魏常梅，王俊瑞，孫 鵬，張軍力

（1內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古呼和浩特010110；2內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，內(nèi)蒙古呼和浩特010050；3內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古呼和浩特010059）

·基礎(chǔ)與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)·

鮑曼不動(dòng)桿菌外膜蛋白A的克隆表達(dá)及純化

魏常梅1，王俊瑞2，孫 鵬3，張軍力2

（1內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古呼和浩特010110；2內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，內(nèi)蒙古呼和浩特010050；3內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古呼和浩特010059）

目的：通過分子克隆方法制備鮑曼不動(dòng)桿菌外膜蛋白A（OmpA）純化蛋白，為進(jìn)一步研究鮑曼不動(dòng)桿菌OmpA蛋白的生物學(xué)活性提供基礎(chǔ)．方法：首先采用PCR方法擴(kuò)增鮑曼不動(dòng)桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC19606株外膜蛋白A編碼基因（OmpA），構(gòu)建其原核表達(dá)載體pET30a／ompA，所得產(chǎn)物經(jīng)PCR方法和測序進(jìn)行鑒定．之后篩選陽性表達(dá)載體，將其轉(zhuǎn)化至大腸桿菌表達(dá)宿主菌BL21，最后將表達(dá)的蛋白質(zhì)進(jìn)行純化．結(jié)果：重組表達(dá)載體pET30a／ompA構(gòu)建成功，并經(jīng)PCR方法和測序方法進(jìn)行鑒定；重組蛋白在所構(gòu)建的原核表達(dá)系統(tǒng)中實(shí)現(xiàn)了高表達(dá)，純化后得到了高純度的OmpA蛋白．結(jié)論：本次試驗(yàn)通過分子克隆技術(shù)，使鮑曼不動(dòng)桿菌OmpA蛋白在構(gòu)建的原核表達(dá)系統(tǒng)中成功表達(dá)，并且獲得了高純度的目標(biāo)蛋白，為進(jìn)一步研究鮑曼不動(dòng)桿菌外膜蛋白A的生物學(xué)活性及抗體的保護(hù)作用奠定了基礎(chǔ)．

鮑曼不動(dòng)桿菌；外膜蛋白A；表達(dá)及純化

0 引言

鮑曼不動(dòng)桿菌是一種非發(fā)酵糖類、動(dòng)力陰性、氧化酶陰性的革蘭氏陰性桿菌，其廣泛分布于自然界、醫(yī)院環(huán)境以及人體表面，是引起醫(yī)院感染的重要致病菌之一［1］．根據(jù)國家細(xì)菌監(jiān)測網(wǎng)統(tǒng)計(jì)，我國不同地區(qū)醫(yī)院中鮑曼不動(dòng)桿菌檢出率逐年增高，已成為臨床感染疾病中的主要細(xì)菌．現(xiàn)如今，鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)于亞胺培南、美羅培南等碳青霉烯類抗生素持續(xù)保持了較高的耐藥率［2-6］．據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，鮑曼不動(dòng)桿菌外膜蛋白的表達(dá)情況與多種抗生素的抗性具有明顯的相關(guān)性［7］．外膜蛋白（outer membrane protein，OMP）是細(xì)菌肽聚糖外脂質(zhì)雙層鑲嵌的特殊蛋白質(zhì)，它被證實(shí)可以負(fù)責(zé)細(xì)菌代謝相關(guān)物質(zhì)的運(yùn)輸、參與鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥機(jī)制等，屬于國內(nèi)外相關(guān)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一［8］．研究顯示，外膜蛋白可以改變細(xì)菌外膜的通透性、改變抗生素結(jié)合靶位，還可以促進(jìn)β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生等［9-12］．OmpA不僅可以參與以上耐藥機(jī)制，還與鮑曼不動(dòng)桿菌毒力及致病性密切相關(guān)，其可以促進(jìn)形成生物膜來保護(hù)細(xì)菌、結(jié)合宿主細(xì)胞表面的特定成分并侵入、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等［13-16］．但鮑曼不動(dòng)桿菌的OmpA蛋白參與毒力產(chǎn)生的具體機(jī)制及其它生物學(xué)活性尚不明確．

