張 聰 尤奮強(qiáng)

（南京中醫(yī)藥大學(xué)·210000）

慢性低灌注是指各種原因引發(fā)的長期腦血流灌注不足，在血管性癡呆（VD）、Bins wanger病、Alzheimer's disease（AD）等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展過程起著重要的作用，慢性低灌注引發(fā)的各種腦損傷近年來發(fā)病率呈上升趨勢。探索一種既可以最大限度地減少醫(yī)源性風(fēng)險(xiǎn)又能有效地保護(hù)大腦的藥物是當(dāng)今醫(yī)療界所面臨的重要課題。中成藥通塞脈片具有活血祛瘀通絡(luò)、益氣養(yǎng)陽的功效，由金銀花、黃芪、當(dāng)歸、玄參、和石斛六味藥組成，是臨床治療缺血性腦中風(fēng)的特效藥，并且對閉塞性動脈硬化癥，靜脈血栓形成都有滿意的療效。研究發(fā)現(xiàn)，通塞脈片對大腦中動脈栓塞模型有保護(hù)作用，能促進(jìn)血流恢復(fù)，增加缺血區(qū)的血流灌注量，改善腦組織缺血缺氧狀態(tài)。因此，我們推測，通塞脈片很可能參與血管性癡呆的保護(hù)作用，這有待于進(jìn)一步的研究，這些問題的解決，將為臨床治療血管性癡呆提供新的策略。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

清潔級wistar大鼠,60只,雄性,體重200～240g,由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司提供。

1.2 大鼠慢性低灌注模型制備

慢性低灌注模型采用大鼠雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎（2VO）。按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)隨機(jī)分組，手術(shù)前先將實(shí)驗(yàn)大鼠斷食12小時(shí)，斷水6小時(shí)。稱量體重，用10%水合氯醛腹腔注射（0.3ml/100g）進(jìn)行麻醉。手術(shù)臺為恒溫操作臺，仰臥位固定，頸正中線切口，沿胸鎖乳突肌內(nèi)緣分離肌肉和筋膜，分離出左右頸總動脈進(jìn)行永久性結(jié)扎。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，大鼠常溫分籠飼養(yǎng)。

1.3 藥物來源及給藥方案

通塞脈片由江蘇南星藥業(yè)有限責(zé)任公司提供。本方案大鼠共分為3組，分別為假手術(shù)組、模型組和治療組。模型組與治療組構(gòu)建大鼠慢性低灌注2VO 模型，治療組給予通塞脈灌胃治療(12.44g/kg.d)。

1.4 Morris水迷宮的原理

Morris水迷宮是英國心理學(xué)家Morris設(shè)計(jì)并應(yīng)用于腦學(xué)習(xí)記憶機(jī)制研究的一種實(shí)驗(yàn)手段。測試程序主要包括定位航行試驗(yàn)和空間探索試驗(yàn)兩個部分。其中定位航行試驗(yàn)(place navigation)將大鼠面向池壁分別從4個入水點(diǎn)放入水中若干次,記錄其尋找到隱藏在水面下平臺的時(shí)間(逃避潛伏時(shí)間,escape latency)?？臻g探索試驗(yàn)(spatial probe)是在定位航行試驗(yàn)后去除平臺,然后任選一個入水點(diǎn)將大鼠放入水池中,記錄其在一定時(shí)間內(nèi)的游泳軌跡,考察大鼠對原平臺的記憶。

1.5 Morris水迷宮的試驗(yàn)方法

將實(shí)驗(yàn)大鼠頭朝池壁放入水中，放入位置隨機(jī)取東、西、南、北四個起始位置之一。記錄動物找到水下平臺的時(shí)間（s）。在前幾次訓(xùn)練中，如果這個時(shí)間超過60s，則引導(dǎo)動物到平臺。讓動物在平臺上停留10s.將大鼠移開、擦干。每只大鼠每天訓(xùn)練4次，兩次訓(xùn)練之間間隔15~20min,連續(xù)訓(xùn)練5d。最后一次獲得性訓(xùn)練結(jié)束后的第二天，將平臺撤除，開始60s的探查訓(xùn)練。將動物由原先平臺象限的對側(cè)放入水中。記錄動物在目標(biāo)象限（原先放置平臺的象限）所花的時(shí)間和進(jìn)入該象限的次數(shù)，以此作為空間記憶的檢測指標(biāo).測定動物的工作記憶（working memory）。探查訓(xùn)練結(jié)束后的第二天，開始維持4天的對位訓(xùn)練。將平臺放在原先平臺所在象限的對側(cè)象限，方法與獲得性訓(xùn)練相同。每天訓(xùn)練4次。每次記錄找到平臺的時(shí)間和游泳距離以及游泳速度。

