藍(lán)顯明 曾 彬 唐淑妮

大腸癌是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病率近年來隨著生活方式的改變不斷上升，患者不良預(yù)后的發(fā)生率亦逐年增加［1］。腫瘤的形成、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)歸均與多種基因的異常表達(dá)相關(guān)［2］，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與癌癥患者的預(yù)后密切相關(guān)［3］。早期預(yù)測大腸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生可為患者的療效提高和預(yù)后的改善提供指導(dǎo)。磷酸酶和張力蛋白同源物基因(phosphatase and tension homology detected on chromosome ten，PTEN)是目前發(fā)現(xiàn)的唯一具有磷酸酶活性的抑癌基因，其失活與多種癌癥的發(fā)生發(fā)展相關(guān)［4］。環(huán)氧合酶-2(cycloox-ygenase，COX-2)的表達(dá)亦與多種腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移相關(guān)［5］。然而目前國內(nèi)外對PTEN、COX-2的表達(dá)與大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系研究報道較少。本研究分析大腸癌組織中PTEN、COX-2的表達(dá)及其與大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，為大腸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)防和預(yù)后的改善提供依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2012年1月至2014年9月期間我院手術(shù)切除所得100例患者的大腸癌組織和正常大腸組織。納入標(biāo)準(zhǔn)［6］:所有患者術(shù)前均未采用放療或化療治療，且術(shù)前檢查均未發(fā)現(xiàn)合并其他癌癥。排除標(biāo)準(zhǔn)［7］:排除合并其他癌癥和嚴(yán)重肝腎功能疾病的患者。100例患者中男性50例，女性50例，年齡26～68歲，平均年齡(48.56±9.63)歲，其中高分化癌25例、中分化癌24例，低分化癌51例。

1.2 檢查方法

術(shù)后3 d內(nèi)所有患者均接受淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的檢查。采用免疫組化法檢測大腸癌組織和正常大腸組織中PTEN、COX-2的表達(dá)。所有檢測標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定和石蠟包埋并制成4 μm的連續(xù)切片。采用HE和免疫組化SP進(jìn)行染色。PTEN、COX-2免疫組化試劑盒均由武漢博士德公司提供，染色操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 染色判定

PTEN、COX-2均主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，顯微鏡下染色呈黃色或棕色顆粒為表達(dá)陽性。顯微鏡檢查均隨機(jī)選取10個高倍視野進(jìn)行檢測，根據(jù)染色強(qiáng)度和比例判斷染色結(jié)果，其中陰性(-)為無細(xì)胞染色、弱陽性(+)為黃色或棕色的細(xì)胞數(shù)為0%～25%、陽性(++)為黃色或棕色的細(xì)胞數(shù)為26%～50%、強(qiáng)陽性(+++)黃色或棕色的細(xì)胞數(shù)為51%～100%。陽性表達(dá)率=弱陽性表達(dá)率+陽性表達(dá)率+強(qiáng)陽性表達(dá)率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件，計數(shù)資料比較采用卡方檢驗，大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與PTEN、COX-2表達(dá)的相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大腸癌組織和正常大腸組織中PTEN、COX-2的表達(dá)比較

與正常大腸組織比較，大腸癌組織中PTEN的陽性表達(dá)率明顯降低，而COX-2的陽性表達(dá)率則明顯升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=63.16、147.98，P 均＜0.01)，見表1。

表1 大腸癌組織和正常大腸組織中PTEN、COX-2的表達(dá)(例，%)

2.2 不同PTEN、COX-2表達(dá)水平患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率比較

與PTEN陽性表達(dá)患者比較，PTEN陰性表達(dá)患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率明顯升高;與COX-2陽性表達(dá)患者比較，COX-2陰性表達(dá)患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，見表2。

表2 不同PTEN、COX-2表達(dá)水平患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率比較(例，%)

2.3 大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與PTEN、COX-2表達(dá)的相關(guān)性分析

Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，隨著大腸癌患者PTEN陽性表達(dá)率的增加，其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率降低，而隨著大腸癌患者COX-2陽性表達(dá)率的增加，其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率升高。大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與其PTEN的陽性表達(dá)率呈負(fù)相關(guān)(γ=-0.758，P＜0.05)，與其 COX-2陽性表達(dá)率則呈正相關(guān)(γ=0.792，P＜0.05)。

3 討論

近年來隨著生活水平的提高和生活方式的改變，各類腫瘤疾病的發(fā)病率不斷上升。大腸癌是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展與多種基因的多階段變化相關(guān)，其中致癌基因的激活及抑癌基因的失活在癌癥發(fā)生、發(fā)展中具有重要的作用［8-9］。PTEN作為近年來發(fā)現(xiàn)的唯一具有磷酸酶活性的抑癌基因，是繼p53之后被發(fā)現(xiàn)的人類腫瘤疾病中突變率最高的抑癌基因，主要依賴脂質(zhì)磷酸酶參與細(xì)胞凋亡的調(diào)控從而抑制癌癥的形成［10-11］。COX-2基因是誘導(dǎo)型“快速反應(yīng)基因”，受到刺激時可迅速合成參與癌癥的發(fā)生和發(fā)展，可作用于細(xì)胞生長、分化和代謝過程，從而導(dǎo)致癌變的發(fā)生，可在食管癌、胰腺癌、腎癌等多種癌癥組織中表達(dá)，在腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移中具有重要作用［12］。腫瘤患者的預(yù)后與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)［13］。因此對腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)測有利于其患者預(yù)后的改善。目前國內(nèi)外對PTEN和COX-2基因與大腸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系研究報道甚少，明確PTEN和COX-2基因與大腸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系可預(yù)測大腸癌患者的預(yù)后情況，為患者不良預(yù)后的預(yù)防提供依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示，大腸癌組織中PTEN基因的陽性表達(dá)率明顯降低，COX-2基因的陽性表達(dá)率則明顯升高，提示PTEN抑癌基因的失活和COX-2致癌基因的激活與大腸癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。COX-2基因可通過減弱和抑制NO信號通道從而抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生，同時可作用于VEGF，使VEGF表達(dá)水平上升，促進(jìn)腫瘤血管的發(fā)生和腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移，調(diào)節(jié)免疫抑制功能和導(dǎo)致PTEN抑癌基因的失活，促進(jìn)癌癥的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。大腸癌患者中約一半的患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高，可明顯影響患者的預(yù)后，造成不良預(yù)后的發(fā)生，因此對大腸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)測并進(jìn)行預(yù)防對其預(yù)后的改善具有重要意義。隨著大腸癌患者PTEN抑癌基因陽性表達(dá)率的下降和COX-2致癌基因陽性表達(dá)率的上升，其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率升高，提示大腸癌患者PTEN和COX-2基因的表達(dá)可能與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生相關(guān)。進(jìn)一步采用Spearman秩相關(guān)分析對大腸癌患者PTEN和COX-2基因的表達(dá)與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，大腸癌患者PTEN基因陽性表達(dá)率與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)，而患者COX-2基因陽性表達(dá)率與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生則呈正相關(guān)，PTEN基因的低表達(dá)和COX-2基因的高表達(dá)可預(yù)測大腸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生，因此對于PTEN陽性表達(dá)率降低和COX-2基因陽性表達(dá)率增高的患者需及時進(jìn)行治療干預(yù)以預(yù)防其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后的發(fā)生。

綜上所述，大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與其PTEN和COX-2基因的表達(dá)相關(guān)，大腸癌患者PTEN表達(dá)水平的降低和COX-2表達(dá)水平的升高可預(yù)測其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生，根據(jù)預(yù)測結(jié)果早期進(jìn)行干預(yù)有利于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)防和預(yù)后的改善。

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