本研究旨在通過分子克隆技術(shù)獲取鮑曼不動(dòng)桿菌OmpA純化蛋白，以期進(jìn)一步探索OmpA在鮑曼不動(dòng)桿菌中的毒力表達(dá)情況及其具體生物學(xué)活性．

1 材料和方法

1．1 實(shí)驗(yàn)材料 細(xì)菌RNA提取試劑盒、細(xì)菌DNA提取試劑盒、瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒來自北京天根公司．DNA聚合酶購自BPI公司．RT-PCR試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、內(nèi)切酶來自大連寶生物有限公司．質(zhì)粒pET30a來自Novagen公司．BL21感受態(tài)細(xì)胞購自北京天根生化科技有限公司．

1．2 實(shí)驗(yàn)器材 高速冷凍離心機(jī)來自HITACHI CR-21GIII公司．VITEK-32全自動(dòng)微生物分析鑒定儀來自法國梅里埃公司，基礎(chǔ)電泳儀、電泳槽、來自BIO-RAD公司，Tanon-1600凝膠成像儀來自Tanon公司．

1．3 實(shí)驗(yàn)方法

1．3．1 OmpA基因擴(kuò)增鮑曼不動(dòng)桿菌RNA提取首先復(fù)蘇鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離株ATCC19606株，之后常規(guī)培養(yǎng)18～24 h，將菌液12 000 r／min，離心2 min收集菌體，用含有400 mg／L溶菌酶的100 μL TE緩沖液懸浮菌體．加入350 μL裂解液RL，震蕩混勻，12 000 r／min，離心2 min．將得到的上清轉(zhuǎn)移至另一EP管，加入250 μL無水乙醇，混勻，將溶液沉淀一起轉(zhuǎn)入吸附柱CR3，12 000 r／min，離心30～60 s，倒掉廢液，將吸附柱放回收集管．加入350 μL去蛋白液RW1，12 000 r／min，離心30～60 s，倒掉廢液，將吸附柱放回收集管．DNase I工作液的配置：將10 μLDNase I儲(chǔ)存液加入新的RNase-Free離心管中，之后放入70 μL RDD溶液，混勻．向CR3加入80 μLD-Nase I工作液，置于室溫15 min．加入350 μL去蛋白液RW1，12 000 r／min，離心30～60 s，倒掉廢液，將吸附柱放回收集管．之后加入500 μL漂洗液RW，室溫2 min，12 000 r／min，離心30～60 s，倒掉廢液，將吸附柱放回收集管．重復(fù)清洗一次．12 000 r／min，離心2 min，棄去廢液，室溫晾置數(shù)分鐘．轉(zhuǎn)入新的RNase-Free離心管，吸附膜中間懸空滴加100 μLRNase-Free ddH2O，室溫2 min，12 000 r／min，離心2 min，得到RNA溶液．

反轉(zhuǎn)錄．配置RT反應(yīng)液：4 μL 5×PrimeScript RT Master Mix，16 μL RNA溶液．反應(yīng)程序：37℃，15 min；85℃，5 s；4℃．將RNA轉(zhuǎn)錄為cDNA，-80℃保存．

設(shè)計(jì)引物及合成．采用 Genbank中的EWO26642．1基因序列設(shè)計(jì)并合成引物，設(shè)計(jì)的引物序列為，F(xiàn)：GGAATTCTTCCAAGACAGCCAACACAA-CAAT，R：CCGCTCGAGTTGAGCTGCTGCAGGAGCT-GCC．合成由上海生工生物工程有限公司完成．

PCR．反應(yīng)體系：1 μL模板，3 μL dNTP（2．5 mmol／L stock），5 μL Buffer（10X），0．2 μL引物F， 0．2 μL引物R，0．2 μL（5unit／μL）聚合酶（Taq DNA Polymerase，BPI），37．5 μL ddH2O．反應(yīng)程序：95℃，5 min；95℃，40 s，56℃，40 s，72℃，1 min，共30個(gè)循環(huán)；72℃，10 min．

