申 安 程 偉

1.河南省焦作市食品藥品檢驗(yàn)所，河南焦作454150 ； 2.河南省三門峽市公安局，河南三門峽 472000

氨酪酸氯化鈉注射液中的α-吡咯烷酮HPLC測(cè)定

申 安1程 偉2▲

1.河南省焦作市食品藥品檢驗(yàn)所，河南焦作454150 ； 2.河南省三門峽市公安局，河南三門峽 472000

目的 建立氨酪酸氯化鈉注射液中α-吡咯烷酮含量的HPLC測(cè)定方法。 方法 按如下方法設(shè)定色譜條件。色譜柱：CAPCELL PAK C18柱；流動(dòng)相：磷酸二氫鉀溶液-甲醇（90∶10） ；磷酸二氫鉀溶液的配制：將10.0g磷酸二氫鉀﹑1.1g己烷磺酸鈉加水溶解并稀釋至1000mL，然后用磷酸調(diào)節(jié)溶液pH值到2.1；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：30℃。 結(jié)果 α-吡咯烷酮的含量在0.4～4.9μg/mL 范圍內(nèi)時(shí)，線性關(guān)系好，r= 0.9997,平均回收率達(dá)99.97%( RSD =0.48%，n=10）。 結(jié)論 HPLC法用于氨酪酸氯化鈉注射液中的α-吡咯烷酮含量測(cè)定，操作簡(jiǎn)單﹑便捷，結(jié)果準(zhǔn)確。

氨酪酸；注射液；α-吡咯烷酮；HPLC

氨酪酸是一種廣泛應(yīng)用于臨床治療的一種中樞興奮藥，可用于多種疾病的治療，如腦血管疾病后遺癥﹑頭部外傷導(dǎo)致的記憶障礙﹑安眠藥及一氧化碳中毒導(dǎo)致的昏迷等[1-4]。目前，主要有氨酪酸片和氨酪酸氯化鈉注射液兩種劑型，在臨床治療中，氨酪酸氯化鈉注射液應(yīng)用最為廣泛[5-7]。對(duì)氨酪酸氯化鈉注射液中的α-吡咯烷酮含量進(jìn)行定量分析，可以控制藥品質(zhì)量，降低不良反應(yīng)發(fā)生率。

1 儀器與化學(xué)試劑

1.1 儀器

島津LC10A-TVP型高效液相色譜儀：由LC-10ATvp輸液泵﹑SPD-10Avp（UV-VIS）檢測(cè)器﹑SIL-10ADvp自動(dòng)進(jìn)樣器﹑CTO-10ACvp柱溫箱﹑CLASSVP工作站及C-R7A/C-R8A數(shù)據(jù)處理機(jī)等組成。

1.2 化學(xué)試劑

氨酪酸氯化鈉注射液（江蘇天禾迪賽諾制藥有限公司，H20060220）；α-吡咯烷酮（上海弘順生物科技有限公司）；水（娃哈哈純凈水）；磷酸﹑磷酸二氫鉀﹑己烷磺酸鈉采用分析純；甲醇采用色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：CAPCELL PAK C18柱；流動(dòng)相：磷酸二氫鉀溶液-甲醇（ 90∶10） （磷酸二氫鉀溶液的配置：將10.0g磷酸二氫鉀﹑1.1g己烷磺酸鈉加水溶解并稀釋至1000mL，然后用磷酸調(diào)節(jié)溶液pH值至2.1）； 流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)： 210 nm；進(jìn)樣量： 10μL；柱溫： 30 ℃。

2.2 溶液制備

空白對(duì)照溶液：移取5.0mL 0.9%氯化鈉注射液至25mL容量瓶，蒸餾水稀釋至刻度，定容，混勻

對(duì)照品溶液：取適量的α-吡咯烷酮對(duì)照品，配置濃度為32.0μg/mL的溶液，梯度稀釋至16.0﹑8.0﹑4.0﹑2.0﹑1.0μg/mL。

供試品溶液：移取5.0mL 氨酪酸氯化鈉注射液至 25mL 的量瓶?jī)?nèi)，蒸餾水稀釋至刻度，定容，混勻。

2.3 記錄色譜圖

在設(shè)定的色譜條件下，將空白對(duì)照溶液﹑對(duì)照品溶液﹑供試品溶液分別進(jìn)樣，記錄對(duì)應(yīng)的色譜圖。如圖1所示。

圖1 三種溶液的高效液相色譜圖

2.4 檢測(cè)精密度試驗(yàn)

取0.4μg/mL的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣 6 次，記錄每次進(jìn)樣后的色譜圖，按照主峰面積計(jì)算RSD，RSD=0.85%。

2.5 供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

在溶液配制后的第0，1，4，12，24小時(shí)進(jìn)行供試品溶液中α-吡咯烷酮的含量測(cè)定，計(jì)算峰面積的RSD，RSD=0.34%，氨酪酸氯化鈉溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 線性關(guān)系試驗(yàn)

分別取濃度為1.0﹑2.0﹑4.0﹑﹑8.0﹑16.0﹑32.0μg/mL的α- 吡咯烷酮對(duì)照品溶液進(jìn)樣，記錄相應(yīng)色譜圖。然后以α- 吡咯烷酮濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，作圖，然后進(jìn)行線性回歸分析，r=0.9997，進(jìn)一步對(duì)數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，當(dāng)α-吡咯烷酮溶液的濃度在0.40～0.49μg/mL范圍內(nèi)時(shí)，線性關(guān)系好。

2.7 樣品回收率試驗(yàn)

