD患者主要表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、血便、貧血等［8－10］，嚴(yán)重影響了患者的生活和工作。英夫利西單抗(IFX)是一種新型生物制劑，可減少糖皮質(zhì)激素的使用，促進(jìn)IBD患者黏膜愈合。本研究通過對活動期炎癥性腸病患者給予IFX治療，觀察患者的炎性反應(yīng)及藥物療效，探討英夫利西單抗對活動期炎癥性腸病患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年6月—2014年5月我院收治的活動期炎癥性腸病患者23例為研究對象，男9 例，女14 例，平均年齡(38.9 ±10.3)歲，其中UC患者15例，CD患者8例。選取同期到我院接受體檢的23例正常者作為健康組。入選標(biāo)準(zhǔn):(1)符合中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分會制定的炎癥性腸病診斷標(biāo)準(zhǔn)［11］;(2)炎癥性腸病處于活動期;(3)所有參與者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 所有患者靜脈輸注5 mg·kg－1注射用英夫利西單抗(Cilag AG公司生產(chǎn)，每支100 mg)，首次給藥后的第2、6周再次給予同劑量藥物。采集健康組參與者的空腹靜脈血、UC組及CD組患者治療前后48 h內(nèi)的空腹靜脈血。

1.2.2 檢測方法 淋巴細(xì)胞亞群測定:使用EDTA抗凝管采集兩組患者的靜脈血，反向加樣法在Tru-COUNT管中加入50μL抗凝全血，即吸取血樣時加樣槍打到第2檔，放時打到第1檔。取20μL熒光抗體試劑(上海譜振生物科技公司提供)置于Tru-COUNT管中，室溫下避光放置20 min。加入450 μL FACS溶血素(1×)，充分混勻后室溫下避光放置20 min。利用FACSCanto II clinical軟件(流式細(xì)胞儀配套軟件，可進(jìn)行一管式淋巴細(xì)胞亞群全套分析)分析外周血淋巴細(xì)胞亞群絕對計(jì)數(shù)，包括CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK(CD16+、CD56+)。

C反應(yīng)蛋白(CRP)測定:將1 mL緩沖液加入比濁管中，再加入20μL抗凝全血，混勻后將比濁管置入檢測孔，40s后加入反應(yīng)試劑(CRP試劑盒由上海信然生物技術(shù)公司提供)，充分混勻后測定CRP水平。

血沉(ESR)測定:采用Monitor－20全自動血沉儀(意大利vital生產(chǎn))測定ESR水平。

1.3 療效評定 UC組藥物療效評定［12］:臨床緩解:Mayo評分較治療前降低2分以上，癥狀基本消失;好轉(zhuǎn):Mayo評分較治療前降低2分以上，癥狀部分消失;無效:Mayo評分較治療前降低不足2分。CD組藥物療效評定［13］:臨床緩解:CDAI＜150分;好轉(zhuǎn):CDAI較治療前降低70分;無效:CDAI評分較治療前降低不足70分。UC患者與CD患者的活動度分別采用Mayo評分和CDAI評分進(jìn)行評價。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 運(yùn)用SPSS18.0軟件分別進(jìn)行觀測資料的統(tǒng)計(jì)分析。其中的等級計(jì)數(shù)資料部分，組間比較為秩和檢驗(yàn)。其它計(jì)量資料，多組間的比較為單因素方差分析+多重比較，組內(nèi)前后比較為配對t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)設(shè)定為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 藥物療效 UC組 15例，臨床緩解 5例(33.33%)，好 轉(zhuǎn) 3 例 (20.00%)，無 效 7 例(46.67%)，總有效率為53.33%;CD 組8 例，臨床緩解 1 例(12.50%)，好轉(zhuǎn) 5 例(62.50%)，無效 2例(25.00%)，總有效率為75.00%。見表1。

表1 藥物療效/n(%)

2.2 三組受試者治療后外周血淋巴細(xì)胞亞群比較治療前后 UC組的 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均低于健康組，治療后上述指標(biāo)有所升高，且CD3+、CD4+與健康組的組間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。治療前，CD 組患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK與健康組的組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，治療后，患者 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK明顯升高，且 CD3+、CD4+、CD8+、NK與健康組的組間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表2 三組受試者治療前后外周血淋巴細(xì)胞亞群比較

2.3 14例治療有效和9例治療無效患者治療后的外周血淋巴細(xì)胞亞群比較 兩組患者的CD4+無明顯差異，治療有效組患者的CD3+、CD4+/CD8+、NK較無效組更高，CD8+明顯較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。見表3。

表3 治療有效和治療無效患者治療后的外周血淋巴細(xì)胞亞群比較

2.4 IBD患者治療前后炎癥反應(yīng)及活動度比較治療前，患者 CRP 為(24.96 ±18.73)mg·L－1，ESR 為(27.83 ±10.14)mm·h－1，Mayo 為(12.73±2.09)分，CDAI為(287.34 ±65.98)分;治療后，患者 CRP 為(7.43 ±5.08)mg·L－1，ESR 為(12.76 ±6.42)mm·h－1，Mayo為(6.94 ±2.87)分，CDAI為(127.92 ±60.44)分。治療后，上述指標(biāo)均有明顯改善，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表 4。

