成 彥，陳 偉

(1.江蘇省南京市中醫(yī)醫(yī)院，江蘇南京 210000;2.江蘇省蘇州市中醫(yī)醫(yī)院，江蘇 蘇州 215009)

復方血栓通膠囊是由中山眼科中心與廣東眾生藥業(yè)股份有限公司聯(lián)合研制的純中藥復方制劑，處方由君藥三七、臣藥丹參、佐使藥黃芪和玄參組成，具有活血化瘀、益氣養(yǎng)陰的功效，臨床上常用于治療血疲兼氣陰兩虛證的視網(wǎng)膜靜脈阻塞，癥見視力下降或視覺異常，眼底疾血征象，神疲乏力，嘲干，口干等?，F(xiàn)代藥理學研究表明該制劑具有擴張血管，提高肌體抗缺氧能力，降低血液黏度，促進血液循環(huán)，改善微循環(huán)等作用。大量研究證實，復方血栓通膠囊對于治療眼科疾病尤其是糖尿病視網(wǎng)膜病變具有顯著的療效［1－6］。2010年版《中國藥典》對該制劑的質量標準進行了修訂［7］，采用HPLC法測定人參皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1的總量作為其含量測定控制項，隨著藥學研究的不斷深入，對中藥復方制劑的質量控制要求越來越高，舊的標準應當不斷的提高。該藥所用的君藥三七，其總皂苷組成并非只有人參皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1這三種皂苷，故筆者參考另一制劑血栓通注射液質量標準，擬建立HPLC法同時測定5種皂苷類成分，以期更準確地反映復方血栓通膠囊的質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters2695液相色譜儀(Waters 2489紫外檢測器，EmpowerⅡ色譜工作站);Mettler Toledo XS105DU十萬分之一電子天平;KQ－400GKDV超聲波清洗機。

1.2 試藥 三七皂苷R1(批號:201318)、人參皂苷Rg1(批號:201128)、人參皂苷 Re(批號:200822)、人參皂苷Rb1(批號:201223)、人參皂苷Rd(批號:201001)均購自中國藥品生物制品檢定所。復方血栓通膠囊(廣東眾生藥業(yè)股份有限公司10個批次產(chǎn)品，批號為120523、121022、121134、121221、130213、130421、130512、130622、130714、130813)。甲醇、乙腈為色譜純(德國Merk公司)，試驗用水為超純水(美國Millipore公司)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:YMC－Pack Pro C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);以乙腈為流動相 A，水為流動相B，按表1梯度洗脫;檢測波長為203 nm;柱溫為 35 ℃;流速為1.0 mL·min－1。

表1 流動相梯度洗脫程序

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液的配制 精密稱取三七總皂苷對照提取物12.55 mg，置5 mL量瓶中，加甲醇適量使溶解，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。精密稱取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd對照品適量，加甲醇分別制成每毫升含三七皂苷 R10.501 0 mg、人參皂苷 Rg11.510 2mg、人參皂苷 Re 0.320 1 mg、人參皂苷 Rb11.022 3mg、人參皂苷 Rd 0.163 2 mg 的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的配制 取供試品，研細，混勻，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)45 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 空白溶液 以溶劑甲醇為空白，按照“2.1”的色譜條件，進樣10μL。

2.2.4 測定法 精密吸取上述溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。三七皂苷R1對照品峰的理論板數(shù)為15 139，主峰和雜質峰分離良好，分離度為11.1，拖尾因子1.01，色譜圖見圖1 ～3。

2.3 方法學考查

2.3.1 線性關系考查 分別精密吸取上述對照品溶液1、2、4、8、10 μL，注入液相色譜儀，以進樣量(ng)為橫坐標X，峰面積為縱坐標Y，繪制標準曲線并進行回歸計算，五種對照品的線性方程、相關系數(shù)、檢測范圍見表2。

表2 線性方程、相關系數(shù)、檢測范圍

2.3.2 精密度試驗 精密量取對照品溶液10μL，重復進樣6次，測得對照品溶液峰面積，5種組分峰面積積分值的 RSD 分別為0.05%，0.03%，0.11%，0.69%，0.07%。表明儀器精密度較好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗 取同一對照品溶液，分別于0、2、4、8、16、24 h 各取10 μL 進樣，測定對照品溶液中5個對照品峰面積，計算RSD，以此來測定5種皂苷在室溫條件下的穩(wěn)定性，其測得對照品的峰面積值積分的 RSD 分別為 0.07%，0.10%，0.12%，0.07%，0.21%。表明對照品溶液在室溫條件下24 h內穩(wěn)定。

2.3.4 重復性試驗 精密量取同一批復方血栓通膠囊樣品(批號:120523)，按“2.2.2”項下方法制備6份供試品溶液，按上述色譜條件，分別測定5個皂苷峰面積，其 RSD 分別為 1.01%，0.98%，0.79%，1.03%，1.15%。表明該方法重復性好。

2.3.5 定量限試驗 將上述對照品溶液分別稀釋后進樣，根據(jù)峰高以信噪比S/N=10確定定量限。三七皂苷 R1為5.43 ng、人參皂苷 Rg1為 4.34 ng、人參皂苷 Re為3.44 ng、人參皂苷 Rb1為 3.56 ng、人參皂苷Rd為5.78 ng。

