劉東璐，黃戰(zhàn)平

紫杉醇是從短葉紅豆杉樹(shù)皮中提取的天然產(chǎn)物，含氧四環(huán)紫杉烷環(huán)及酯側(cè)鏈?zhǔn)强鼓[瘤的有效成分，通過(guò)與細(xì)胞微管蛋白結(jié)合，使微管聚合抑制其解聚，使細(xì)胞有絲分裂受阻斷，從而抑制腫瘤生長(zhǎng)。臨床主要用于乳腺癌、卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌，聯(lián)合用藥時(shí)對(duì)小細(xì)胞肺癌、肝癌、胃癌也有明顯活性［1］。盡管紫杉醇具有良好的抗腫瘤活性，但在水中溶解度僅＜0． 03 mg／mL，幾乎不溶解于水，給靜脈給藥帶來(lái)很大困難。有文獻(xiàn)報(bào)道，紫杉醇在甲醇、乙醇、二甲亞砜等有機(jī)溶劑中可溶解［2］，但注射劑中表面活性劑聚氧乙烯蓖麻油會(huì)引起過(guò)敏及心臟、神經(jīng)、腎損害、血管毒性等不良反應(yīng)［3，4］。新藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)酯質(zhì)體自20世紀(jì)90年代在國(guó)內(nèi)研發(fā)紫杉醇，不僅解決了水溶性問(wèn)題，又提高了藥物靶向性和減輕變態(tài)反應(yīng)，發(fā)揮抗腫瘤活性。但酯質(zhì)體本身存在較高的藥物泄漏率、穩(wěn)定性差、長(zhǎng)期保存困難等缺點(diǎn)，尤其國(guó)內(nèi)注射用紫杉醇酯質(zhì)體，應(yīng)用時(shí)按要求加5%葡萄糖溶液10mL在漩渦專(zhuān)用電子振蕩器上振蕩5min，致完全溶解轉(zhuǎn)移液體可為病人靜脈輸注。但經(jīng)多次臨床觀(guān)察，此方式配制的液體輸注中多次發(fā)現(xiàn)分層、顆粒物聚集或沉淀等現(xiàn)象，繼而棄之造成藥物浪費(fèi)。經(jīng)分析：由于目前該藥多為凍干塊狀物，加入溶媒葡萄糖時(shí)，葡萄糖黏度大，溶解時(shí)藥物再分散性較差，很難在較短時(shí)間內(nèi)得到均勻一致的藥物混懸液；且因包封劑型，溶解時(shí)溶劑量過(guò)少，長(zhǎng)時(shí)間振蕩也不能完全溶解，甚至破壞包封效果致藥物泄露，而溶劑量過(guò)多振蕩時(shí)藥液會(huì)從穿刺針眼處外溢造成污染；此外，藥物在水溶液中多以混懸液形式存在，不透明，難以肉眼辨清藥物顆粒的完全溶解情況，且在目前多數(shù)醫(yī)院未實(shí)行集中配制，配藥人員多無(wú)藥學(xué)背景，操作者水平參差不齊，常誤將一些未完全溶解的藥物顆粒加入輸液中導(dǎo)致成品液體不穩(wěn)定。本研究為保證病人用藥安全，結(jié)合說(shuō)明書(shū)的配制要求和臨床使用中的問(wèn)題，進(jìn)行配制過(guò)程中新的藥物溶解劑量和振蕩時(shí)間的實(shí)驗(yàn)研究，擬為臨床合理配制提供依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 藥品與溶劑 注射用紫杉醇酯質(zhì)體150支（30 mg／支，南京思科藥業(yè)公司生產(chǎn)，批號(hào)為114040309；5%葡萄糖500mL（石家莊四藥生產(chǎn)，批號(hào)為1311261603－A）；重蒸餾水；磷酸緩沖液（PBS）；0．9%氯化鈉溶液。

1．1．2 儀器與器材 LabAlliance高效液相色譜儀1臺(tái)（安捷倫液相色譜科技公司生產(chǎn)），Mastersizer 2000－激光粒子測(cè)定儀1臺(tái)（英國(guó)馬爾文公司生產(chǎn)），20mL、1 mL一次性注射器（山東威高醫(yī)用有限公司生產(chǎn)），玻璃試管數(shù)個(gè)，漩渦電子振蕩器3臺(tái)（頻率 3000r／min，振幅：X軸方向7cm，Y軸方向7cm，Z軸方向4cm，揚(yáng)州寶軍電子機(jī)械有限公司生產(chǎn)）。

