亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        不同轉(zhuǎn)種密度對(duì)體外培養(yǎng)陰道毛滴蟲(chóng)效果的影響

        2015-11-28 03:12:06伏晨卉張彥彥苗玉倩孫明麗孔學(xué)敏王麗娜
        關(guān)鍵詞:毛滴蟲(chóng)蟲(chóng)體陰道

        伏晨卉,張彥彥,苗玉倩,孫明麗,孔學(xué)敏,王麗娜

        (1.承德醫(yī)學(xué)院2011級(jí)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,河北承德 067000;2.指導(dǎo)教師)

        學(xué)生園地

        不同轉(zhuǎn)種密度對(duì)體外培養(yǎng)陰道毛滴蟲(chóng)效果的影響

        伏晨卉1,張彥彥1,苗玉倩1,孫明麗1,孔學(xué)敏1,王麗娜2

        (1.承德醫(yī)學(xué)院2011級(jí)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,河北承德067000;2.指導(dǎo)教師)

        陰道毛滴蟲(chóng);轉(zhuǎn)種密度;體外培養(yǎng);肝浸湯培養(yǎng)基

        陰道毛滴蟲(chóng)(Trichomonas vaginalis)是人體泌尿生殖系統(tǒng)感染的常見(jiàn)病原體,主要引起滴蟲(chóng)性陰道炎或尿道炎,若不及時(shí)治療,易造成交叉感染和反復(fù)感染,嚴(yán)重影響患者的身心健康[1]。滴蟲(chóng)病是性傳播疾病,有助于HIV的傳播[2]。近年來(lái),該病有上升的趨勢(shì),有資料顯示,陰道毛滴蟲(chóng)可以傳染給嬰兒[3-5]。越來(lái)越多的醫(yī)學(xué)工作者及科研人員致力于陰道毛滴蟲(chóng)的研究,體外培養(yǎng)陰道毛滴蟲(chóng)成為科研與教學(xué)中的一項(xiàng)重要基本工作。隨著分子克隆技術(shù)的發(fā)展,陰道毛滴蟲(chóng)的科學(xué)研究達(dá)到新的領(lǐng)域,但其前提是需要分離培養(yǎng)出高質(zhì)量的蟲(chóng)體。目前,體外培養(yǎng)陰道毛滴蟲(chóng)的研究報(bào)道頗多,但對(duì)其轉(zhuǎn)種密度的研究國(guó)內(nèi)未見(jiàn)報(bào)道[6-9]。因此,為了節(jié)約資源以及達(dá)到最好的觀察和研究效果,找到適合陰道毛滴蟲(chóng)的最適轉(zhuǎn)種密度和最佳生長(zhǎng)時(shí)間尤為重要。

        1 材料與方法

        1.1實(shí)驗(yàn)蟲(chóng)種采自承德市婦幼保健醫(yī)院婦科門(mén)診滴蟲(chóng)性陰道炎患者的陰道分泌物。采用消毒棉拭子簽在陰道后穹隆處取分泌物,接種于肝浸湯培養(yǎng)基中,37℃無(wú)菌培養(yǎng),陰道毛滴蟲(chóng)每48h傳代1次,培養(yǎng)3代后用于實(shí)驗(yàn)。

        1.2方法

        1.2.1肝浸湯培養(yǎng)基:將兔肝15g剪成小塊,研碎后置于100ml蒸餾水中,然后放入4℃ 冰箱內(nèi)冷浸過(guò)夜,次日加熱煮沸半小時(shí),用紗布過(guò)濾除去沉渣,再向?yàn)V液中加蒸餾水,以補(bǔ)還加熱時(shí)蒸發(fā)失去的水量,即得澄清的15%肝浸湯。然后加入蛋白胨2g,半胱氨酸鹽酸鹽0.2g,麥芽糖1.0g,氯化鈉0.5g,并加熱使試劑溶解,調(diào)pH為5.6,過(guò)濾,分裝每試管5ml,塞以非脫脂棉花,高壓滅菌后置37℃恒溫箱中24-48h,保存于4℃冰箱中備用。轉(zhuǎn)種前,每管中加入無(wú)菌滅活小牛血清1ml,青霉素和鏈霉素濃度各達(dá)1500U/ml,放溫箱中20min即可轉(zhuǎn)種。

