楊 麗，趙桂琴，張曉峰

（承德醫(yī)學院中藥研究所，河北承德　067000）

承德產黃芩植株不同部位野黃芩苷含量分析*

楊 麗，趙桂琴△，張曉峰

（承德醫(yī)學院中藥研究所，河北承德067000）

目的：測定河北承德產黃芩植株不同部位野黃芩苷的含量。方法：采用高效液相色譜法測定河北承德隆化縣黃芩GAP種植基地產黃芩植株不同部位（根、莖、葉、籽種殼）野黃芩苷的含量。色譜條件：柱溫20.0℃、流動相甲醇：水：甲酸（20：80：0.4）、流速0.8ml/min、檢測波長335nm。結果：承德產黃芩植株根、莖、葉、籽種殼中野黃芩苷的含量分別為0.94%、12.57%、10.54%、1.89%。結論：野黃芩苷在黃芩植株不同部位的含量分布為莖＞葉＞籽種殼＞根。

承德產黃芩；HPLC法；野黃芩苷

野黃芩苷是黃芩莖葉、半枝蓮、燈盞細辛等多種常用中藥材的重要化學成分之一，研究發(fā)現野黃芩苷具有多種生理功能：呈濃度依賴性地抑制人胎兒平滑肌細胞的增殖［1］；調節(jié)整合素α v β 6和E-鈣黏蛋白的分泌，抑制舌癌細胞的粘附與遷移［2-3］；降低腦血管阻力、增加腦血流量、溶解血栓、防止氧自由基生成增加等［4］。河北承德地區(qū)是野生黃芩道地產區(qū)，目前在河北省承德市隆化縣已建立了黃芩GAP規(guī)范化種植基地，以供給相應的制藥企業(yè)。目前，企業(yè)提取黃芩中的野黃芩苷單體均使用黃芩的莖、葉，黃芩的根部多用于提取黃芩苷，而黃芩籽種殼被作廢料丟棄。為此，本研究采用高效液相色譜法（HPLC）測定了承德產黃芩植株不同部位（根、莖、葉、籽種殼等4個部位）的野黃芩苷含量，以期為企業(yè)提取野黃芩苷單體提供新的原料部位，從而避免資源浪費。

1　材料

TD2001型電子天平（天津市天馬儀器廠），Agilent 1200高效液相色譜儀（自動進樣器、四元泵、柱溫箱、DAD檢測器，美國Agilent公司），RE52-99型旋轉蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），SHD-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵（保定高新區(qū)陽光科教儀器）。

干燥黃芩藥材采自河北省承德市隆化縣黃芩規(guī)范化種植基地（由承德醫(yī)學院中藥研究所趙春穎副教授鑒定為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi，批號：20120820），野黃芩苷標準品（購于中國藥品生物制品鑒定所，批號：110842-200605，含量≥98.99%）。

2　方法與結果

2.1色譜條件與系統適用性試驗色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18（4.6mm×250mm，5μm），檢測波長為335nm，柱溫20.0℃，流動相為甲醇：水：甲酸（20：80：0.4），梯度洗脫（0-60min），流速為0.8ml/min，進樣量為10μl。在該色譜條件下，野黃芩苷的分離度均＞1.5。

2.2制備溶液

2.2.1供試品溶液的制備：取采收后曬干的黃芩植株，按部位分組剪下（剪成0.5cm左右）。分別準確稱取黃芩根、莖、葉、籽種殼部位各20.0g，置于圓底燒瓶中，按料液比1：10加入70%乙醇，回流提取2次，提取1.5h，合并提取液，蒸干，研末，稱重。精密稱定黃芩根、莖、葉、籽種殼乙醇提取物干粉5.00mg，分別置10ml容量瓶中，甲醇溶解定容，即得。

2.2.2對照品溶液的制備：精密稱取野黃芩苷對照品3.10mg，置于25ml容量瓶中，加甲醇至刻度線處，搖勻，制成每1ml中含野黃芩苷0.124mg的溶液。準確移取1.6ml上述對照品溶液，甲醇溶解于10ml容量瓶中，得對照品貯備液（每1ml中含野黃芩苷0.0198mg）。

2.3方法學考察

2.3.1繪制標準曲線：分別精密吸取“2.2.2”中的野黃芩苷對照品貯備液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0μl，按“2.1”的色譜條件測定，記錄色譜圖、峰面積（A）。以野黃芩苷質量（X）對峰面積值（Y）進行線性回歸，回歸方程為：Y=183.9X+0.1741，r=0.9998。說明野黃芩苷在0.0198-0.2178μg范圍內具有良好的線性關系。

2.3.2精密度：取“2.2.2”中的野黃芩苷對照品貯備液，按“2.1”的色譜條件重復進樣5次，記錄色譜圖。結果顯示野黃芩苷的平均峰面積為336.3451（RSD=1.01%），表明儀器精密度良好。

