王良鴻 （廣西荔浦縣青山鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站 546608）

雞毒支原體病診斷報(bào)告

王良鴻 （廣西荔浦縣青山鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站 546608）

當(dāng)前由于一些小型養(yǎng)雞場(chǎng)養(yǎng)殖戶對(duì)雞毒支原體病的危害性缺乏認(rèn)識(shí)，沒(méi)有形成對(duì)雞毒支原體病的有效防控，雞毒支原體病在小型養(yǎng)雞場(chǎng)時(shí)有發(fā)生，養(yǎng)殖戶往往認(rèn)為是由于其它呼吸道疫病所引起，在預(yù)防、治療方面沒(méi)有很好把握住所發(fā)生疫病的確切病因，從而造成疫病的持續(xù)流行，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。雞支原體，又稱霉形體，是一類缺乏細(xì)胞壁，僅由胞漿膜包裹的原核微生物，是目前所知的能在無(wú)生命培養(yǎng)基中繁殖的最小微生物。它廣泛存在于人、動(dòng)物、植物和昆蟲體內(nèi)。部分支原體對(duì)人或禽、豬、牛及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具有一定的致病性，主要侵害呼吸道和生殖系統(tǒng)，還能引起關(guān)節(jié)炎、乳腺炎以及眼部感染。因而在禽病中也是一類重要的病原微生物。雞支原體根據(jù)其致病性的差異性分為三類，其中雞毒支原體的危害最為嚴(yán)重，雞毒支原體感染也稱為雞敗血霉形體感染或慢性呼吸道病，臨床上以呼吸道癥狀為主，特征表現(xiàn)為咳嗽、流鼻液，呼吸道羅音，嚴(yán)重者呼吸困難和張口呼吸。

2015年5月份桂林市A縣有B、C、D、E 3個(gè)小型養(yǎng)雞場(chǎng)發(fā)生呼吸道疫病，其中B、C、D、E 4個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)存欄有48日齡的雛雞分別為2500羽、3000羽、2700羽、4000羽，4個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)的雛雞不同程度存在呼吸道疫病，5月10發(fā)現(xiàn)疫情至5月24日4個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)共死亡雛雞2200羽。

1 發(fā)病雛雞臨床癥狀

病雞剛出現(xiàn)癥狀時(shí)表現(xiàn)為精神不振，食欲減退，不愛(ài)活動(dòng)，羽毛松亂，飲食明顯減少，體重減輕較快，主要是以呼吸道癥狀為主，病雞出現(xiàn)氣管啰音，鼻有漿液性分泌物，咳嗽，頻頻搖頭，噴嚏，有部分病雛雞有結(jié)膜炎。

2 病死雞解剖病理變化

解剖可見病死雞消瘦，鼻道、氣管、支氣管以及氣囊內(nèi)含有混濁黏稠的滲出物，氣囊壁變厚、混濁，呼吸道黏膜水腫，竇腔內(nèi)充滿黏液滲出物，有部分有膿性肝周炎和心包炎。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 病變組織涂片鏡檢 用經(jīng)過(guò)消毒過(guò)的接種棒從已經(jīng)無(wú)菌收集到的死雛雞的鼻腔、眶下竇、氣管挑取少量病變組織在載玻片上抹成薄片待自然干燥在涂抹面載玻片背面用酒精燈加熱固定，然后用革蘭氏染色，在電子顯微鏡油鏡下觀察未發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌。

3.2 細(xì)菌分離培養(yǎng) 用經(jīng)過(guò)消毒過(guò)的移液管從已經(jīng)無(wú)菌收集到的死雛雞的鼻腔、眶下竇、氣管等沖洗物0.2ml接種于1.8ml支原體培養(yǎng)基中、依次稀釋至10-3，密封置于37℃培養(yǎng)，同時(shí)將樣品接種于支原體固體培養(yǎng)基中，置于8%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)至32h發(fā)現(xiàn)液體支原體培養(yǎng)基發(fā)生酸堿度變化(培養(yǎng)基變黃指示劑作用)，立即接種于固體培養(yǎng)基上，置于CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)，培養(yǎng)至第9d在90倍實(shí)體顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有肉眼不易看出的中央突起呈荷包蛋樣微小菌落。

