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        承德產黃芩植株不同部位野黃芩苷含量分析*

        2015-11-28 03:12:00趙桂琴張曉峰
        承德醫(yī)學院學報 2015年6期

        楊 麗,趙桂琴,張曉峰

        (承德醫(yī)學院中藥研究所,河北承德 067000)

        承德產黃芩植株不同部位野黃芩苷含量分析*

        楊 麗,趙桂琴△,張曉峰

        (承德醫(yī)學院中藥研究所,河北承德067000)

        目的:測定河北承德產黃芩植株不同部位野黃芩苷的含量。方法:采用高效液相色譜法測定河北承德隆化縣黃芩GAP種植基地產黃芩植株不同部位(根、莖、葉、籽種殼)野黃芩苷的含量。色譜條件:柱溫20.0℃、流動相甲醇:水:甲酸(20:80:0.4)、流速0.8ml/min、檢測波長335nm。結果:承德產黃芩植株根、莖、葉、籽種殼中野黃芩苷的含量分別為0.94%、12.57%、10.54%、1.89%。結論:野黃芩苷在黃芩植株不同部位的含量分布為莖>葉>籽種殼>根。

        承德產黃芩;HPLC法;野黃芩苷

        野黃芩苷是黃芩莖葉、半枝蓮、燈盞細辛等多種常用中藥材的重要化學成分之一,研究發(fā)現野黃芩苷具有多種生理功能:呈濃度依賴性地抑制人胎兒平滑肌細胞的增殖[1];調節(jié)整合素α v β 6和E-鈣黏蛋白的分泌,抑制舌癌細胞的粘附與遷移[2-3];降低腦血管阻力、增加腦血流量、溶解血栓、防止氧自由基生成增加等[4]。河北承德地區(qū)是野生黃芩道地產區(qū),目前在河北省承德市隆化縣已建立了黃芩GAP規(guī)范化種植基地,以供給相應的制藥企業(yè)。目前,企業(yè)提取黃芩中的野黃芩苷單體均使用黃芩的莖、葉,黃芩的根部多用于提取黃芩苷,而黃芩籽種殼被作廢料丟棄。為此,本研究采用高效液相色譜法(HPLC)測定了承德產黃芩植株不同部位(根、莖、葉、籽種殼等4個部位)的野黃芩苷含量,以期為企業(yè)提取野黃芩苷單體提供新的原料部位,從而避免資源浪費。

        1 材料

        TD2001型電子天平(天津市天馬儀器廠),Agilent 1200高效液相色譜儀(自動進樣器、四元泵、柱溫箱、DAD檢測器,美國Agilent公司),RE52-99型旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠),SHD-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵(保定高新區(qū)陽光科教儀器)。

        干燥黃芩藥材采自河北省承德市隆化縣黃芩規(guī)范化種植基地(由承德醫(yī)學院中藥研究所趙春穎副教授鑒定為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi,批號:20120820),野黃芩苷標準品(購于中國藥品生物制品鑒定所,批號:110842-200605,含量≥98.99%)。

        2 方法與結果

        2.1色譜條件與系統適用性試驗色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm),檢測波長為335nm,柱溫20.0℃,流動相為甲醇:水:甲酸(20:80:0.4),梯度洗脫(0-60min),流速為0.8ml/min,進樣量為10μl。在該色譜條件下,野黃芩苷的分離度均>1.5。

        2.2制備溶液

        2.2.1供試品溶液的制備:取采收后曬干的黃芩植株,按部位分組剪下(剪成0.5cm左右)。分別準確稱取黃芩根、莖、葉、籽種殼部位各20.0g,置于圓底燒瓶中,按料液比1:10加入70%乙醇,回流提取2次,提取1.5h,合并提取液,蒸干,研末,稱重。精密稱定黃芩根、莖、葉、籽種殼乙醇提取物干粉5.00mg,分別置10ml容量瓶中,甲醇溶解定容,即得。

        2.2.2對照品溶液的制備:精密稱取野黃芩苷對照品3.10mg,置于25ml容量瓶中,加甲醇至刻度線處,搖勻,制成每1ml中含野黃芩苷0.124mg的溶液。準確移取1.6ml上述對照品溶液,甲醇溶解于10ml容量瓶中,得對照品貯備液(每1ml中含野黃芩苷0.0198mg)。

        2.3方法學考察

        2.3.1繪制標準曲線:分別精密吸取“2.2.2”中的野黃芩苷對照品貯備液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0μl,按“2.1”的色譜條件測定,記錄色譜圖、峰面積(A)。以野黃芩苷質量(X)對峰面積值(Y)進行線性回歸,回歸方程為:Y=183.9X+0.1741,r=0.9998。說明野黃芩苷在0.0198-0.2178μg范圍內具有良好的線性關系。