于25mL容量瓶配制α-吡咯烷酮含量確定的氨酪酸氯化鈉溶液10份，5mL/份，分別加入20.112μg/mL的α- 吡咯烷酮溶液10mL，用0.9%氯化鈉溶液稀釋定容至刻度，然后分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，計(jì)算樣品回收率和RSD。平均回收率達(dá)99.97%。見表1。

表1 樣品回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 確定樣品檢出限

取濃度為0.1μg/mL的α-吡咯烷酮進(jìn)行不同倍數(shù)的稀釋，按照色譜條件進(jìn)行HPLC分析，確定α-吡咯烷酮的檢出限，試驗(yàn)結(jié)果為0.5ng。

2.9 含量測(cè)定試驗(yàn)

取同批次的氨酪酸氯化鈉溶液供試品5份，分別配制為供試品溶液，依次進(jìn)樣，計(jì)算α-吡咯烷酮含量，含量測(cè)定結(jié)果分別是0.140%﹑0.139%﹑0.143%﹑0.142%﹑0.141%，α-吡咯烷酮平均含量為0.141%，RSD=0.16%。

3 討論

近年來，為減少藥品不良反應(yīng)，國(guó)家藥典下發(fā)了相應(yīng)的文件，要求加強(qiáng)氨酪酸氯化鈉注射液中有關(guān)物質(zhì)的檢查。筆者通過查閱資料發(fā)現(xiàn)，氨酪酸氯化鈉注射液中α-吡咯烷酮的含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)并不統(tǒng)一，因此，結(jié)合相關(guān)資料，給出了用高效液相色譜法測(cè)定氨酪酸氯化鈉注射液中α-吡咯烷酮含量的具體方法。

氨酪酸的合成通常采用吡咯烷酮在高溫﹑堿性條件下水解開環(huán)的化學(xué)合成方法，不可避免的，氨酪酸原料藥中會(huì)含有一定量的α-吡咯烷酮[8]。α-吡咯烷酮是一種毒性比較大的化學(xué)雜質(zhì)，如果其在氨酪酸氯化鈉注射液中的含量較高，必然會(huì)提高藥品不良反應(yīng)發(fā)生率，威脅患者的用藥安全[9]。因此，必須建立氨酪酸氯化鈉注射液中α-吡咯烷酮的含量測(cè)定方法。

高效液相色譜法（HPLC）作為色譜法的一種，是藥物分析中的一種重要分析方法，有著明顯優(yōu)勢(shì)[9-17]。（1）應(yīng)用范圍廣，大多數(shù)有機(jī)化合物都可以采用HPLC進(jìn)行檢測(cè)分析；（2）分離效能高，具有很高的理論塔板數(shù)，分離效果好；（3）分析速度快，目前的高效液相色譜儀可以實(shí)現(xiàn)20min內(nèi)對(duì)樣品的分析，有的樣品的分析時(shí)間不超過5min。（4）靈敏度高，HPLC的進(jìn)樣量可以是幾μL，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)微量物質(zhì)的檢測(cè)。（5）樣品可回收，高校液相色譜儀在工作過程中，并不會(huì)破壞檢測(cè)物質(zhì)結(jié)構(gòu)，因此，樣品可以回收。本次研究中將色譜條件中的檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定為210nm，主要原因是，在該波長(zhǎng)下α-吡咯烷酮才有吸收，而且，空白對(duì)照溶液在此波長(zhǎng)下沒有紫外吸收，不會(huì)干擾試驗(yàn)進(jìn)行；另外，流動(dòng)相選擇磷酸二氫鉀溶液-甲醇（90∶10），可以確保理想的分離度。

研究結(jié)果表明，利用HPLC對(duì)氨酪酸氯化鈉注射液中α-吡咯烷酮的含量進(jìn)行測(cè)定，具有很好的分離度，峰面積與α-吡咯烷酮之間的線性關(guān)系以及樣品回收率均獲得比較滿意的試驗(yàn)結(jié)果。

綜上所述，HPLC法用于氨酪酸氯化鈉注射液中的α-吡咯烷酮含量測(cè)定，操作簡(jiǎn)單﹑便捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，值得在氨酪酸氯化鈉注射液有關(guān)物質(zhì)檢查的藥物分析中使用該方法。

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Determination of α-pyrrolidone in aminobutyric acid sodium chloride injection by HPLC

SHEN An1CHENG Wei2
1.Jiaozuo Institute for Food and Drug Control, Jiaozuo 454150, China; 2.Public Security Bureau of Sanemenxia City He'nan Province, Sanemenxia 472000, China

Objective To establish a HPLC method for the content of α-pyrolidone in aminobu-tyric acid sodium chloride injection. Methods Set chromatographic conditions as follows. Chromatographic column: CAPCELL PAK C18column; Mobile phase: potassium dihydrogen phosphate solution - methanol (90∶ 10); the preparation of the potassium dihydrogen phosphate solution: potassium dihydrogen phosphate 10.0 g and 10.0 g hexane sulfonic acid sodium is dissolved with water and diluted to 1000 mL, then adjustment the pH of the solution with phosphoric acid to 2.1; Flow rate: 1.0 mL/min; Detection wavelength : 210 nm ; Sample quantity: 10 μL; Column temperature: 30℃. Results The content of α-pyrolidon within the scope of 0.4 to 4.9 μg/L, good linear relation, r=0.9997, the average recovery is 99.97% (RSD=0.48%, n=10). Conclusion The HPLC method should be used in the determination of α-pyrolidone's content in aminobu-tyric acid sodium chloride injection, the operation is simple and convenient and the result is accurate.

Aminobutyric acid; Injection; α-pyrrolidone; HPLC

R927.1

A

2095-0616（2015）16-48-03

2015-06-24）

▲通訊作者