賴穎真, 林 珊, 陳 江

(1. 廈門醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)?？谇会t(yī)學(xué)系, 福建 廈門 361000;2. 福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院口腔科, 福建 福州 350000);3. 福建醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院種植科, 福建 福州 350002)

微溝槽形貌對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞整聯(lián)蛋白intergrin α5、β1表達(dá)的影響

賴穎真1, 林 珊2, 陳 江3

(1. 廈門醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校口腔醫(yī)學(xué)系, 福建 廈門 361000;2. 福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院口腔科, 福建 福州 350000);3. 福建醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院種植科, 福建 福州 350002)

目的: 研究微溝槽形貌對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞(HGF)整聯(lián)蛋白intergrin α5、integrn β1表達(dá)的影響。方法: 用光刻技術(shù)制作溝槽寬度分別為15、30、60 μm，溝槽深度分別為5、10 μm(溝槽間隔分別等于各相應(yīng)寬度)的微溝槽形貌，分別命名為T15/5、T15/10、T30/5、T30/10、T60/5、T60/10，光滑鈦(T0)表面作為對(duì)照組；分別測(cè)量各組材料表面的微溝槽形貌及親水性，用Real time- PCR和Western blotting 檢測(cè)HGF在各組材料表面培養(yǎng)3 d時(shí)的intergrin α5和β1mRNA及蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果: T60/5表面親水性最好, T15/10疏水性最大并明顯大于光滑組T0(P<0.05)； intergrin α5mRNA表達(dá)水平以T60/10組最高，而T15/10時(shí)最低，各組間兩兩相比P<0.05；溝槽寬度較小時(shí)(T15、T30)，若深度增加則可減少intergrin α5mRNA的表達(dá)，而溝槽寬度較大時(shí)(T60)，若深度增加則可促進(jìn)intergrin α5mRNA的表達(dá)；intergrin β1mRNA的表達(dá)水平以T60/10組最高，與其他各組相比P<0.05；其余3組間比較均P>0.05，intergrin α5、 intergrin β1蛋白的表達(dá)趨勢(shì)與其mRNA的表達(dá)基本一致。結(jié)論: intergrin α5和β1表達(dá)隨著溝槽寬度增大而增加，深度對(duì)intergrin α5表達(dá)的影響與溝槽的寬度大小相關(guān)，溝槽寬度和深度對(duì)intergrin β1表達(dá)的影響程度低于intergrin α5。

種植體; 微溝槽; 人牙齦成纖維細(xì)胞; 整聯(lián)蛋白

[DOI] 10.15956/j.cnki.chin.j.conserv.dent.2015.01.002

[Chinese Journal of Conservative Dentistry,2015,25(1):8]

為了防止牙種植體軟組織周圍細(xì)胞根方遷移，本實(shí)驗(yàn)擬對(duì)種植體穿齦部分材料表面進(jìn)行溝槽化的設(shè)計(jì)，以誘導(dǎo)種植體周圍軟組織細(xì)胞能垂直于種植體長(zhǎng)軸的溝槽生長(zhǎng)，使之有利于建立良好的種植體軟組織愈合[1]。Lai等[2]針對(duì)牙齦成纖維細(xì)胞的大小設(shè)計(jì)不同寬度和深度的溝槽表面，經(jīng)研究證明，不同尺寸的溝槽形貌均能夠成功誘導(dǎo)細(xì)胞順著溝槽生長(zhǎng)[2]。有研究報(bào)道，細(xì)胞粘附于材料表面主要依靠粘著斑附著( FAs )[3]。FAs是將細(xì)胞錨定在材料表面的結(jié)構(gòu)，可作為一個(gè)跨膜裝置將肌動(dòng)蛋白纖維與細(xì)胞外基質(zhì)相連；典型的FAs結(jié)構(gòu)由跨膜蛋白-整聯(lián)蛋白(intergrin α5、β1)構(gòu)成，其胞外段與細(xì)胞外基質(zhì)-纖維連接蛋白(Fibronectin)實(shí)現(xiàn)受配體的結(jié)合，并最終構(gòu)成一個(gè)細(xì)胞外基質(zhì)-intergrin-細(xì)胞骨架跨膜系統(tǒng)[4]。由于細(xì)胞附著的好壞與intergrin α5、β1蛋白的表達(dá)密切相關(guān)，故本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察不同尺寸微溝槽對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞(Human gingival fibroblasts，HGF) 表達(dá)intergrin α5、β1的影響，以期為選擇合適的種植體穿齦部分的溝槽尺寸提供參考。

