李穎　吳斌　嚴(yán)錦賢　李宗

[摘要] 目的 對(duì)福建建陽(yáng)小湖采集的魚(yú)腥草4個(gè)不同部位（根、莖、葉、果實(shí)）揮發(fā)性成分進(jìn)行分析、比較，為選擇適宜的用藥部位，改進(jìn)魚(yú)腥草相關(guān)制劑制備工藝、提高質(zhì)量水平提供研究思路和方法學(xué)參考。 方法 收集指定產(chǎn)地魚(yú)腥草的不同部位，采用頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜（HS-SPME-GC-MS）對(duì)其所含的揮發(fā)性成分分別提取、分離、鑒定，采用歸一化法測(cè)定成分的相對(duì)含量，并進(jìn)行比對(duì)。 結(jié)果 魚(yú)腥草藥材不同部位所含揮發(fā)性成分的種類和相對(duì)含量均存在較大差異，其中藥效成分魚(yú)腥草素、甲基正壬酮在果實(shí)中含量最高，其他部位含量則相對(duì)較低。 結(jié)論 魚(yú)腥草不同部位揮發(fā)性成分的差異表明規(guī)范中藥材入藥部位和采收季節(jié)的重要性，在中藥制劑生產(chǎn)過(guò)程中須嚴(yán)格把關(guān)，確保臨床療效和用藥安全性。

[關(guān)鍵詞] 魚(yú)腥草；部位；頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜；成分分析

[中圖分類號(hào)] R284.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2015）19-54-04

[Abstract] Objective To perform qualitative and quantitative analysis on the volatile components in different parts（root，stem，leaf and flower）of Herba Houttuyniae sourced from Xiaohu Jianyang.To provides research ideas and methods for choosing appropriate medicinal parts and improving the preparation process and quality level. Methods The different parts of Herba Houttuyniae sourced from Xiaohu Jianyang were collected.The volatile component were analyzed by HS-SPME-GC-MS，and the relative percentage content of each component was calculate with peak area normalization method. Results The volatile components in Herba Houttuyniae had remarkable differences because of the different parts. As the effective components in Herba Houttuyniae， it was indicated that the content of both acetaldehyde and methyl-n-nonyl-ketone were the highest in fruits and relatively lower in other parts of Herba Houttuyniae. Conclusion Standardized medicinal part and collecting seasons of traditional Chinese medicine was important because of the volatile constituents difference from different parts of Herba Houttuyniae.It was necessary to inspect and check in Preparation of Chinese medicine.The clinical curative effect and medication security must be guaranteed.

[Key words] Herba Houttuyniae；Parts；HS-SPME-GC-MS；Contents comparison

參照以往研究者對(duì)中藥材及中藥制劑的研究工作，中藥材相同產(chǎn)地、同一品種、不同部位所含成分的種類和相對(duì)含量往往不盡相同[1-6]。中藥材的入藥部位不同，制成的制劑質(zhì)量必然存在差異，這種差異很可能影響該中藥制劑的臨床療效甚致安全性[7-12]。因此，有必要用一種被證實(shí)穩(wěn)定、有效、

可行的質(zhì)量分析方法對(duì)同種中藥材不同部位的成分進(jìn)行提取、比較，辨明其中的差異性，以優(yōu)選中藥材的用藥部位，提高中藥制劑質(zhì)量和臨床療效，盡可能降低甚至消除中藥制劑的不良反應(yīng)。本研究在前期研究先后建立了魚(yú)腥草注射液中甲基正壬酮的含量測(cè)定方法[13]、采用HS-SPME-GC-MS檢測(cè)9 個(gè)不同種質(zhì)來(lái)源魚(yú)腥草揮發(fā)性成分，建立了成熟的魚(yú)腥草成分分析方法[14]的基礎(chǔ)上，對(duì)福建建陽(yáng)小湖魚(yú)腥草GAP研究及標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)示范基地種植的魚(yú)腥草4個(gè)不同部位（根、莖、葉、果實(shí)）所含揮發(fā)性成分進(jìn)行進(jìn)一步系統(tǒng)性研究、比較，為優(yōu)選魚(yú)腥草適宜的用藥部位、提高魚(yú)腥草制劑的質(zhì)量水平、臨床療效和用藥安全性奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用魚(yú)腥草單株材料采自福建建陽(yáng)小湖魚(yú)腥草GAP研究及標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)示范基地，生長(zhǎng)期2年，采收期為種植次年6月果實(shí)初熟時(shí)，采集帶花、果的全草，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)倪立堅(jiān)副主任藥師鑒定為魚(yú)腥草（Herba Houttuyniae）。