        2.3.2精密度:取“2.2.2”中的野黃芩苷對照品貯備液,按“2.1”的色譜條件重復進樣5次,記錄色譜圖。結果顯示野黃芩苷的平均峰面積為336.3451(RSD=1.01%),表明儀器精密度良好。

        2.3.3穩(wěn)定性:取“2.2.1”中的黃芩根、莖、葉和籽種殼供試品溶液各10μl,分別于配液后2.0、4.0、6.0、8.0、14.0h按“2.1”的色譜條件進樣測定。結果各部位野黃芩苷峰面積的RSD分別為1.17%、1.66%、1.44%、0.87%(n=5),表明供試品溶液在14.0h內穩(wěn)定性良好。

        2.3.4重復性:稱取同期干燥黃芩根、莖、葉和籽種殼各5份,按“2.2.1”的方法制備供試品溶液,“2.1”的色譜條件自動進樣,測定峰面積值。結果野黃芩苷峰面積的RSD為0.91%、0.96%、1.01%、0.84%(n=5),說明重復性良好。

        表1 黃芩根野黃芩苷加樣回收率試驗結果(n=5)

        表2 黃芩莖野黃芩苷加樣回收率試驗結果(n=5)

        表3 黃芩葉野黃芩苷加樣回收率試驗結果(n=5)

        表4 黃芩籽種殼野黃芩苷加樣回收率試驗結果(n=5)

        2.3.5加樣回收率:在已知野黃芩苷含量的4個部位提取物粉末中,定量加入野黃芩苷對照品,按“2.1”的色譜條件進樣,測定峰面積,計算野黃芩苷回收率。結果見表1-4。

        2.4樣品含量測定分別取同期黃芩根、莖、葉、籽種殼適量,剪成長約0.5cm的小塊,分別稱取20.0g,按“2.2.1”的方法制備樣品溶液,按“2.1”的色譜條件進樣測定,計算原藥材中野黃芩苷(C21H18O12)的含量,結果見表5:黃芩植株不同部位的野黃芩苷含量分布為:莖>葉>籽種殼>根。

        表5 樣品含量測定結果(n=3)

        3 討論

        本研究以野黃芩苷為考察指標,利用高效液相色譜儀,在柱溫20.0℃、甲醇:水:甲酸(20:80:0.4)、流速0.8ml/min、檢測波長335nm的條件下,測定了承德產黃芩植株不同部位(根、莖、葉、籽種殼)野黃芩苷的含量。結果顯示,黃芩植株中莖、葉的野黃芩苷含量最高,其次黃芩籽種殼,而且黃芩籽種殼野黃芩苷的含量約為黃芩傳統藥用部位根的2倍。本研究提示,黃芩收獲時其籽種殼部分可用于提取野黃芩苷單體,從而可以充分利用黃芩藥用資源。

        [1]周曉霞,蘇佩清.野黃芩苷對人胎兒平滑肌細胞增殖的抑制作用[J].山東中醫(yī)雜志,2003,22(2):109-110.

        [2]Li H,Huang D,Gao Z,et al.Scutellarin inhibits cell migration by regulating production of αvβ6 integrin and E-cadherin in human tongue cancer cells[J].Oncol Rep,2010,24(5):1153- 1160.

        [3]張麗娜,鄭金華,李會平,等.野黃芩苷對鼠舌癌移植瘤新生脈管及彈性和膠原纖維的影響[J].口腔醫(yī)學研究,2011,27(9):760-762.

        [4]王麗娟,林宇,邱麗萍,等.燈盞花素對氯化鋇所致心律失常的預防作用[J].齊齊哈爾醫(yī)學院學報,2000,21(1):1-2.

        ANALYSIS OF SCUTELLARIN CONTENT IN DIFFERENT PARTS OF CHENGDE SCUTELLARIA BAICALENSIS GEORGI

        YANG Li
        (Institute of Chinese Materia Media, Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

        Objective: To determine the scutellarin content in different parts of Chengde Scutellaria baicalensis Georgi. Methods: HPLC was used to determine the scutellarin content in different parts (root, stem, leaf, seedshell) of Scutellaria baicalensis Georgi produced in Chengde Longhua GAP planting base. The chromatographic condition: column temperature was 20.0℃, mobile phase wasmethanol-water-formic acid (20:80:0.4), fl ow rate was 0.8ml/min, detection wavelength was 335 nm. Results: The scutellarin content in root, stem, leaf and seedshell of Scutellaria baicalensis Georgi produced in Chengde was respectively 0.94%, 12.57%, 10.54% and 1.89%. Conclusions: The scutellarin content distribution in different parts of Chengde Scutellaria baicalensis Georgi is stem>leaf>seedshell>root.

        Chengde Scutellaria baicalensis; HPLC; Scutellarin

        R284.1

        A

        1004-6879(2015)06-0467-03

        2015-05-05)

        * 國家科技支撐計劃(2011BAI07B04)

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