2 結(jié)果

2.1 治療兩周組Morris水迷宮結(jié)果對比

分別對兩個對照組別的三個小組假手術(shù)組，模型組以及治療兩周組的實(shí)驗(yàn)對象進(jìn)行Morris水迷宮測試，對實(shí)驗(yàn)對象的空間認(rèn)知能力和記憶力做出判斷，測定結(jié)果參見圖2.1,、圖2.2和圖2.3。

圖2.1 2周組大鼠學(xué)習(xí)Morris水迷宮潛伏時(shí)間成績

圖2.2 2周組大鼠學(xué)習(xí)Morris水迷宮游泳里程成績

圖2.3 2周組大鼠學(xué)習(xí)Morris水迷宮平臺象限時(shí)間成績

2.2 治療四周組Morris水迷宮結(jié)果對比

分別對兩個對照組別的三個小組假手術(shù)組，模型組以及治療四周組的實(shí)驗(yàn)對象進(jìn)行Morris水迷宮測試，對實(shí)驗(yàn)對象的空間認(rèn)知能力和記憶力做出判斷，測定結(jié)果參見圖2.4,、圖2.5和圖2.6。

圖2.4 4周組大鼠學(xué)習(xí)Morris水迷宮潛伏時(shí)間成績

圖2.5 4周組大鼠學(xué)習(xí)Morris水迷宮游泳里程成績

圖2.6 4周組大鼠學(xué)習(xí)Morris水迷宮平臺象限時(shí)間成績

3 結(jié)論與討論

本研究考察了不同治療時(shí)間的通塞脈對大鼠慢性低灌注腦損傷的保護(hù)作用兩個對照組別的實(shí)驗(yàn)對象分別進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)慢性低灌注大鼠模型潛伏時(shí)間較長，游泳路程較長，平臺象限時(shí)間較短，通過通塞脈片治療的實(shí)驗(yàn)組隨著治療時(shí)間的延長，水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果有所改善，說明通塞脈片在對大鼠腦損傷治療起到了一定作用。有研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸作為通塞脈片中的君藥，其有效成分當(dāng)歸內(nèi)酯能減少局灶性的腦缺血損傷。有效成分藁本內(nèi)酯具有良好的改善微循環(huán)作用,可用于防治與微循環(huán)障礙有關(guān)的疾病。以上機(jī)制只是結(jié)合已有研究所做猜測，其確切的保護(hù)作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

[1] 胡晨.通塞脈片對大鼠缺血后肢側(cè)支循環(huán)建立的影響[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2009, 25(6)：33-35

[2] 殷書梅,王麗英,牛金茹等. 通塞脈片治療缺血性中風(fēng)的藥效學(xué)研究[J]. 新中醫(yī).2007 ,2：68-69.

[3] 陳偉明,王振書,劉國棟. 低灌注缺血性腦血管病因、發(fā)病機(jī)制及治療.[N] .第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2012 ,11(13-14).

[4] 羅永華,王愛軍.大鼠腦慢性低灌注模型的研究進(jìn)展.[N].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2013,9(35-36).

[5] 李偉明. 腦動靜脈周圍組織慢性低灌注損傷及出血風(fēng)險(xiǎn)研究.[J] .山西醫(yī)藥雜志,2011,3(31-32)

[6] Tsenkina Y , Ruzov A. White matter tract and glialassociated changes in 5-hydroxymethylcytosine following chronic cerebral hypoperfusion.[J]. Brain Res,2014.29(3)：27- 29.

[7] Smith JP , Sammons DL. Enhanced performance of methamphetamine lateral flow cassettes using an electronic lateral flow reader[J].Occup Environ Hyg,2012, 4(1)：34-35.