1．2 方法

1．2．1 配藥環(huán)境 均在靜脈配制中心百級(jí)生物安全柜內(nèi)配制，護(hù)士帶帽子、口罩、無(wú)粉手套及防護(hù)服，嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌技術(shù)，溶媒液體中的微粒數(shù)符合2010版中國(guó)藥典控制指標(biāo)。

1．2．2 分組 首先將注射用紫杉醇酯質(zhì)體150支進(jìn)行編號(hào)并分為3組，每組50支。

1．2．3 配伍溶液制備 在相同環(huán)境、溫度下，由動(dòng)作規(guī)范、操作熟練的同一護(hù)士配制藥物。各藥瓶啟蓋消毒后用20mL注射器抽取5%葡萄糖溶液沿小瓶?jī)?nèi)貼壁緩慢注入，回抽空氣5mL。A組每瓶注入10mL，B組注入15mL，C組注入20mL，同時(shí)放在3個(gè)專(zhuān)用電子振蕩器上震蕩并計(jì)時(shí)，計(jì)時(shí)從液體瓶放到振蕩器振蕩之時(shí)開(kāi)始，分別振蕩5min、10min、15min、20min時(shí)取出，靜止5min。

1．2．4 藥物穩(wěn)定性檢驗(yàn)方法

1．2．4．1 藥物粒徑測(cè)定 用1mL注射器抽取制備后的紫杉醇酯質(zhì)體混懸液1．0mL，分別注入備用的玻璃試管中，以水為分散介質(zhì)，稀釋約20倍后，用激光粒度測(cè)定儀測(cè)定每支玻璃試管溶液中不同大小直徑的藥物微粒數(shù)，由此得出一次實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以上法每個(gè)時(shí)點(diǎn)平行測(cè)定50次（n＝50，即每次測(cè)定都是同一批號(hào)溶媒和藥物），得出3組藥物在不同振蕩時(shí)間點(diǎn)藥液中不同粒徑微粒數(shù)目。

1．2．4．2 藥物包封率測(cè)定 利用含藥酯質(zhì)體破乳溶液進(jìn)行穩(wěn)定性考察，用1mL注射器抽取紫杉醇酯質(zhì)體混懸液1mL于葡聚糖凝膠（SephadexG－50）柱分離，先用30mL磷酸緩沖液洗脫液進(jìn)行洗脫，取前15 mL洗脫液測(cè)定紫杉醇含量為包封藥物總量，再用0．9%氯化鈉溶液10mL洗脫剩余游離藥物。另取紫杉醇酯質(zhì)體混懸液1mL，測(cè)定其中紫杉醇含量為包封和未包封藥物總量。包封率按以下公式計(jì)算：包封率（%）＝脂質(zhì)體中包封的藥物／總藥物量×100%。