        1.2.2蟲(chóng)種準(zhǔn)備:取經(jīng)3代培養(yǎng)的滴蟲(chóng)再培養(yǎng)48h,用吸管從培養(yǎng)管底部吸滴蟲(chóng)懸液3ml,80g離心10min,用血細(xì)胞記數(shù)器記數(shù)蟲(chóng)體后定量。將陰道毛滴蟲(chóng)以不同的轉(zhuǎn)種密度轉(zhuǎn)種至肝浸湯培養(yǎng)基,每管蟲(chóng)數(shù)分別為2.0×104個(gè)/ml、6.0×104個(gè)/ml、10.0×104個(gè)/ml、14.0×104個(gè)/ml、18.0×104個(gè)/ml。每24h顯微鏡下觀察,并比較陰道毛滴蟲(chóng)的活躍度和數(shù)量。

        1.2.3實(shí)驗(yàn)觀察與結(jié)果判斷:每隔24h(24h、48h、72h、96h、120h)振蕩搖勻各管,吸取20μl培養(yǎng)物滴于載玻片上,加蓋玻片,鏡檢,高倍鏡下觀察每個(gè)視野蟲(chóng)體的活躍度和存活蟲(chóng)數(shù),即生長(zhǎng)密度。蟲(chóng)體活躍度的判斷標(biāo)準(zhǔn):“++++”為10秒內(nèi)蟲(chóng)體旋轉(zhuǎn)6-10周,搖擺21-30次,鞭毛和波動(dòng)膜運(yùn)動(dòng)活躍;“+++”為10秒內(nèi)蟲(chóng)體旋轉(zhuǎn)1-5周,搖擺11-20次,鞭毛和波動(dòng)膜運(yùn)動(dòng)活躍;“++”為10秒內(nèi)蟲(chóng)體停止旋轉(zhuǎn),搖擺1-10次,鞭毛擺動(dòng)活躍,波動(dòng)膜運(yùn)動(dòng)不活躍;“+”為蟲(chóng)體變圓,10秒內(nèi)蟲(chóng)體靜止不動(dòng)或搖擺1-5次,鞭毛擺動(dòng)不活躍,波動(dòng)膜停止運(yùn)動(dòng);“-”為蟲(chóng)體變圓,蟲(chóng)體靜止不動(dòng),鞭毛和波動(dòng)膜停止運(yùn)動(dòng)。為避免漏檢,如未觀察到活的蟲(chóng)體,則對(duì)陰性培養(yǎng)物再作正常轉(zhuǎn)種培養(yǎng),48h后取管底培養(yǎng)物鏡檢,仍未見(jiàn)活的蟲(chóng)體才可判斷為“-”。

        2 結(jié)果

        不同轉(zhuǎn)種密度陰道毛滴蟲(chóng)在肝浸湯培養(yǎng)基中的繁殖情況(附表):24h時(shí)生長(zhǎng)密度隨著滴蟲(chóng)密度的增大而逐漸增大,蟲(chóng)體運(yùn)動(dòng)活潑;48h時(shí),生長(zhǎng)密度均較24h增大,隨著滴蟲(chóng)密度的增大而逐漸增大,14.0×104個(gè)/ml與18.0×104個(gè)/ml的培養(yǎng)基中陰道毛滴蟲(chóng)到達(dá)生長(zhǎng)高峰,生長(zhǎng)密度差別不大,且蟲(chóng)體的活躍度有所下降;2.0×104個(gè)/ml、6.0×104個(gè)/ml與10.0×104個(gè)/ml培養(yǎng)基中的陰道毛滴蟲(chóng)均在72h時(shí)到達(dá)生長(zhǎng)高峰,但10.0×104個(gè)/ml密度蟲(chóng)體活躍度有所下降。隨著時(shí)間延長(zhǎng),不同密度培養(yǎng)基中的陰道毛滴蟲(chóng)生長(zhǎng)密度均下降明顯,蟲(chóng)體運(yùn)動(dòng)微弱,至120h時(shí),除2.0×104個(gè)/ml的培養(yǎng)基中還可見(jiàn)活體外,其余培養(yǎng)基中的陰道毛滴蟲(chóng)全部死亡。