PCR產(chǎn)物回收．將目的基因DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下，放入干凈的離心管、稱質(zhì)量．加入等倍體積溶液PN，50℃水浴至膠塊完全溶解．將所得溶液加入500 μL平衡液BL處理的吸附柱CA2中，室溫5 min，12 000 r／min，離心30～60 s，倒掉廢液，將吸附柱放回收集管．加入600 μL漂洗液PW，12 000 r／min，離心30～60 s，倒掉廢液，將吸附柱放回收集管．重復(fù)清洗一次．12 000 r／min，離心2 min，棄去廢液，室溫晾置數(shù)分鐘．轉(zhuǎn)入新的離心管，吸附膜中間懸空滴加30 μL ddH2O，室溫5 min，12 000 r／min，離心2 min，得到DNA溶液．

1．3．2 構(gòu)建重組質(zhì)粒及其驗(yàn)證 目的片段的酶切．20 μL PCR回收產(chǎn)物，2 μLEcoR I，2 μLXho I，5 μL 10 ×Buffer，37℃孵育過夜．采用瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒將酶切產(chǎn)物回收．

載體的酶切．20 μL載體（pET30a）質(zhì)粒2 μL EcoR I，2 μL Xho I，5 μL 10×Buffer，37℃孵育過夜．采用瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒將酶切的載體回收．

連接及轉(zhuǎn)化．連接體系：3 μL酶切回收產(chǎn)物，1 μL載體（pET30a），5 μL的2×Rapid Buffer，1 U T4 DNA Ligase，混勻后置于16℃孵育過夜．轉(zhuǎn)化：取出100 μL保存于-80℃的感受態(tài)細(xì)胞（BL21）置于冰上緩慢解凍．感受態(tài)細(xì)胞解凍后將連接產(chǎn)物加入并混勻，在0℃冰水混合物中放置30 min．快速移入42℃水浴鍋中熱激90 s．之后0℃冰浴2 min，再加入800 μL無任何抗性的 LB液體培養(yǎng)基．混勻后在37℃水浴箱震蕩培養(yǎng)45～60 min．之后5 000 r／min離心3 min，棄上清，留取約100～150 μL液體，吹打混勻重新懸浮菌體，將菌液涂布于有相應(yīng)抗性的LB平板．待平板晾干，置于37℃培養(yǎng)箱倒置過夜培養(yǎng)．

菌液PCR驗(yàn)證．挑取轉(zhuǎn)化平板上的單個(gè)菌落于1 mL相應(yīng)抗性的液體LB中，37℃搖床培養(yǎng)4 h；各取1 μL進(jìn)行PCR驗(yàn)證，體系如下：1 μL模板，1 μL引物F，1 μL引物R，7 μL ddH2O，10 μL 2X Taq mix-ture．反應(yīng)程序：95℃，5 min；95℃，40 s，56℃，40 s，72℃，1 min，共30個(gè)循環(huán)；72℃，10 min．

小量表達(dá)．由轉(zhuǎn)化的平板中挑取單個(gè)克隆接種到1．5 mL的LB液體培養(yǎng)基中，置于37℃搖床，200 r／min進(jìn)行培養(yǎng)．將其培養(yǎng)至A＝0．6時(shí)，IPTG（0．5 mmol／L）誘導(dǎo)，之后37℃，200 r／min培養(yǎng)2 h．取出誘導(dǎo)后的菌液1 mL，12 000 r／min將其離心1 min，棄去上清，再用50～100 μL 10 mmol／L Tris-HCl（pH 8．0）溶液將沉淀吹散，之后加入緩沖液等體積的2× loading buffer，置于100℃煮沸5 min，最后電泳進(jìn)行檢測．

細(xì)菌基因的PCR及測序驗(yàn)證．采用天根公司的細(xì)菌DNA提取試劑盒提取陽性克隆菌的DNA，之后用下述驗(yàn)證引物進(jìn)行PCR．PCR里所用的引物與上述“1．3．1”中PCR擴(kuò)增所用引物相同．得到的PCR產(chǎn)物送至上海生工生物工程有限公司進(jìn)行基因測序．將測序所得結(jié)果在NCBI blast數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行對(duì)比、分析．