1 材料和方法

1.1 主要材料和設(shè)備

1.1.1 微溝槽制備材料及其檢測(cè)設(shè)備

4英寸的硅片、腐蝕液(3HF ∶6NH4F ∶10H2O)、光刻膠、清洗液(4H2SO4+H202，NH4OH +H2O2+5H2O，HNO3+ H2O2+5H2O)、氧化4470四管微控制擴(kuò)散系統(tǒng)、Karlsuss MA6/BA6光刻鍵合對(duì)準(zhǔn)機(jī)、雙管等離子體去膠機(jī)-DQ-500、JS- 3X-100B 磁控濺射臺(tái)、環(huán)境掃描電鏡(XL30 ESEM- TMP)、視頻光學(xué)接觸角測(cè)量?jī)xOCA20(dataphysics，德國(guó)) 。

1.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)、基因和蛋白檢測(cè)材料及設(shè)備

胎牛血清(FBS)(HyClon，美國(guó))；DMEM低糖培養(yǎng)液、2.5 g/L胰蛋白酶(Gibco，美國(guó)); Trizol reagent (Invitrogen)； PrimeScript? RT reagent Kit逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(DRR037A)、SYBR? Premix Ex TaqTMII PCR試劑盒(Tli RNaseH Plus Code:DRR820A)、RNA酶抑制劑(TaKaRa)； NanoDrop 2000( Thermo)； ABI 7500 real- time PCR cycler (Applied Biosystems); RIPA buffer (P0013B)、BCA蛋白定量試劑盒(P0012)(碧云天)；Halt Protease Inhibitor Cocktail (Thermo, 美國(guó))；Integrin α5Antibody (1 ∶1 000, #4705, Cellsignaling)、Integrin β1Antibody (1 ∶1 000, #4706, Cellsignaling)、Anti- GAPDH (1 ∶20 000, G8795)、Anti- Mouse IgG- Peroxidase antibody(1 ∶80 000, A2304)(Sigma)；Minigel system、SDS- PAGE脫色搖床、Western blotting transfer apparatus (BIO- RAD，美國(guó))。

1.2 微溝槽表面樣本的制備

參照文獻(xiàn)[2]報(bào)道的方法，采用光刻技術(shù)在4英寸的硅片上制備不同寬度和深度的溝槽：首先用掩膜板在硅片上確定出溝槽的間距，并使之分別為15、30、60 μm；然后再在每一種溝槽間距的硅片上，按圖1a所示的步驟制備出寬度與該硅片預(yù)設(shè)溝槽間距相等的溝槽，并通過(guò)蝕刻時(shí)間控制使每一種寬度溝槽的深度分別為5 μm和10 μm；經(jīng)檢測(cè)確定各溝槽剖面均為倒梯形，溝槽側(cè)壁與頂部交角均為54.74°(圖1b)后，分別在各材料表面濺射200 nm Ti，并根據(jù)溝槽的寬度和深度，分組命名為:T15/5、T15/10、T30/5、T30/10、T60/5、T60/10；另設(shè)光滑鈦表面作為對(duì)照，并命名為T0。上述制備完成的所有樣本分別經(jīng)丙酮超聲清洗3 min、無(wú)水乙醇浸泡2 h后，滅菌純凈水沖洗2次，并放置于超凈臺(tái)內(nèi)紫外光照射消毒30 min備用。

a. 光刻步驟示意圖 b. 各組材料表面示意圖

圖1 材料制作和形貌示意圖

1.3 各向異性微溝槽的形貌表征觀察

采用環(huán)境掃描電鏡(ESEM)，在放大1 000倍條件下觀察各組樣本表面微溝槽的正面和側(cè)面形貌；同時(shí)測(cè)量微溝槽的深度和寬度[2]。

1.4 各組樣本表面的親水性測(cè)量

每組各取7個(gè)樣本，分別在其表面的不同部位各滴1 μL蒸餾水，并使液滴的初始方向垂直于溝槽的方向；然后采用OCA20視頻光學(xué)接觸角測(cè)量?jī)x分別檢測(cè)10 s內(nèi)1 μL蒸餾水在各樣本表面的接觸角，用以評(píng)價(jià)各樣本表面的親水性。每個(gè)樣本的不同位置各檢測(cè)2次，取平均值[2]。

1.5 微溝槽形貌對(duì)HGF 表達(dá)intergrin α5、β1影響的觀察

1.5.1 HGF 體外培養(yǎng)和分組處理

參照文獻(xiàn)[2]報(bào)道的方法體外原代培養(yǎng)HGF，常規(guī)傳代后取第6代細(xì)胞以3×105/孔的密度接種于置有各組樣本片的6孔板，并于每孔中各加入3 mL DMEM低糖培養(yǎng)液，常規(guī)條件下進(jìn)行培養(yǎng)。連續(xù)培養(yǎng)3 d后，分別進(jìn)行以下檢測(cè)。