1.2 儀器

Agilent 6890N氣相色譜儀（美國(guó)安捷倫）；Thermo Polaris Q氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Thermo-Finnegan）；色譜柱：HP-5 MS毛細(xì)管色譜柱（30m×0.25mm，0.25μm）（美國(guó)安捷倫）；SPME萃取手柄、聚二甲基硅氧烷（PDMS，100μm）萃取頭、20 mL頂空取樣瓶、聚四氟乙烯瓶塞（美國(guó)Supelco）；HHS型數(shù)顯恒溫水?。ㄉ虾２┭笇?shí)業(yè)有限公司）；BT125D型分析天平（賽多利斯公司），AL104型分析天平（梅特勒-托利多公司）。endprint

1.3 實(shí)驗(yàn)條件與方法[15]

1.3.1 色譜條件 色譜柱HP-5 MS毛細(xì)管色譜柱（30m×0.25mm，0.25μm）；載氣為氦氣；進(jìn)樣口溫度250℃；升溫程序：初始溫度60℃，保持5min，以6℃/min升溫至240℃；恒流模式，流速0.8mL/min，不分流。

1.3.2 質(zhì)譜條件 電子轟擊（EI）離子源；電子能量70ev；離子阱溫度230℃；質(zhì)量掃描范圍m/z 30～500amu。

1.3.3 頂空固相微萃取-氣質(zhì)聯(lián)用法（HS-SPME-GC-MS）比較、分析小湖魚(yú)腥草不同部位的揮發(fā)性成分 取小湖產(chǎn)魚(yú)腥草全草，分別篩選不同部位（根、莖、葉、果實(shí)），剪碎，各稱取0.5g，置20mL頂空取樣瓶中，加蓋聚四氟乙烯瓶塞，水浴加熱至55℃預(yù)平衡40min，于55℃下以100μm PDMS固相微萃取頭頂空萃取40min，萃取完畢后在氣相色譜進(jìn)樣口以250℃解吸附30s，按“3.1、3.2”項(xiàng)條件進(jìn)行GC-MS成分分析，結(jié)合NIST98標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)檢索結(jié)合人工譜圖解析，分離、鑒定魚(yú)腥草4個(gè)部位所含的揮發(fā)性成分，以面積歸一化法計(jì)算各組分的相對(duì)含量。

2 結(jié)果

2.1 成分分析

小湖產(chǎn)魚(yú)腥草不同部位（根、莖、葉、果實(shí)）揮發(fā)性成分相對(duì)含量。見(jiàn)表1。

2.2 樣品魚(yú)腥草藥材各部位含量

本研究樣品魚(yú)腥草藥材各部位含量較高的成分包括萜類、醇類、醛酮類、脂肪酸等，這4類成分分別占不同部位提取出揮發(fā)性成分總量的66.9%、60.4%、69.0%和57.7%。其他成分，如酯類、烷烴、烯烴等，含量則相對(duì)較低。其中，魚(yú)腥草根部含量最高的組分為龍腦（9.09%），其余主要揮發(fā)性成分相對(duì)含量從高到低依次為：α-萜品醇（8.99%）、魚(yú)腥草素（8.94%）、1-癸醇（8.69%）；莖含量最高組分為α-萜品醇（11.51%），其次為：1-癸醇（10.57%）、魚(yú)腥草素（7.05%）、甲基正壬酮（5.92%）、乙酸香芹酯（5.88%）；葉中含量最高的成分是甲基正壬酮（9.12%），其次是：乙酸冰片酯（6.73%）、二異丁基丁二酸酯（6.16%）、d-檸檬烯（5.42%）、α-萜品醇（5.27%）；果實(shí)含量最高的組分是1-癸醇（17.55%），其次是：α-萜品醇（15.82%）、甲基正壬酮（13.62%）、魚(yú)腥草素（11.61%）、石竹烯（4.42%）、亞麻酸（4.01%）。