1．3．3 重組蛋白大量表達(dá)及其純化 蛋白的大量表達(dá)．挑選經(jīng)過驗(yàn)證的正確菌株，接1～2 μL活化的菌液到10 mL LB液體培養(yǎng)基中，置于37℃，200 r／min培養(yǎng)．將培養(yǎng)得到的菌液轉(zhuǎn)接至500 mL LB液體培養(yǎng)基并混勻，之后37℃，200 r／min進(jìn)行，將其培養(yǎng)至A＝0．6時(shí)，再IPTG（0．5 mmol／L）誘導(dǎo)4 h．將誘導(dǎo)后的菌體收集：6 000 r／min，離心5 min．棄去上清．之后進(jìn)行超聲破菌：用25 mL 10 mmol／L Tris-HCl（pH8．0）溶液將沉淀吹散，再超聲．進(jìn)行電泳確定其表達(dá)形式：取菌液100 μL進(jìn)行超聲（500 W，90次，每次3 s，間隔6 s），將超聲后的菌懸液12 000 r／min，離心10 min，再取50 μL上清液轉(zhuǎn)移至另一EP管，將上清除去，剩余的沉淀用50 μL 10 mmol／L Tris-HCl（pH8．0）溶液將其吹散，之后加入50 μL 2×loading buffer，置于100℃煮沸5 min，最后進(jìn)行電泳．

蛋白的純化．用去離子水洗鎳柱（Ni Sepharose 6 Fast Flow，GE Healthcare），至其pH調(diào)至7．0．之后進(jìn)行掛鎳，至pH2～3．用去離子水洗柱至pH7．0．加入10 mmol／L Tris-HCl（pH8．0）溶液平衡鎳柱，大約100 mL．再用含0．5 mol／L氯化鈉的10 mmol／L Tris-HCl（pH8．0）溶液平衡鎳柱，約50 mL．之后稀釋樣品進(jìn)行上樣．樣品中含氯化鈉，使其終濃度為0．5 mol／L．上樣結(jié)束后，用含0．5 mol／L氯化鈉的10 mmol／L Tris-HCl（pH8．0）溶液洗柱．再分別用含15 mmol／L咪唑、60 mmol／L咪唑、300 mmol／L咪唑的10 mmol／L Tris-HCl（pH8．0）（含0．5 mol／L氯化鈉）溶液洗脫，分別收集蛋白峰．最后電泳檢測蛋白純化效果．

2 結(jié)果

2．1 目的基因序列 在PubMed數(shù)據(jù)庫中檢索鮑曼不動(dòng)桿菌外膜蛋白A的蛋白信息，得到其基因序列．TTCCAAGACAGCCAACACAACAATGGCGGTAAAGA TGGTAACTTAACTAACGGTCCTGAGTTACAAGACGA TTTATTCGTTGGCGCAGCTCTTGGTATCGAGTTAACT CCATGGTTAGGTTTCGAAGCTGAATATAACCAAGTT AAAGGCGACGTAGACGGCGCTTCTGCTGGTGCTGA ATATAAACAAAAACAAATCAACGGTAACTTCTATGT TACTTCTGATTTAATTACTAAAAACTACGACAGCAA AATCAAGCCGTACGTATTATTAGGTGCTGGTCACTA TAAATACGACTTTGATGGCGTAAACCGTGGTACACG TGGTACTTCTGAAGAAGGTACTTTAGGTAACGCTGG TGTTGGTGCTTTCTGGCGCTTAAACGACGCTTTATCT CTTCGTACTGAAGCTCGTGCTACTTATAATGCTGATG AAGAGTTCTGGAACTATACAGCTCTTGCTGGCTTAAA CGTAGTTCTTGGTGGTCACTTGAAGCCTGCTGCTCCT GTAGTAGAAGTTGCTCCAGTTGAACCAACTCCAGTT GCTCCACAACCACAAGAGTTAACTGAAGACCTTAA CATGGAACTTCGTGTGTTCTTTGATACTAACAAATCA AACATCAAAGACCAATACAAGCCAGAAATTGCTAAA GTTGCTGAAAAATTATCTGAATACCCTAACGCTACTG CACGTATCGAAGGTCACACAGATAACACTGGTCCAC GTAAGTTGAACGAACGTTTATCTTTAGCTCGTGCTAA CTCTGTTAAATCAGCTCTTGTAAACGAATACAACGTT GATGCTTCTCGTTTGTCTACTCAAGGTTTCGCTTGGG ATCAACCGATTGCTGACAACAAAACTAAAGAAGGTC GTGCTATGAACCGTCGTGTATTCGCGACAATCACTG GTAGCCGTACTGTAGTAGTTCAACCTGGTCAAGAAG CGGCAGCTCCTGCAGCAGCTCAA