表4 IBD患者治療前后炎癥反應(yīng)及活動度比較

3 討論

IBD指腸道炎癥性疾病，其發(fā)病機(jī)制尚不十分明確，目前，腸道免疫調(diào)節(jié)機(jī)制紊亂被認(rèn)為是IBD發(fā)病的直接原因［14］。IBD主要依靠藥物治療，包括氨基水楊酸制劑、免疫抑制劑及糖皮質(zhì)激素［15］。該病的治療理論上應(yīng)根據(jù)患者的分期進(jìn)行，根據(jù)患者病情的嚴(yán)重程度，選取不同的藥物?；颊咴诨顒悠趹?yīng)主要以緩解癥狀、控制炎癥為主，在緩解期則應(yīng)繼續(xù)用藥以維持緩解，避免復(fù)發(fā)。糖皮質(zhì)激素是控制活動期IBD病情最有效的治療藥物，但部分患者可能出現(xiàn)糖皮質(zhì)激素依賴或抵抗［16］。外周血淋巴細(xì)胞亞群的功能及水平變化是IBD研究中的重要指標(biāo)。目前，IBD外周血淋巴細(xì)胞亞群水平的研究仍局限于動物模型，臨床患者的相關(guān)研究較少［17］。本次研究以英夫利西單抗為治療藥物，探討藥物治療對活動期IBD患者的外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響。

研究結(jié)果顯示，UC組總有效率為53.33%，CD組總有效率為75.00%。提示IFX在活動期IBD的治療上具有一定成效。本次研究中，我們著重對IBD患者及健康組入選者的靜脈血淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行了測定。CD3+主要參與T細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)［18］，UC組和CD組CD3+水平均低于健康組，給予IFX治療后CD3+升高，接近正常水平。CD4+在免疫系統(tǒng)中扮演重要角色，IBD患者的CD4+水平低于健康組，提示IBD患者的免疫系統(tǒng)受到了嚴(yán)重?fù)p害，甚至可能引發(fā)感染。UC組治療前后的CD4+并無明顯變化，可能是因?yàn)镃D4+的多個亞群，如Th1、Th17等數(shù)量增減抵消，導(dǎo)致CD4+整體水平變化不明顯。CD8+能夠識別抗原，通過發(fā)揮毒性殺傷作用將靶細(xì)胞溶解，殺傷病毒感染細(xì)胞。UC組和CD組患者的CD8+水平較高，可引發(fā)炎癥，造成腸道組織損傷。治療后患者的CD8+水平降低幅度較小，與健康組仍有明顯差異(P ＜0.05)，這與田雨等［19］的研究結(jié)果相似。為了進(jìn)一步明確IFX對IBD患者CD8+的影響，還需要對CD8+亞群進(jìn)行檢測，進(jìn)行更深入研究。CD4+/CD8+是反映T淋巴細(xì)胞功能的重要指標(biāo)，IBD患者的低CD4+/CD8+水平表明機(jī)體免疫機(jī)制紊亂。治療后患者的CD4+/CD8+比值明顯升高，提示IFX可通過調(diào)節(jié)相關(guān)細(xì)胞因子，改善IBD患者的免疫功能。NK細(xì)胞具有自然殺傷活性，能夠發(fā)揮調(diào)節(jié)免疫、殺傷靶細(xì)胞的作用［20］，是機(jī)體抗感染、抗腫瘤的重要免疫因素。IBD患者的NK水平明顯低于正常值，治療后得到改善，可見IFX可通過增強(qiáng)機(jī)體免疫功能發(fā)揮治療IBD的作用。研究中發(fā)現(xiàn)治療有效組患者的CD3+、CD4+/CD8+、NK較無效組更高，CD8+明顯較低。朱維銘等［21］認(rèn)為，IFX作為TNF-α單抗，可選擇性地清除攻擊腸道黏膜的TNF-α，是IFX發(fā)揮作用的主要機(jī)制。治療結(jié)束后，我們對IBD患者的炎性反應(yīng)及活動度進(jìn)行了評價，結(jié)果顯示，治療前，患者CRP為(24.96±18.73)mg·L－1，ESR 為(27.83 ±10.14)mm·h－1，Mayo為(12.73 ±2.09)分，CDAI為(287.34 ±65.98)分;治療后，患者 CRP 為(7.43 ±5.08)mg·L－1，ESR 為(12.76 ± 6.42)mm·h－1，Mayo 為(6.94 ±2.87)分，CDAI為(127.92 ±60.44)分。治療后，上述指標(biāo)均有明顯改善，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。治療后IBD患者的炎性反應(yīng)降低，活動能力明顯升高，表明IFX在IBD的治療上具有明顯優(yōu)勢。本研究的部分結(jié)果與其他實(shí)驗(yàn)有所出入，可能與淋巴細(xì)胞的影響因素有關(guān)。由于樣本容量較小，研究數(shù)據(jù)難免存在誤差，我們期待更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)研究，為IFX對IBD外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響機(jī)制提供權(quán)威的參考依據(jù)。

本組病例顯示，IFX治療后IBD患者的CD8+水平降低，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK 均有所升高，接近正常水平。我們認(rèn)為，今后在IFX對活動性IBD患者的外周血淋巴細(xì)胞亞群影響方面的研究可著重對CD4+及CD8+的各個亞群進(jìn)行深入分析，以期明確IFX的具體作用機(jī)制。

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