3.3 鑒定 用間接熒光抗體試驗(yàn)(IFA)方法，取1.5cm的瓊脂塊，菌落面朝上置于載玻片上，第一塊載玻片上放一塊待檢分離物、一塊已知毒支原體菌落(R株)、一塊已知其他支原體菌落，第二塊載玻片上放一塊待檢分離物，第一塊載玻片上每塊瓊脂上加一滴適當(dāng)稀釋的兔抗支原體血清，第二塊載玻片上瓊脂塊上加一滴正常兔血清，瓊脂塊在濕盒中室溫條件下反應(yīng)30min后，分別放到含有磷酸鹽緩沖液(PBS)pH7.2的不同器皿中，沖洗10min，共沖洗2次，將瓊脂塊放回原玻片，吸水紙吸取過(guò)多的水分，每塊瓊脂加上稀釋好的抗兔熒光抗體結(jié)合物，反應(yīng)、洗滌同前，最后將瓊脂塊放回玻片，吸干多余水分后放入射式熒光顯微鏡下檢查，發(fā)現(xiàn)已知其他支原體菌落、第二塊載玻片分離物呈暗淡菌落、與背景熒光顏色相似，第一塊載玻片分離物以及已知毒支原體菌落有呈亮綠色熒光的菌落，

3.4 發(fā)病雞快速血清凝集試驗(yàn)(RSA) 在B、C、D、E 4個(gè)發(fā)生疫情的養(yǎng)雞場(chǎng)分別采集雞血進(jìn)行分離收集血清樣品進(jìn)行快速血清凝集試驗(yàn)(RSA)，操作方法，在玻片上加入20μl待檢雞血清，再加等量20ul的雞毒支原體染色抗原，用棉簽將血清與抗原充分混均，同時(shí)做陽(yáng)性及陰性血清對(duì)照。在室溫條件下，56℃30min處理后2min判定結(jié)果。每個(gè)雞場(chǎng)采樣量及快速血清凝集試驗(yàn)(RSA)試驗(yàn)結(jié)果見附表。

附表 雞毒支原體病雞快速血清凝集試驗(yàn) (羽、%)

4 結(jié)論

（1）通過(guò)臨床癥狀、病理解剖、實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌培養(yǎng)、間接熒光抗體試驗(yàn)(IFA)以及快速血清凝集試驗(yàn)(RSA)可以明確A縣B、C、D、E 4個(gè)小型養(yǎng)雞場(chǎng)的雛雞發(fā)生的疫病為雞毒支原體病。（2）4個(gè)小型養(yǎng)雞場(chǎng)發(fā)生雛雞雞毒支原體病可能的原因是由于應(yīng)激刺激而誘發(fā)，因?yàn)檫@4個(gè)小型養(yǎng)雞場(chǎng)欄舍過(guò)于封閉，雞舍里溫度達(dá)到30℃，氨氣刺鼻，氨氣濃度過(guò)高，因此改善雞舍的內(nèi)部環(huán)境是預(yù)防雞毒支原體很重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。（3）據(jù)調(diào)查這4個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)均沒(méi)有做過(guò)雞支原體疫苗免疫預(yù)防，這也是引起雛雞發(fā)生雞毒支原體的原因，當(dāng)前免疫接種是減少支原體感染的一種有效方法，目前國(guó)內(nèi)外使用的疫苗主要有弱毒疫苗和滅活疫苗，弱毒疫苗既可用于尚未感染的健康雛雞，也可用于已經(jīng)感染的雞群，免疫保護(hù)率在80%以上因此養(yǎng)殖戶最好是在雞舍環(huán)境改善的同時(shí)采用疫苗注射來(lái)預(yù)防雞毒支原體病。（4）如發(fā)生雞毒支原體病可用土霉素配合鏈霉素同時(shí)使用，效果也不錯(cuò)，具體是土霉素使用量為120mg/kg，連用2周，鏈霉素每羽110mg肌肉注射。

S858.31

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1007-1733(2015)12-0025-02

2015–10–19）