2．2 目的基因PCR擴(kuò)增 鮑曼不動(dòng)桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC19606株OmpA基因經(jīng)PCR擴(kuò)增后所得片段（1 000 bp）（圖1）．PCR擴(kuò)增的片段大小和預(yù)期的片段大小相一致．

圖1 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

2．3 菌液PCR驗(yàn)證 載體和目的片段雙酶切并連接、轉(zhuǎn)化后的菌液PCR驗(yàn)證結(jié)果見圖2．菌液擴(kuò)增片段大小與目的片段大小一致．

2．4 構(gòu)建重組質(zhì)粒成功后蛋白小量表達(dá)結(jié)果 將構(gòu)建的重組質(zhì)粒進(jìn)行小量表達(dá)，可檢測到與預(yù)期大小一致的目的蛋白（圖3）．

圖2 菌液PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

2．5 重組質(zhì)粒PCR驗(yàn)證及測序鑒定 經(jīng)過PCR驗(yàn)證和測序鑒定，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示與預(yù)期大小片段一致的基因片段（圖4），PCR產(chǎn)物1 000 bp．將產(chǎn)物送至上海生工生物工程有限公司進(jìn)行測序，測序結(jié)果部分圖譜見圖5．將測序結(jié)果與NCBI數(shù)據(jù)庫序列進(jìn)行比對(duì)，其同源性為 100%（圖6）．

圖3 小量表達(dá)蛋白的SDS-PAGE電泳結(jié)果

圖4 插入序列PCR驗(yàn)證結(jié)果

圖5 OmpA插入片段測序部分圖譜

圖6 插入序列同源性比對(duì)結(jié)果

2．6 目的蛋白在菌體中的大量表達(dá) 目的蛋白經(jīng)過大量表達(dá)后再進(jìn)行SDS-PAGE觀察，結(jié)果顯示與預(yù)期大小蛋白的表達(dá)相一致（圖7）．

2．7 純化蛋白的表達(dá) 目的蛋白經(jīng)純化后蛋白電泳結(jié)果顯示了與預(yù)期大小一致的蛋白表達(dá)（圖8）．

3 討論

圖7 大量表達(dá)目的蛋白SDS-PAGE電泳結(jié)果

鮑曼不動(dòng)桿菌OmpA是目前研究領(lǐng)域里最為深入的外膜蛋白之一．多項(xiàng)研究顯示，鮑曼不動(dòng)桿菌已經(jīng)成為全球院內(nèi)感染的主要形式，由于其抵抗幾乎所有的常規(guī)抗生素，現(xiàn)在被美國傳染病學(xué)會(huì)列為危險(xiǎn)六個(gè)微生物之一［17-18］．有研究發(fā)現(xiàn)，鮑曼不動(dòng)桿菌OmpA基因的缺失會(huì)導(dǎo)致氯霉素、氨曲南和萘啶酸等藥物的最小抑菌濃度值［12］．OmpA是鮑曼不動(dòng)桿菌的主要非特異性通道，會(huì)使細(xì)菌整個(gè)外膜的滲透性減低．該蛋白的低滲透連同β內(nèi)酰胺酶構(gòu)成和多種藥物外排泵同時(shí)存在，是多種抗生素高耐藥必不可少的機(jī)制［19］．OmpA蛋白被認(rèn)為是靜脈感染后鮑曼不動(dòng)桿菌體液免疫應(yīng)答主要靶標(biāo)［20］，可以將外膜錨定到細(xì)胞壁［21］，與真核細(xì)胞相互作用，誘導(dǎo)其凋亡．但是，鮑曼不動(dòng)桿菌的OmpA蛋白其他具體的生物學(xué)活性尚不明確．因此，本研究旨在初步構(gòu)建OmpA重組蛋白，便于今后更好地探討OmpA蛋白的生物學(xué)活性及其具體致病機(jī)制．