1.5.2 PT- PCR檢測(cè)intergrin α5、β1mRNA表達(dá)

取上述培養(yǎng)3 d后的各組樣本片(每組材料各6孔)，分別轉(zhuǎn)移到新的6孔板后用1 mL Trizol收集細(xì)胞并提取細(xì)胞總RNA；用NanoDrop 2000檢測(cè)各組RNA 260/280波長(zhǎng)的吸光度值以確定其濃度(ng/μL)后，分別將各RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。然后以cDNA為模板，β- actin為內(nèi)參照進(jìn)行Real- time PCR反應(yīng)，反應(yīng)體系和反應(yīng)條件均嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明；所用引物TAKARA由大連寶生物合成，各目的基因引物序列見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次(每次每組各2個(gè)復(fù)孔)，所得結(jié)果用ABI7500 Software V 2.0.1.軟件導(dǎo)出各組Ct值，并采用2-ΔΔCt法計(jì)算intergrin α5、β1mRNA 的相對(duì)表達(dá)量。

表1 各蛋白相對(duì)應(yīng)的引物序列

1.5.3 Western blotting檢測(cè)intergrin α5、β1蛋白的表達(dá)

取上述培養(yǎng)3 d后的各組樣本片(每組各6孔)并分別轉(zhuǎn)移到新的6孔板，PBS沖洗1次后，每孔加入1 mL Acctuse 37 ℃消化3 min；加入培養(yǎng)液終止消化并反復(fù)吹打使材料片上的細(xì)胞盡可能完全脫離后，收集各組細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到離心管中離心去上清。分別在每個(gè)離心管中各加入200 μL含磷酸酶抑制劑的裂解液，用BCA法測(cè)定蛋白濃度后，進(jìn)行SDS- PAGE蛋白電泳并轉(zhuǎn)膜；然后分別滴加一抗integrin α5Antibody、integrin β1Antibody以及內(nèi)參抗體Anti- GAPDH并孵育2 h；滴加二抗Anti-Mouse IgG- Peroxidase antibody孵育1 h后，ECL顯色、曝光、定影、顯影，最后用凝膠灰度分析軟件Quantity One 4.6.2進(jìn)行灰度值定量分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 各向異性微溝槽的形貌表征

SEM觀察顯示，不同寬度和深度的微溝槽表面均呈現(xiàn)規(guī)則的各向異性排列走向(圖2), 經(jīng)測(cè)量各組溝槽的寬度、間隔和深度、表面尺寸均符合原始設(shè)計(jì)尺寸要求[2]。

圖2 樣本表面形貌SEM觀察(1 000×)

2.2 各組親水性和接觸角比較

各組材料表面的親水性測(cè)試見(jiàn)圖3a,統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：T60組的接觸角均明顯小于其他寬度的微溝槽表面(P<0.05)；其中以T60/5組的接觸角最小(約25.09°)，親水性最好，T15/10組的接觸角最大(106.66°)，疏水性最強(qiáng)，甚至大于光滑組T0(97.36°)；在相同寬度下T60/10、T30/10、T15/10的接觸角分別大于T60/5、T30/5、T15/5，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.005)(圖3b)。提示隨著溝槽寬度變窄和深度增加，其材料表面的疏水性也顯著增大。

2.3 不同微溝槽對(duì)HGF表達(dá)intergrin α5、β1mRNA的影響

各組intergrin α5mRNA檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖4a，其表達(dá)水平隨著溝槽寬度的增加而增大，其中以T60組的表達(dá)水平最高，T15組最低；各組間兩兩相比除T15/5與T0組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)外，其余各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；當(dāng)溝槽的寬度小于60 μm時(shí)，若溝槽的深度增加則可減少intergrin α5的表達(dá)，其中T15/10明顯小于T15/5 (P<0.05)、T30/10明顯小于T30/5(P<0.05)；而溝槽寬度較大的T60組則相反，當(dāng)溝槽的深度增加時(shí)可促進(jìn)intergrin α5mRNA的表達(dá)，即T60/10明顯大于T60/5(P<0.05)。

各組intergrin β1mRNA檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖4b, 各組間的差異不如intergrin α5大，除T60/10組的表達(dá)水平明顯高于其他各組(P<0.05)，且T60/10明顯高于T60/5(P<0.05)外，T0、T15、T30 3組的表達(dá)量均相似(P>0.05)，在相同溝槽寬度下不同深度間相比亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

圖3 各組材料表面親水性測(cè)量結(jié)果(* P<0.05)