2.3.6 檢測限試驗 同定量限測定方法，根據(jù)峰高以信噪比S/N=3確定檢測限。三七皂苷R1為1.81 ng、人參皂苷 Rg1為 1.45 ng、人參皂苷 Re 為1.15 ng、人參皂苷 Rb1為 1.19 ng、人參皂苷 Rd 為1.93 ng。

2.3.7 加樣回收率試驗 精密稱定已知含量的樣品(取重復性項下的復方血栓通膠囊樣品，批號:120523，每粒含三七皂苷R11.71 mg，人參皂苷Rg110.42 mg、Re 為0.40 mg、Rb15.23 mg、Rd 0.67 mg)6份，每份0.25 g，置具塞錐形瓶中，精密加入一定量的5種皂苷類對照品，按“2.2.2”項下方法制備，精密吸取上述溶液各10μL進樣，計算回收率，結果見表3～7。

表3 三七皂苷R1加樣回收率

表4 人參皂苷Rg1加樣回收率

表5 人參皂苷Re加樣回收率

表6 人參皂苷Rb1加樣回收率

表7 人參皂苷Rd加樣回收率

2.3.8 樣品測定 測定10批復方血栓通膠囊中5種皂苷類成分含量，結果顯示，10批樣品三七總皂苷含量波動較小，且都符合標準規(guī)定的每粒含三七總皂苷為9.0 mg，表明該制劑的原料選擇較為嚴格，工藝較為穩(wěn)定(見表8)。

表8 樣品含量測定結果/mg·粒－1

3 討論

復方血栓通膠囊臨床上廣泛應用于血瘀兼氣陰兩虛證所致的視網(wǎng)膜靜脈阻塞的治療，其中三七皂苷類化合物是活血化瘀藥發(fā)揮藥效的主要物質基礎。本實驗針對復方血栓通膠囊中君藥三七主要成分進行含量測定方法的探究，在原標準的基礎上，增加了人參皂苷Rb1及人參皂苷Rd兩個成分的含量測定，使得三七總皂苷的成分監(jiān)測組達到5個，更為全面地反映了主成分含量。并進行方法學驗證，結果表明本方法簡便，專屬性強，準確，重復性好，可用于該制劑的質量控制［8］。

此外，藥效學實驗表明丹參的水溶性類成分為其活血化瘀的有效成分［9］，復方血栓通膠囊中臣藥丹參，也應當是質量標準控制的重點。后續(xù)研究可增加丹參中有效成分丹參素、丹酚酸B、丹參酮Ⅰ、丹參酮Ⅱ、隱丹參酮等的含量測定［10］。黃芪中的黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷，玄參的中哈巴俄苷也可作為標準提升點［11］?？山梃b“一測多評”的理念［12－14］，通過一個對照品的檢測，來實現(xiàn)該成方制劑的多組分同步測定，具有準確、簡便、經(jīng)濟實用等優(yōu)點，是適合中藥特點多指標質量評價的新方法，為更全面評價復方血栓通膠囊的質量提供科學依據(jù)。

［1］聶勇勝，文 思，劉 靜，等.復方血栓通膠囊抗血栓作用的實驗研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2014，20(8):178－181.

［2］李 辛，錢 峰，劉利娟.復方血栓通膠囊治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的療效觀察［J］.中國醫(yī)藥指南，2012，10(12):666－667.

［3］劉忠政，梁潔萍，聶怡初，等.復方血栓通膠囊基于血液循環(huán)和凝血過程相關靶點的網(wǎng)絡藥理學研究［J］.中山大學學報(自然科學版)，2013，52(2):97－100.

［4］鄭燕林，孫麗萍，喬利峰.中醫(yī)分期治療視網(wǎng)膜靜脈阻塞療效觀察［J］.中國中醫(yī)眼科雜志，2009，19(1):24－27.

［5］郭翠玲，趙仲平，湯愛燦，等.激光聯(lián)合復方血栓通膠囊治療糖尿病視網(wǎng)膜病變合并黃斑水腫的療效觀察［J］.廣東醫(yī)學，2009，30(2):295－296.

［6］陳彩燕.復方血栓通膠囊對后段眼內異物玻璃體切割術后視功能恢復的療效觀察［D］.福州:福建中醫(yī)藥大學，2012.

［7］國家藥典委員會.中國藥典(一部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:901－910.

［8］朱福海.HPLC法測定益膽膠囊中甘草酸的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2014，18(10):1852－1854.

［9］張海江，袁日琴，胡靜雅.復方丹參片中三七皂苷成分組成的SPE－HPLC－MS法測定［J］.時珍國醫(yī)國藥，2011，22(9):2174－2176.

［10］梁潔萍，劉忠政，彭 維，等.復方血栓通膠囊HPLC指紋圖譜質量控制方法研究［J］.中藥材，2012，35(11):1854－1858.

［11］蔡海霞，陳 君，李 萍.一測多評法測定黃芪中4種異黃酮的含量［J］.中國中藥雜志，2010，35(20):2712－2717.

［12］于素云，楊立華，王 源，等.一測多評法在復方血栓通膠囊8種成分檢測中的應用［J］.國際藥學研究雜志，2014，41(2):231－237.

［13］王超群，賈秀虹，陳 季，等.中藥三七“一測多評”質量控制方法的系統(tǒng)研究［J］.中國中藥雜志，2012，37(22):3438－3445.

［14］高慧敏，宋宗華，王智民，等.適合中藥特點的質量評價模式——QAMS研究概述［J］.中國中藥雜志，2012，37(4):405－416.