2.3 HS-SPME-GC-MS提取、鑒定

小湖產(chǎn)魚(yú)腥草的根、莖、葉、果實(shí)4個(gè)部位所含揮發(fā)性成分的種類分別為66種、61種、56種、55種，其中有36種成分是4 個(gè)部位共同含有的，共有化合物的總峰面積占檢出揮發(fā)性成分總峰面積的百分比分別為：75.2%、80.7%、83.3%和88.5%。

2.4 魚(yú)腥草主要有效成分

魚(yú)腥草主要有效成分為魚(yú)腥草素和甲基正壬酮。對(duì)不同部位的橫向?qū)Ρ蕊@示，這2種成分均在本試驗(yàn)樣品果實(shí)中含量最高，而在其他部位含量則相對(duì)較低。甲基正壬酮有40.8%來(lái)自果實(shí)，其余部位含量依次為：根14.2%、葉2.7%、莖1.8%；魚(yú)腥草素有36.3%來(lái)源于果實(shí)，其余部位含量依次為：葉13.8%、根2.8%、莖2.2%。

3 討論

本試驗(yàn)采用HS-SPME-GC-MS技術(shù)成功地對(duì)魚(yú)腥草4個(gè)不同部位進(jìn)行揮發(fā)性成分分離分析，表明該方法簡(jiǎn)便、快速、環(huán)保、準(zhǔn)確、穩(wěn)定，適用于中藥樣品揮發(fā)性成分研究。魚(yú)腥草揮發(fā)性成分主要由萜類、醇類、醛酮類、脂肪酸等4類組成，此結(jié)論與其他研究者先前的成分分析試驗(yàn)結(jié)果相吻合[16]。成分分析結(jié)果提示魚(yú)腥草藥材的采收需要考量季節(jié)因素，在藥材適當(dāng)?shù)陌l(fā)育期進(jìn)行。由“2.4”結(jié)果可以看出，主要有效成分魚(yú)腥草素、甲基正壬酮均在果實(shí)中分布最多，而在植株其他部位分布甚少，因此考慮最佳采收期為花期至之后的一個(gè)月。入藥部位不同導(dǎo)致的成分差異與魚(yú)腥草制劑療效及安全性的相關(guān)度有待進(jìn)一步探討。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，李勝華等[17]曾對(duì)比魚(yú)腥草不同發(fā)育期揮發(fā)油含量，得出花果后期揮發(fā)油達(dá)到最高，枯葉期含量最低的結(jié)論，從另一個(gè)側(cè)面印證了本研究所得之結(jié)論，但該試驗(yàn)并未深入進(jìn)行。延續(xù)該研究者的思路，筆者推斷隨著植株的生長(zhǎng)發(fā)育，不同生長(zhǎng)年限的魚(yú)腥草揮發(fā)性成分的種類、相對(duì)含量以及魚(yú)腥草素、甲基正壬酮等2種主要有效成分的含量很有可能呈現(xiàn)一個(gè)動(dòng)態(tài)變化的過(guò)程，延續(xù)該假設(shè)的思路，本研究將展開(kāi)后續(xù)研究。值得注意的是，楊文凡等[18]用水蒸氣蒸餾法分別提取魚(yú)腥草莖、葉中揮發(fā)性成分，通過(guò)GC-MS加以鑒定，檢出表藍(lán)桉醇、異植醇、氧化石竹烯、六氫金合歡基丙酮、橙花叔醇等5 種成分（相對(duì)百分含量>1%），而本課題對(duì)莖、葉的成分分析未檢出以上5 種化合物；此外，本課題新發(fā)現(xiàn)莖、葉中所含的3-蒈烯、乙酸香芹酯、2-十三烷酮等3 種相對(duì)含量較高的成分未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，屬首次發(fā)現(xiàn)。以上成分差異可能同藥材品種、產(chǎn)地、采收季節(jié)、干燥程度及揮發(fā)性成分提取手段不同有關(guān)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 梁歡，胡志剛，盧金清，等.不同生長(zhǎng)年限和不同部位金釵石斛中石斛堿含量比較與分析[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2014，16（2）：335-338.

