劉培洪

(遵義市第一人民醫(yī)院 藥劑科，貴州 遵義 563000)

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中藥特征圖譜技術(shù)在中藥材鑒定中的應用

劉培洪

(遵義市第一人民醫(yī)院 藥劑科，貴州 遵義 563000)

目的：探究中藥特征圖譜技術(shù)在中藥材鑒定中的應用及有效性。方法：回顧性分析中藥特征圖譜技術(shù)在中藥材鑒定中的應用效果。結(jié)果：與傳統(tǒng)中藥藥材鑒定方法比較，特征圖譜法具有明顯優(yōu)勢，尤其在準確率方面意義深遠，藥物鑒定過程不會受到藥品形態(tài)的限制，穩(wěn)定性、精準度、可靠性能夠得到極大的保證。結(jié)論：中藥特征圖譜技術(shù)在中藥材鑒定中值得推廣應用。

中藥；特征圖譜技術(shù)；中藥材鑒定

近年來，中藥特征圖譜技術(shù)從模糊理念的角度出發(fā)，為中藥鑒別提供了有效的參考依據(jù)。中藥特征圖譜技術(shù)是指藥材經(jīng)一定手段處理后，通過某些分析儀和檢測儀獲得藥材中各種成分的群體特征圖譜，是一種采用量化方法的重要真?zhèn)伪鎰e方式[1]。在藥材質(zhì)量評定方面該技術(shù)穩(wěn)定性較好，一般分為生物特征圖譜和化學特征圖譜兩類，其中生物特征圖譜通過分子標記技術(shù)對藥材的遺傳性特征進行分析，化學特征圖譜通過色譜及光譜等技術(shù)對藥材化學性質(zhì)進行鑒定。

1 生物特征圖譜

生物特征圖譜主要有蛋白質(zhì)電泳特征圖譜和DNA特征圖譜兩種，目前醫(yī)學界多采用后者進行中藥鑒定。DNA特征圖譜根據(jù)生物所獨有的DNA序列特性，在現(xiàn)代生物科學先進技術(shù)的支持下利用特異DNA線條將生物DNA序列表示出來。DNA序列的優(yōu)勢在于信息量較大，且不會受到外界的干擾(如隨著生物的發(fā)育和發(fā)展器官組織的變化)，也就是說某一特定生物的DNA具有穩(wěn)定性且任一細胞的DNA是相同的，即含同樣的信息[2]，可通過DNA實現(xiàn)物種種類的區(qū)分，還能從DNA信息中分析生物是否發(fā)生變異。因此，DNA特征圖譜在中藥材鑒定中具有重要價值，應用前景廣闊。

1.1 隨機擴增性多臺DNA技術(shù)

隨機擴增性DNA技術(shù)是指采用隨機合成的方式對某一引物在低溫環(huán)境下進行DNA序列模板的隨機配對完成擴增操作，得到中藥藥材DNA特征圖譜，對顯示藥材基因的特征圖譜進行動態(tài)分析。有研究學者利用隨機擴增性DNA技術(shù)對植物基因樣本進行分析后得到較清晰的特征圖譜，并根據(jù)瓊脂上顯示的DNA帶型分別確定偽造品、凹葉厚樸和厚樸及混淆品，基本沒有鑒定方面誤差，在研究中藥材的真?zhèn)涡苑矫婢哂袠O高的實用性價值。目前，隨機擴增性DNA技術(shù)是使用最為廣泛的DNA特征圖譜手段。

1.2 DNA直接測序法

DNA直接測序法是指把提取到的DNA微量樣本通過PCR技術(shù)進行擴增，得到的樣品進行電泳和染色操作，在紫外線燈管照射下觀察擴增后DNA特異區(qū)域帶，利用雙脫氧鏈終止法分析DNA序列，與偽造藥材DNA序列進行比對，觀察差異。該技術(shù)可應用于真假藥材的鑒定與辨別，使用較多的DNA序列主要包括12S rRNA、18S rRNA和26S rRNA等。劉玉萍等[3]通過DNA直接測序法對山藥和其他地區(qū)幾種慣用土山藥(包括廣山藥、放山藥和土山藥等)的12S rRNA的核苷酸基因序列進行比較，結(jié)果表明該方法可對不同品種的山藥進行區(qū)別和分類，且可較清晰反映同組但不同種類近緣植物的差異，最終達到近似藥物區(qū)分的目的。

2 化學特征圖譜

化學特征圖譜法是在中藥成分研究基礎上建立起來的中藥鑒定法，在實際操作中采用化學分析手段和軟件分析法對同一種藥材的群體化學成分進行分析，能有效確定中藥材的品種、產(chǎn)地及真?zhèn)涡?，還能幫助確定藥品的主要特征，如特征峰峰值面積、相似度、比例等。中藥材化學特征圖譜鑒定方法主要有色譜法、光譜法。