1．2．5 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 酯質(zhì)體是一個(gè)發(fā)展中的新劑型，其質(zhì)量評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)尚在逐步完善之中，《中國(guó)藥典》2000年版（二部）增加了對(duì)酯質(zhì)體制劑的指導(dǎo)原則，包括有害有機(jī)溶劑限度檢查，形態(tài)、粒徑及其分布檢查，載藥量或包封率的檢查等［5］?！吨袊?guó)藥典》自2005年版起附錄中注射劑不溶性微粒檢查方法中均新增加了光阻法，并注明本方法適用于混懸液和易析出微粒的注射劑，如乳狀液、膠體溶液等。與顯微鏡計(jì)數(shù)法比較，光阻法具有操作簡(jiǎn)便、直接檢查、快速得出結(jié)果等優(yōu)點(diǎn)。本研究采用激光粒度測(cè)定儀光阻法測(cè)定各組每毫升混懸液中紫杉醇酯質(zhì)體不同粒徑數(shù)。同時(shí)，包封率是評(píng)價(jià)酯質(zhì)體制劑質(zhì)量好壞最重要指標(biāo)，也是酯質(zhì)體能否發(fā)揮較普通制劑高效、低毒特點(diǎn)的關(guān)鍵，測(cè)定包封率關(guān)鍵是把未包封游離藥物從脂質(zhì)體上分離出來(lái)，常用分離方法有柱層析法、透析法、超速離心法、超濾膜過(guò)濾法等［6－8］?！吨袊?guó)藥典》2005年版（二部）附錄微囊、微球及酯質(zhì)體制劑指導(dǎo)原則中質(zhì)量檢查項(xiàng)目規(guī)定：若得到的是分散在液體介質(zhì)中的微囊、微球、脂質(zhì)體，應(yīng)通過(guò)適當(dāng)方法（如凝膠柱色譜法、離心法或透析法）進(jìn)行分離后測(cè)定，按下式計(jì)算包封率［包封率（%）＝（系統(tǒng)中包封與未包封的總藥量－液體介質(zhì)中未包封的藥量）／系統(tǒng)中包封與未包封的總藥量×100%］，包封率不得小于80%［9］。因此，本研究利用含藥酯質(zhì)體破乳溶液采用凝膠柱色譜法計(jì)算各組每毫升混懸液中紫杉醇酯質(zhì)體藥物包封率。

1．2．6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)用SPSS13．0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用方差分析，組間比較用F檢驗(yàn)，以P＜0．05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果（見(jiàn)表1、表2）

表1 不同振搖時(shí)間對(duì)紫杉醇脂質(zhì)體粒徑的影響（±s） nm

表1 不同振搖時(shí)間對(duì)紫杉醇脂質(zhì)體粒徑的影響（±s） nm

5min 10min 15min 20min A組 50 979．16±11．25 958．25±10．78 921．17±10．23 9組別 支數(shù)0． 011）與 A組、C組比較，P＜0．01；2）與本組5min、10min比較，P＜0．01。20．13±10．08 B組 50 853．25±10．161） 821．03±10．031） 803．11±9．051）2） 802．79±9．031）2）C組 50 963．12±11．21 948．21±10．33 917．11±10．01 909．13±10．02 P＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜

表2 不同振搖時(shí)間對(duì)紫杉醇酯質(zhì)體包封率的影響（±s） %

表2 不同振搖時(shí)間對(duì)紫杉醇酯質(zhì)體包封率的影響（±s） %

5min 10min 15min 20min A組 50 98．29±0．13 96．25±0．09 94．37±0．07 82．02±0．011）組別 例數(shù)0． 011）與本組5min、10min、15min比較，P＜0．01。B組 50 99．87±0．25 98．93±0．23 96．22±0．19 83．63±0．071）C組 50 99．12±1．21 98．21±1．33 96．89±1．01 84．13±1．021）P＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜

3 討論

作為類(lèi)脂雙分子層、結(jié)構(gòu)類(lèi)似生物膜藥物載體酯質(zhì)體，具有使藥物緩控釋、降低不良反應(yīng)、提高治療效果靶向性等優(yōu)點(diǎn)，載入藥物后不僅提高藥物穩(wěn)定性，又解決了難溶性藥物的給藥問(wèn)題。但酯質(zhì)體膜結(jié)構(gòu)——磷脂分子間是靠范德華力、氫鍵、疏水等而相互作用，在外界不穩(wěn)定因素作用下磷脂分子間不斷交換位置，可自發(fā)聚集、沉淀造成形態(tài)、結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，尤其注射用紫杉醇酯質(zhì)體以?xún)龈尚问酱嬖陔m有較好穩(wěn)定性［10］，但對(duì)其混懸液而言，更易受緩沖液pH值、離子強(qiáng)度、溫度及脂質(zhì)體類(lèi)脂表面電荷、粒徑等因素影響而破壞膜結(jié)構(gòu)［11］，溶解時(shí)不合理的溶解分散會(huì)破壞膜結(jié)構(gòu)，使脂質(zhì)體顆粒發(fā)生聚集、降解、變性、沉降等不穩(wěn)定現(xiàn)象，且其粒徑大小和粒度分布均勻程度也會(huì)直接影響藥物在機(jī)體組織內(nèi)的作用［12］。因此，制備紫杉醇酯質(zhì)體成品輸液時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格控制藥物脂質(zhì)體粒徑和包封率大小，使其盡量符合國(guó)家藥典規(guī)定指標(biāo)，保證藥效［13］。本研究針對(duì)該藥緩沖液溶媒葡萄糖黏度大，溶解時(shí)使粉劑再分散性較差，很難在較短時(shí)間內(nèi)得到均勻一致酯質(zhì)體混懸液，溶解時(shí)常借助專(zhuān)用電子振蕩器經(jīng)一定振蕩時(shí)間振搖助溶而完全溶解。由于藥物酯質(zhì)體塊狀物在不同劑量溶媒中溶解分散時(shí)，劑量不同、振蕩時(shí)間不同振搖時(shí)使藥物顆粒表面所受外力會(huì)不同，從而影響藥物溶解效果。在此理論基礎(chǔ)上結(jié)合臨床觀(guān)察多次發(fā)現(xiàn)成品液體不穩(wěn)定現(xiàn)象，進(jìn)一步展開(kāi)該藥配制時(shí)溶解劑量和振蕩時(shí)間實(shí)驗(yàn)研究，為合理用藥提供依據(jù)。