        3 討論

        目前關(guān)于陰道毛滴蟲(chóng)培養(yǎng)研究的報(bào)道較多,其中肝浸湯培養(yǎng)基是最常用的培養(yǎng)基[6,10]。本研究是將從臨床分離的陰道毛滴蟲(chóng)培養(yǎng)到最佳狀態(tài)時(shí),以不同的接種量轉(zhuǎn)種至肝浸湯培養(yǎng)基,觀察并比較陰道毛滴蟲(chóng)的增殖情況,探索陰道毛滴蟲(chóng)的最適轉(zhuǎn)種密度和處于最佳生長(zhǎng)狀態(tài)的時(shí)間。

        附表 肝浸湯培養(yǎng)基體外培養(yǎng)陰道毛滴蟲(chóng)的效果比較

        本研究中,陰道毛滴蟲(chóng)剛轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)基,由于條件適宜,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富及pH值合適,所以生長(zhǎng)狀況較好,繁殖較快。隨著蟲(chóng)體的數(shù)量增加,密度增大,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗增多,培養(yǎng)基內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)逐漸缺乏,乳酸等代謝產(chǎn)物隨之增加,使pH降低,環(huán)境的變化使陰道毛滴蟲(chóng)生長(zhǎng)受到抑制,出現(xiàn)蟲(chóng)體大量死亡、裂解,最終培養(yǎng)基中無(wú)活體,鏡檢為陰性。不同密度的陰道毛滴蟲(chóng)在肝浸湯培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)趨勢(shì)為先迅速繁殖,到達(dá)高峰后下降,活躍度也隨之下降。陰道毛滴蟲(chóng)的轉(zhuǎn)種密度越低,到達(dá)生長(zhǎng)高峰的時(shí)間越長(zhǎng);轉(zhuǎn)種密度越高到達(dá)生長(zhǎng)高峰的時(shí)間越短,但10.0×104個(gè)/ml、14.0×104個(gè)/ml與18.0×104個(gè)/ml的培養(yǎng)基中陰道毛滴蟲(chóng)到達(dá)生長(zhǎng)高峰時(shí),蟲(chóng)體活躍度已經(jīng)下降。

        綜合比較,肝浸湯培養(yǎng)基中陰道毛滴蟲(chóng)的轉(zhuǎn)種密度為10.0×104個(gè)/ml時(shí),生長(zhǎng)繁殖速度非???,48h時(shí)生長(zhǎng)密度較大,活躍度最好,適合教學(xué)與科研,但是培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分消耗大,需48h就得轉(zhuǎn)種,浪費(fèi)物資和人力。肝浸湯培養(yǎng)基中陰道毛滴蟲(chóng)的轉(zhuǎn)種密度為6.0×104個(gè)/ml時(shí)生長(zhǎng)繁殖速度相對(duì)較緩,72h時(shí)生長(zhǎng)狀態(tài)最佳,所以可72h進(jìn)行轉(zhuǎn)種,既節(jié)約成本,又不浪費(fèi)人力,適合長(zhǎng)期保種。在實(shí)際工作中,可根據(jù)不同的需要選擇適合的轉(zhuǎn)種密度。

        [1]崔晶,姜鵬,王中全.新時(shí)期病原生物學(xué)研究生培養(yǎng)模式改革探討[J].中國(guó)病原生物學(xué)雜志,2012,7(6): 476-478.

        [2]黃敏.醫(yī)學(xué)微生物學(xué)與寄生蟲(chóng)學(xué)[M].第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2013.272-274.

        [3]Smith LM,Wang M,Zangwill K,et al.Trichomonas vaginalis infection in a premature newborn[J].J Perinatol,2002,22(6): 502-503.

        [4]Hoffman DJ,Brown GD,Wirth FH,et al.Urinary tract infection with Trichomonas vaginalis in a premature newborn infant and the development of chronic lung disease[J].J Perinatol,2003, 23(1):59-61.