圖8 蛋白純化后電泳結(jié)果

本研究從鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離株中成功克隆了OmpA基因，并采用原核表達(dá)載體pET30a對(duì)Om-pA基因進(jìn)行表達(dá)．本次實(shí)驗(yàn)中通過雙酶切與載體pET30a成功重組．之后，采用PCR方法驗(yàn)證得到與預(yù)期大小一致的基因片段，其基因測序結(jié)果表明目的基因片段與GenBank中鮑曼不動(dòng)桿菌菌株OmpA基因一致性高達(dá)100%，證實(shí)了本研究所選菌株OmpA基因與比對(duì)序列高度同源，也說明了該基因具有高度保守性．經(jīng)大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白，驗(yàn)證結(jié)果顯示該蛋白相對(duì)分子質(zhì)量為50 kD左右，與預(yù)期結(jié)果一致．但由于本研究所獲得重組蛋白含量有限，關(guān)于鮑曼不動(dòng)桿菌OmpA蛋白其他具體的生物學(xué)活性尚不能確定，有待進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗(yàn)證．

綜上所述，本研究采用基因重組的方法成功獲得了高純度的鮑曼不動(dòng)桿菌OmpA重組蛋白，并采用PCR方法和基因測序方法進(jìn)行驗(yàn)證，為進(jìn)一步研究OmpA蛋白在鮑曼不動(dòng)桿菌生物學(xué)活性以及致病機(jī)制奠定了基礎(chǔ)．

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Cloning expression and purification of Acine-tobacter baumannii outer membrane protein A

WEI Chang-Mei1，WANG Jun-Rui2，SUN Peng3，ZHANG Jun-Li21
Inner Mongolia Medical University，Hohhot 010110，China；2Clinical Laboratory，Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medi-cal University，Hohhot 010050，China；3Pathology laboratory，Inner Mongolia Medical University，Hohhot 010059，China

AIM：To provide a basis study for the biological ac-tivity of Acinetobacter baumannii outer membrane protein A（Om-pA）in Acinetobacter baumannii by preparing purified OmpA with molecular cloning technology．METHODS：PCR method was used toamplifycoded geneofOmpA ofstandard strains ATCC19606，and construct the prokaryotic expression vector pET30a／ompA．The roducts were verified by PCR method．Then the positively expressed vector was selected and was transformed into Escherichia coli expression strain（BL21 strain）．The ex-pression products were purified finally．RESULTS：pET30a／om-pA recombination expression vector was successfully constructed and verified by PCR method．The target protein was highly ex-pressed in prokaryotic expression system，and the ideal OmpA of Acinetobacter baumannii was obtained．CONCLUSION：In this experiment，Acinetobacter baumannii outer membrane protein A gene was successfully expressed in the constructed prokaryotic ex-pression system by molecular cloning technology and the highly purified target protein，which provide a basis for further investiga-ting the biological activities of Acinetobacter baumannii OmpA protein and the protective effects of its polyclonal antibody．

Acinetobacter baumannii；outer membrane protein A；expression and purification

R378

A

2095-6894（2015）05-001-06

2015-04-01；接受日期：2015-04-10

內(nèi)蒙古自然科學(xué)基金（2013MS1127）

魏常梅．在讀碩士．E-mail：weichangmei1234＠163．com

張軍力．E-mail：junli0099＠sina．com