3．1 溶媒劑量的影響 本研究以說(shuō)明書(shū)加入溶媒劑量10mL和實(shí)際觀(guān)察該藥瓶最大溶媒劑量為22mL為參考，觀(guān)察3種不同劑量。結(jié)果顯示：不同溶媒劑量下該藥物經(jīng)不同振搖時(shí)間制得藥物混懸液，采用激光粒度儀測(cè)定藥物粒徑，在其他條件相同情況下通過(guò)50個(gè)批次平行考察發(fā)現(xiàn)，不同溶媒劑量對(duì)混懸液中藥物粒徑有明顯影響。B組采用15mL溶媒劑量制備藥物混懸液，不同振搖時(shí)間藥物粒徑較A組、C組小，說(shuō)明了Stokes方程酯質(zhì)體粒徑越小越穩(wěn)定的研究。經(jīng)分析：該藥物在10mL溶媒劑量時(shí)借助漩渦專(zhuān)用電子振蕩器最大振幅7mm，振蕩頻率 3000r／min振搖助溶下，由于溶媒量少，藥物塊狀物在一定溶液中分散空間小不宜分散；20mL溶媒量時(shí)由于該藥瓶的最大容積為22mL，溶媒加入后，藥瓶中空余空間小，振搖時(shí)溶媒與瓶體一起旋轉(zhuǎn)，甚至不存在相對(duì)旋轉(zhuǎn)，藥物顆粒表面受外作用力小，形成藥物顆粒與顆粒、顆粒與溶媒間相互結(jié)合力相對(duì)較大，不易使顆粒分散，故而形成較大粒徑酯質(zhì)體顆粒，導(dǎo)致成品液體中顆粒物聚集、沉淀或分層不穩(wěn)定性現(xiàn)象。而加入15mL溶媒振搖時(shí)藥物塊狀物在溶媒中，隨振蕩器擺動(dòng)自由運(yùn)動(dòng)，在相同振搖時(shí)間下藥物顆粒較易分散，顆粒粒徑較小致完全溶解，呈均勻分布不易引起聚集、沉淀或分層等不穩(wěn)定現(xiàn)象。因此，紫杉醇酯質(zhì)體藥物在水溶液中振搖溶解時(shí)應(yīng)加入15mL溶劑量，其物理穩(wěn)定性指標(biāo)才更可靠。

