李傳應(yīng)，李 明，王曉秋

(安徽省立醫(yī)院病理科，安徽合肥 230001)

膀胱尿路上皮癌是泌尿系統(tǒng)中最常見(jiàn)的惡性腫瘤，早期發(fā)現(xiàn)并治療能明顯降低患者的死亡率，尋找與膀胱尿路上皮癌有關(guān)的生物學(xué)標(biāo)記物，對(duì)其早期診斷、治療和判斷預(yù)后具有十分重要的意義。近年來(lái)，有關(guān)膀胱尿路上皮癌中分子生物學(xué)標(biāo)記物的研究較多。本研究采用免疫組化的方法檢測(cè)CyclinD1、P53和CK20在正常尿路上皮、尿路上皮良性增生、異型增生及膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)情況，旨在探討其與膀胱尿路上皮癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 臨床標(biāo)本 安徽省立醫(yī)院病理科2009—2013年經(jīng)病理診斷的尿路上皮良性增生8例、異型增生10例、膀胱尿路上皮癌標(biāo)本35例，其中膀胱尿路上皮癌患者中，男性28例，女性7例，年齡42～92歲，平均年齡61歲。病理分級(jí)按WHO分類標(biāo)準(zhǔn)分為低級(jí)別和高級(jí)別，8例尿路上皮異型增生、23例非浸潤(rùn)性膀胱尿路上皮癌(其16例低級(jí)別，7例高級(jí)別)，12例浸潤(rùn)性膀胱尿路上皮癌(其中7例低級(jí)別，5例高級(jí)別)由2位高級(jí)職稱病理專家使用雙盲法再次復(fù)查證實(shí)，15例行全膀胱切除術(shù)，20例行保留膀胱手術(shù)，術(shù)后均隨訪1年以上。8例正常膀胱組織取膀胱良性病變周圍黏膜，8例良性病變分別為4例內(nèi)翻性乳頭狀瘤，4例腺性膀胱炎。

1.2 方法 標(biāo)本經(jīng)10%中性緩沖福爾馬林固定、石蠟包埋、3μm連續(xù)切片，分別進(jìn)行HE染色和免疫組化染色。CyclinD1、P53和CK20鼠源單克隆抗體(中杉公司)的免疫組化染色步驟參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行;二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色;蘇木素復(fù)染;脫水、透明;中性樹(shù)膠封片;以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 CyclinD1、P53以細(xì)胞核染成棕黃色或棕褐色為陽(yáng)性結(jié)果，其中CyclinD1染色時(shí)，尿路上皮全層下1/3細(xì)胞核著色視為陰性;P53只有細(xì)胞核呈棕黃色時(shí)才視為陽(yáng)性。CK20以細(xì)胞膜著棕黃色或棕褐色為陽(yáng)性結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)處理 對(duì)各組中CyclinD1、P53和CK20的表達(dá)情況采用SPSS13.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

CyclinD1、P53、CK20在各組研究對(duì)象中的表達(dá)情況見(jiàn)表1及圖1。

表1 CyclinD1、P53及CK20在正常尿路上皮及尿路上皮病變中的表達(dá)

3 討論

CyclinD1是細(xì)胞周期G1/S期過(guò)渡檢查點(diǎn)的一個(gè)重要基因，在細(xì)胞信號(hào)通路上屬于癌基因STAT3的一個(gè)下游靶基因及該信號(hào)通路中的關(guān)鍵因子，CyclinD1調(diào)控細(xì)胞增殖是通過(guò)刺激細(xì)胞周期素依賴性激酶4(CDK4)從而介導(dǎo)Rb基因蛋白產(chǎn)物的磷酸化，解除Rb對(duì)轉(zhuǎn)錄因子E2F的抑制效應(yīng)，使細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期的分裂程序的。因此，CyclinD1的表達(dá)上調(diào)可以使細(xì)胞進(jìn)入失控性生長(zhǎng)［1－2］。本實(shí)驗(yàn)及曾文利［3］研究發(fā)現(xiàn)，CyclinD1在膀胱尿路上皮癌及異型增生組織中表達(dá)強(qiáng)于良性增生及正常尿路上皮，推測(cè)其機(jī)制很可能是由于CyclinD1過(guò)表達(dá)導(dǎo)致尿路上皮細(xì)胞自主生長(zhǎng)，從而發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，成為腫瘤發(fā)生的早期事件［3－5］，在低級(jí)別與高級(jí)別尿路上皮癌中CyclinD1表達(dá)情況有顯著差異，推測(cè)其原因可能是隨著低級(jí)別尿路上皮癌進(jìn)一步向高級(jí)別發(fā)展，CyclinD1基因的作用逐漸減弱，而突變型P53及其他癌基因的作用占主導(dǎo)地位;或者在高級(jí)別尿路上皮癌的發(fā)生過(guò)程中，CyclinD1基因僅占次要的作用等;P53是常見(jiàn)的抑癌基因，位于人類17p13.1，全長(zhǎng)約16～20 kb。很多臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)P53的突變與一些腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)［6－9］，在膀胱癌中的表達(dá)明顯高于正常組織，并且與腫瘤的分級(jí)相關(guān)［10］，本實(shí)驗(yàn)也得出相似的結(jié)論，P53基因表達(dá)與膀胱尿路上皮癌的發(fā)生、生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等均有相關(guān)性［11］，其機(jī)制可能是P53基因突變其空間構(gòu)象發(fā)生改變，失去對(duì)細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)、凋亡的正常調(diào)控作用，并可能變成癌基因，能夠誘導(dǎo)和促進(jìn)腫瘤組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管生成，導(dǎo)致腫瘤的演進(jìn)、轉(zhuǎn)移等。CK20是構(gòu)成細(xì)胞骨架的重要物質(zhì)，為I型角蛋白的一種，含有424個(gè)氨基酸，分子量48 553，一般僅僅表達(dá)于上皮細(xì)胞。正常情況下尿路上皮中僅表層傘細(xì)胞或偶爾情況下中間層細(xì)胞表達(dá)CK20［12］，有人發(fā)現(xiàn)在尿路上皮傘細(xì)胞漿中有大量呈纖維狀的CK20染色體，隨著上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，腫瘤性尿路上皮細(xì)胞中CK20的表達(dá)失去這種模式，這是細(xì)胞角蛋白一系列改組后重建過(guò)程，這種現(xiàn)象可能是上皮細(xì)胞為了適應(yīng)形態(tài)和功能變化而發(fā)生的改變。本研究和既往的研究均發(fā)現(xiàn)CK20在膀胱尿路上皮病變中的表達(dá)具有較高的特異性和敏感性，而且有“僅表達(dá)在惡性尿路上皮”的特點(diǎn)［13］，表達(dá)強(qiáng)度往往與膀胱尿路上皮癌的分級(jí)有明顯的關(guān)系［12］。Moll等［14］用免疫組化方法研究711例原發(fā)和轉(zhuǎn)移性腫瘤也發(fā)現(xiàn)，CK20陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的數(shù)目在不同級(jí)別尿路上皮癌組織中變化很大，其不同染色強(qiáng)度，可能反映出腫瘤細(xì)胞侵襲力和轉(zhuǎn)移力的強(qiáng)弱，與尿路上皮癌的分級(jí)相關(guān)，由于CK20在膀胱尿路上皮癌中的重要價(jià)值，有人通過(guò)檢測(cè)尿液中CK20 mRNA的量來(lái)監(jiān)測(cè)腫瘤是否早期復(fù)發(fā)［15］，具有重要的臨床價(jià)值。

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