色譜法為中藥材化學成分測定的最常見方法，其中效果最好的是高效液相色譜法(HPLC)，具有分離效果好、精準度高等特點，是一種封閉性分析法，受到外界影響較小，色譜圖像穩(wěn)定，因此藥品鑒別能力也高于其他方法。李淼等[4]利用高效液相色譜法鑒定紅蓼花、葉莖醋酸乙酯部位，研究發(fā)現(xiàn)實驗所采用的7個樣品形似度高于0.95，其他3個偽造品相似度不足0.9，說明正品和偽造品的差異較為明顯[5]，可有效區(qū)分正品和偽造皮。

光譜法主要包括紅外線光譜法和核磁共振譜法，其中紅外線光譜法應用范圍較廣。中藥材紅外線光譜法鑒定中，對研究樣品各種化學成分的紅外線光譜予以疊加操作，比例較穩(wěn)定時其紅外線光譜也趨于穩(wěn)定，研究表明紅外線圖譜具有較優(yōu)越的指紋特性。學者專家在利用紅外線光譜指紋特性進行山藥樣品真?zhèn)涡澡b定時，發(fā)現(xiàn)構(gòu)建的紅外線圖譜對山藥化學性征的提取具有顯著效果，可直接根據(jù)圖譜區(qū)分正品和次品。

3 中藥特征圖譜技術(shù)應用存在的問題及發(fā)展趨勢

與傳統(tǒng)中藥材鑒定方法比較，特征圖譜法具有較大優(yōu)勢，尤其在準確率方面意義深遠，藥物鑒定過程不會受到藥品形態(tài)的限制，不論是原藥還是粉末狀、片狀藥物，只需極少樣品即可檢測，穩(wěn)定性、精準度、可靠性得到極大的保證[6]。我國中藥材檢測技術(shù)的發(fā)展較晚，關于藥物鑒定方面的研究仍以實驗性的論證為主，尚處于探索研究方法和積累研究經(jīng)驗的過程，系統(tǒng)的指導理論、方法體系和數(shù)據(jù)庫體系并未形成，實際應用與推廣尚有距離。

因此，為促使我國中藥特征圖譜技術(shù)得到進一步發(fā)展，應進行更深一步的努力與探索。首先，需建立一個操作簡便、快捷合理的系統(tǒng)性特征圖譜方法理論體系。其次，應開發(fā)有助于中藥特征圖譜技術(shù)順利使用的中藥材鑒定和分類評估計算機支持軟件。最后，應建立相應的科學權(quán)威的中藥圖譜數(shù)據(jù)庫，以便于中醫(yī)藥工作人員參考和利用。

4 結(jié)語

綜上所述，目前我國中藥材特征圖譜技術(shù)仍處于起步階段，已取得一定的成績，在生物特征圖譜和化學特征圖譜等方面的研究正趨于成熟。隨著科學技術(shù)水平的不斷提升，中藥材特征圖譜技術(shù)在中藥鑒定領域?qū)l(fā)揮積極而重要的作用。

[1] 孫素琴,白雁.道地山藥紅外指紋圖譜和聚類分析的鑒別研究[J].光譜學與光譜分析,2013,23(12):258-261.

[2] 胡妮娜,田淑琴,于景偉,等.傳統(tǒng)中藥鑒定方法的研究發(fā)展概況[J].中醫(yī)藥信息,2012,21(3):789-791.

[3] 劉玉萍,何報作,曹暉.基因測序技術(shù)在中藥質(zhì)量研究中的應用—山藥基原的DNA測序鑒[J].中草藥,2011,32(11):126-130.

[4] 李淼,樓一層,林鑫,等.紅蓼花、葉莖醋酸乙酯部位的高效液相色譜特征圖譜[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2012,15(1):234-236.

[5] 朱秀卿,閻克里,趙麗.白術(shù)揮發(fā)油中極性和非極性成分的高效液相色譜法特征圖譜研究[J].中國藥物與臨床,2011,31(8):83-84.

[6] 張永鑫,劉曉,楊欣文,等.黃連4種飲片特征圖譜研究及生物堿含量測定[J].藥物分析雜志,2012,39(11):126-128.

(責任編輯：李嵐春)

2015-03-04

劉培洪(1970-)，男，貴州省遵義市第一人民醫(yī)院主管中藥師，研究方向為中藥鑒定、中藥制劑。

R284.1

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1673-2197(2015)12-0061-02

10.11954/ytctyy.201512027