        [5]Bruins MJ,van Straaten IL,Ruijs GJ.Respiratory disease and Trichomonas vaginalis in premature newborn twins[J].Pediatr Infect Dis J,2013,32(9):1029-1030.

        [6]楊堵華,姚繁榮,答嶸.陰道毛滴蟲(chóng)在兩種培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)與形態(tài)觀察[J].中國(guó)寄生蟲(chóng)病防治雜志,2004,14(1)209-210.

        [7]徐露,王宇學(xué),周玉娟.肝浸湯培養(yǎng)陰道毛滴蟲(chóng)的改進(jìn)[J]實(shí)用醫(yī)技雜志,2008,15(18):2366-2367.

        [8]劉曉泉,田春林,王衛(wèi)群.陰道毛滴蟲(chóng)長(zhǎng)期培養(yǎng)傳代的實(shí)驗(yàn)觀察[J].應(yīng)用預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2009,15(1):16-18.

        [9]陳熙,周本江.體外培養(yǎng)陰道毛滴蟲(chóng)的形態(tài)定量觀察[J]昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,(5):14-17.

        [10]耿志輝,韓淑梅,劉利,等.3種不同培養(yǎng)基體外培養(yǎng)陰道毛滴蟲(chóng)效果的比較[J].中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志2002,120(1):42-44.

        (學(xué)生園地欄目編輯:張?。?/p>

        R382.2

        A

        1004-6879(2015)06-0536-02

        2015-01-26

        猜你喜歡
        毛滴蟲(chóng)蟲(chóng)體陰道
        重組pET30a-EgM9蛋白高免兔血清對(duì)體外培養(yǎng)細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)發(fā)育的影響
        毛滴蟲(chóng)病診斷技術(shù)研究進(jìn)展
        獼猴源毛滴蟲(chóng)的鑒定
        羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng)病的診斷及危重病例治療
        盆底儀在陰道分娩后尿潴留治療中的應(yīng)用
        犬絲蟲(chóng)性眼炎的防治
        婦產(chǎn)科陰道不規(guī)則出血治療探討
        粘膜下陰道緊縮術(shù)矯正陰道松弛的護(hù)理
        家禽毛滴蟲(chóng)病的防治
        吡喹酮衍生物DW-3-15對(duì)日本血吸蟲(chóng)PZQ抗性蟲(chóng)體的生物學(xué)效應(yīng)觀察
        欧美性猛交99久久久久99按摩| 日日摸日日碰人妻无码 | 一本久道久久综合狠狠操| 一本久久a久久精品综合| 少妇一区二区三区精选| 国产尤物自拍视频在线观看 | 人妻一区二区三区免费看| 校园春色日韩高清一区二区| 人妻插b视频一区二区三区| 免费大片黄在线观看| 中文字幕亚洲综合久久菠萝蜜| 61精品人妻一区二区三区蜜桃| 在线视频中文字幕一区二区三区| 五月丁香综合激情六月久久| 无码国产精品一区二区免费16| 谁有在线观看av中文| 美女免费视频观看网址| 毛片无码国产| 使劲快高潮了国语对白在线| 亚洲欧美偷拍视频| 水蜜桃视频在线观看免费18| 亚洲性av少妇中文字幕| 亚洲人精品午夜射精日韩| 曰本极品少妇videossexhd| 西西人体大胆视频无码| 天堂丝袜美腿在线观看| 77777亚洲午夜久久多喷| 亚洲国产精品久久久久婷婷老年| 久久国产成人精品国产成人亚洲 | 国产三级国产精品国产专区50| 国色天香精品一卡2卡3卡4 | 久久久久亚洲AV无码专区一区| 亚洲中文字幕精品视频| 高清午夜福利电影在线| 丰满的少妇xxxxx青青青| 国产亚洲成年网址在线观看| 久久综合久久综合久久| 亚洲av午夜福利精品一区二区| 连续高潮喷水无码| 精品蜜桃av免费观看| 国内精品久久久久伊人av|