[2] 劉衛(wèi)根，王亮生，周國(guó)英，等.羌活不同部位有機(jī)酸和香豆素類化合物含量的比較研究[J].藥物分析雜志，2012，32（11）：1950-1956，1967.

[3] 周濤，張小波，郭蘭萍，等.粗毛淫羊藿不同部位、不同生境中淫羊藿苷、總黃酮含量的變化分析[J].中國(guó)中藥 雜志，2012，37（13）：1917-1921.

[4] 田浩，石瑤，吳麗華，等.不同產(chǎn)地不同部位云黃連生物堿成分累積研究[J].云南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2012，34（5）：570-576.

[5] 李建蕊，陳建波，周群，等.中藥三七不同部位和組織的紅外光譜分析[J].光譜學(xué)與光譜分析，2014，34（3）：634-637.

[6] 楊敏麗，王麗婷.金銀花不同品種及不同部位木犀草素含量的比較[J].中華中醫(yī)藥雜志，2007，22（10）：666-668.

[7] 盛昌翠.蒼耳子不同部位毒性評(píng)價(jià)及成分分析[D].武漢：湖北中醫(yī)藥大學(xué)，2014：30-49.

[8] 閆婕.馬爾康柴胡不同部位藥用價(jià)值評(píng)價(jià)研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2014：42-56.

[9] 吳麗莉.驅(qū)蚊草不同部位抗氧化系統(tǒng)的研究[D].重慶：西南大學(xué)，2008：37-50.

[10] 楊文雁，石孟瓊，龔學(xué)謙，等.威靈仙不同部位對(duì)小鼠耳廓微循環(huán)的影響[J].中藥材，2013，36（8）：1316-1321.

[11] 柏冬，牛曉紅，范斌，等.桂枝湯在腸道不同部位的吸收研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2010，21（2）：167-170.

[12] 王健，薛山，趙國(guó)華，等.紫蘇不同部位精油成分及體外抗氧化能力的比較研究[J].食品科學(xué)，2013，34（7）：86-91.

[13] 嚴(yán)輝，段金廒，尚爾鑫，等.當(dāng)歸不同部位入藥功效取向差異的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)與藥性關(guān)聯(lián)性研究[J].中草藥，2014，45（21）：3208-3212.

[14] 李穎，鄭申西，李宗.頂空固相微萃取-氣相色譜法測(cè)定魚(yú)腥草注射液中甲基正壬酮含量[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2008，10（4）：26-28，41.

[15] 李穎，曾茂貴，王頌，等.頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜法對(duì)不同種質(zhì)類型魚(yú)腥草揮發(fā)性成分的比較研究[J].中藥材，2014，37（8）：1349-1352.

[16] 劉素紅，王呈仲，蘇越，等.保留指數(shù)結(jié)合準(zhǔn)確質(zhì)量測(cè)定對(duì)魚(yú)腥草揮發(fā)性成分的定性分析[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2010，29（2）：126-130.

[17] 李勝華.魚(yú)腥草化學(xué)成分與抑菌作用研究[D].貴陽(yáng)：貴州大學(xué)，2006：47-54.

[18] 楊文凡，陳勇，程翼宇.魚(yú)腥草不同部位揮發(fā)油成分的研究[J].中草藥，2006，37（8）：1149-1151.

（收稿日期：2015-07-06）endprint