3．2 振搖時(shí)間的影響 包封率是評(píng)價(jià)酯質(zhì)體制劑質(zhì)量最重要指標(biāo)，也是酯質(zhì)體能否發(fā)揮較普通制劑高效、低毒特點(diǎn)的關(guān)鍵?！吨袊?guó)藥典》2005版質(zhì)量檢查指導(dǎo)原則中規(guī)定：包繞后的未溶解藥物脂質(zhì)體粒徑在300 nm以下，而分散在液體介質(zhì)中酯質(zhì)體，包封率不得小于80%［9］。由于藥物酯質(zhì)體本身包封劑型特點(diǎn)，在一定量液體介質(zhì)中借助振蕩器一定的震蕩幅度和頻率分散時(shí)，其分散效果也與振蕩時(shí)間密切相關(guān)。本研究參照說(shuō)明書(shū)中振搖時(shí)間為5min和肉眼觀(guān)察藥物完全溶解所需振搖時(shí)間為20min為參考，嚴(yán)密觀(guān)察分別在振搖5min、10min、15min、20min時(shí)混懸液中藥物粒徑和包封率的變化。結(jié)果顯示：B組溶媒劑量下當(dāng)振搖時(shí)間從5min增加到20min時(shí)，藥物粒徑從853．25 nm減少到了802．79nm，可見(jiàn)隨著振搖時(shí)間的延長(zhǎng)混懸液中藥物粒徑會(huì)逐漸減小。在振搖15min與20 min時(shí)粒徑變化不大，但15min與5min、10min兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)粒徑比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01），因此應(yīng)振搖15min。表2結(jié)果顯示：不同溶媒劑量下該藥物經(jīng)不同振搖時(shí)間制得混懸液，采用高效液相色譜儀測(cè)定藥物包封率，在其他條件相同情況下通過(guò)50個(gè)批次平行考察發(fā)現(xiàn)，不同振蕩時(shí)間對(duì)混懸液中藥物包封率有明顯影響。首先3組不同劑量下隨著振蕩時(shí)間延長(zhǎng)藥物包封率均在80%以上，符合國(guó)家藥典規(guī)定要求。其次，3組隨著振蕩時(shí)間延長(zhǎng)藥物包封率均降低，特別是當(dāng)振搖增加到20min時(shí)有明顯下降，與其他各時(shí)間點(diǎn)相比差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01），因此不應(yīng)過(guò)分延長(zhǎng)振蕩時(shí)間。經(jīng)分析：制備紫杉醇酯質(zhì)體成品輸液時(shí)，在專(zhuān)用振蕩器振搖助溶下，顆粒在一定時(shí)間內(nèi)經(jīng)過(guò)X軸、Y軸、Z軸方向形成漩渦式同方向分散，顆粒與顆粒間碰撞力、顆粒與溶媒間剪切力保持同向，不易破壞顆粒表面間穩(wěn)定作用力，使顆粒表面雙層膜保證完整，使紫杉醇不易外滲提高了包封率，但振搖時(shí)間延長(zhǎng)可能會(huì)破壞顆粒表面間穩(wěn)定作用力，使顆粒表面雙層膜破壞，使包封率下降。因此振蕩時(shí)間不應(yīng)大于15 min。結(jié)果顯示，15min振蕩時(shí)間藥液中粒徑最小，藥液最穩(wěn)定，因此綜合分析更應(yīng)以15min為最佳振蕩時(shí)間。

總之，針對(duì)目前脂質(zhì)體作為紫杉醇水溶性藥物的新型載體，由于脂質(zhì)體本身和該藥包繞劑型特點(diǎn)，使紫杉醇酯質(zhì)體凍干塊狀物在水溶液中通過(guò)振蕩溶解制備成品輸液時(shí)，易受溶媒量和震蕩時(shí)間等因素影響而使藥物溶解不全或破壞膜完整性，導(dǎo)致脂質(zhì)體聚集、沉降、藥物滲漏和分層。本研究針對(duì)該藥目前形式配制下臨床應(yīng)用中成品輸液的不穩(wěn)定現(xiàn)象，考察了在注入10mL、15mL、20mL 3種不同溶媒劑量下，分別在振搖5min、10min、15min、20min以包封率、粒徑2個(gè)重要特征為評(píng)價(jià)指標(biāo)，分析藥物脂質(zhì)體混懸液中經(jīng)專(zhuān)用振蕩器振蕩溶解下的穩(wěn)定性變化。結(jié)果配制該藥物時(shí)應(yīng)注入15mL溶媒，振搖15min混懸液中藥物穩(wěn)定性指標(biāo)最可靠。由此充分了解該藥的溶解與溶劑量的配比關(guān)系和恰當(dāng)振搖時(shí)間，有助于減少藥物不良事件的發(fā)生，提高用藥安全性。

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