2.3.3穩(wěn)定性：取“2.2.1”中的黃芩根、莖、葉和籽種殼供試品溶液各10μl，分別于配液后2.0、4.0、6.0、8.0、14.0h按“2.1”的色譜條件進樣測定。結果各部位野黃芩苷峰面積的RSD分別為1.17%、1.66%、1.44%、0.87%（n=5），表明供試品溶液在14.0h內穩(wěn)定性良好。

2.3.4重復性：稱取同期干燥黃芩根、莖、葉和籽種殼各5份，按“2.2.1”的方法制備供試品溶液，“2.1”的色譜條件自動進樣，測定峰面積值。結果野黃芩苷峰面積的RSD為0.91%、0.96%、1.01%、0.84%（n=5），說明重復性良好。

表1　黃芩根野黃芩苷加樣回收率試驗結果（n=5）

表2　黃芩莖野黃芩苷加樣回收率試驗結果（n=5）

表3　黃芩葉野黃芩苷加樣回收率試驗結果（n=5）

表4　黃芩籽種殼野黃芩苷加樣回收率試驗結果（n=5）

2.3.5加樣回收率：在已知野黃芩苷含量的4個部位提取物粉末中，定量加入野黃芩苷對照品，按“2.1”的色譜條件進樣，測定峰面積，計算野黃芩苷回收率。結果見表1-4。

2.4樣品含量測定分別取同期黃芩根、莖、葉、籽種殼適量，剪成長約0.5cm的小塊，分別稱取20.0g，按“2.2.1”的方法制備樣品溶液，按“2.1”的色譜條件進樣測定，計算原藥材中野黃芩苷（C21H18O12）的含量，結果見表5：黃芩植株不同部位的野黃芩苷含量分布為：莖＞葉＞籽種殼＞根。

表5　樣品含量測定結果（n=3）

3　討論

本研究以野黃芩苷為考察指標，利用高效液相色譜儀，在柱溫20.0℃、甲醇：水：甲酸（20：80：0.4）、流速0.8ml/min、檢測波長335nm的條件下，測定了承德產黃芩植株不同部位（根、莖、葉、籽種殼）野黃芩苷的含量。結果顯示，黃芩植株中莖、葉的野黃芩苷含量最高，其次黃芩籽種殼，而且黃芩籽種殼野黃芩苷的含量約為黃芩傳統藥用部位根的2倍。本研究提示，黃芩收獲時其籽種殼部分可用于提取野黃芩苷單體，從而可以充分利用黃芩藥用資源。

［1］周曉霞，蘇佩清.野黃芩苷對人胎兒平滑肌細胞增殖的抑制作用［J］.山東中醫(yī)雜志，2003，22（2）：109-110.

［2］Li H，Huang D，Gao Z，et al.Scutellarin inhibits cell migration by regulating production of αvβ6 integrin and E-cadherin in human tongue cancer cells［J］.Oncol Rep，2010，24（5）：1153- 1160.

［3］張麗娜，鄭金華，李會平，等.野黃芩苷對鼠舌癌移植瘤新生脈管及彈性和膠原纖維的影響［J］.口腔醫(yī)學研究，2011，27（9）：760-762.

［4］王麗娟，林宇，邱麗萍，等.燈盞花素對氯化鋇所致心律失常的預防作用［J］.齊齊哈爾醫(yī)學院學報，2000，21（1）：1-2.

ANALYSIS OF SCUTELLARIN CONTENT IN DIFFERENT PARTS OF CHENGDE SCUTELLARIA BAICALENSIS GEORGI

YANG Li
（Institute of Chinese Materia Media， Chengde Medical College， Hebei Chengde 067000， China）

Objective： To determine the scutellarin content in different parts of Chengde Scutellaria baicalensis Georgi. Methods: HPLC was used to determine the scutellarin content in different parts （root， stem， leaf， seedshell） of Scutellaria baicalensis Georgi produced in Chengde Longhua GAP planting base. The chromatographic condition： column temperature was 20.0℃， mobile phase wasmethanol-water-formic acid （20：80：0.4）， fl ow rate was 0.8ml/min， detection wavelength was 335 nm. Results: The scutellarin content in root， stem， leaf and seedshell of Scutellaria baicalensis Georgi produced in Chengde was respectively 0.94%， 12.57%， 10.54% and 1.89%. Conclusions: The scutellarin content distribution in different parts of Chengde Scutellaria baicalensis Georgi is stem＞leaf＞seedshell＞root.

Chengde Scutellaria baicalensis； HPLC； Scutellarin

R284.1

A

1004-6879（2015）06-0467-03

2015-05-05）

* 國家科技支撐計劃（2011BAI07B04）