圖4 各組intergrin α5、β1 mRNA表達(dá)水平比較(*P<0.05)

2.4 不同微溝槽對(duì)HGF表達(dá)intergrin α5、β1蛋白的影響(圖5)

圖5 各組intergrin α5、β1 蛋白表達(dá)水平比較(* P<0.05)

各組intergrin α5蛋白檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖5a，其表達(dá)趨勢(shì)與mRNA的表達(dá)基本一致，區(qū)別在于T15/5組的蛋白表達(dá)水平低于T0組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；當(dāng)溝槽寬度為15 μm時(shí)，溝槽深度的增加可使蛋白表達(dá)減少，即T15/10組的表達(dá)水平明顯低于T15/5組(P<0.05)；當(dāng)溝槽寬度60 μm時(shí)，溝槽深度的增加可使蛋白表達(dá)增多，即T60/10組的表達(dá)水平明顯大于T60/5(P<0.05)；當(dāng)溝槽寬度為30 μm時(shí)，溝槽深度的增加對(duì)intergrin α5蛋白的表達(dá)沒(méi)有影響。

各組intergrin β1蛋白檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖5b，其表達(dá)趨勢(shì)與mRNA的表達(dá)基本一致，不同的是T60/5和T60/10兩組的蛋白表達(dá)水平明顯大于其他各組(P<0.05)；而T0、T15、T30 3組的表達(dá)量均相似(P>0.05)，相同溝槽寬度下不同深度間相比亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

3 討論

intergrin蛋白由一個(gè)α亞基和一個(gè)β亞基構(gòu)成。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)18種α亞基和9種β亞基，這些亞基通過(guò)不同組合方式可構(gòu)成至少25種整聯(lián)蛋白。FAs中主要為整合素α5、β1，是纖維連接蛋白的受體，當(dāng)細(xì)胞接觸到ECM纖維連接蛋白(FN)后，intergrin α5、β1即被激活，此時(shí)α亞基的胞外區(qū)段所含的能識(shí)別細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的RGD序列[5]就可介導(dǎo)intergrin與ECM的粘附；而β亞基的胞內(nèi)區(qū)段則可與細(xì)胞骨架相連，最終構(gòu)成一個(gè)ECM- intergrin- 細(xì)胞骨架跨膜系統(tǒng)；在這個(gè)過(guò)程中，細(xì)胞內(nèi)部分還與酪氨酸磷酸酶-粘著斑激酶(FAK)相關(guān)聯(lián)[4]。有研究證明intergrin還存在力學(xué)敏感性，即可通過(guò)力學(xué)刺激激活intergrin并使其達(dá)到更高的親和力，從而增加其介導(dǎo)的與ECM的粘附效力；而且這種新結(jié)合的intergrin 能激發(fā)后續(xù)與其相關(guān)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑[6]。該跨膜系統(tǒng)可雙向傳導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)，并能誘導(dǎo)細(xì)胞骨架重排，從而廣泛影響細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、凋亡等[5]。有研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞首先通過(guò)intergrin蛋白識(shí)別外界的條件是否有利于粘附，當(dāng)細(xì)胞感受到外界的條件適合粘附時(shí)，則將信號(hào)傳遞入細(xì)胞內(nèi)并表達(dá)和招募Vinculin以促進(jìn)ECM的合成；而當(dāng)細(xì)胞感受到外界環(huán)境不適宜粘附時(shí)，則通過(guò)產(chǎn)生系列蛋白酶分解蛋白，從而抑制細(xì)胞的吸附[7]。以上研究結(jié)果提示，intergrin在材料表面粘附的位置對(duì)后續(xù)細(xì)胞的粘附起著重要作用。

有研究表明，當(dāng)細(xì)胞受到被動(dòng)動(dòng)力學(xué)刺激(如對(duì)牙齦或牙周成纖維細(xì)胞施加牽引力)時(shí)，能增加intergrin α5、β1蛋白表達(dá)[8-9]。此外，細(xì)胞的附著通常由intergrin蛋白決定，細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境形貌和形態(tài)的改變會(huì)影響細(xì)胞粘附所需要的配體分布和溶度[10]，并進(jìn)而影響細(xì)胞跨膜intergrin 蛋白的表達(dá)和功能。有研究證明，當(dāng)細(xì)胞受到主動(dòng)力學(xué)刺激即表面形貌的改變時(shí)，也能影響intergrin的表達(dá)和分布。Teixeira[11]、Stevens[12]等研究指出，粘附表面的微孔結(jié)構(gòu)能影響intergrin 粘附蛋白的表達(dá)和分布，并進(jìn)而激活粘著斑激酶(FAK)使之成為細(xì)胞粘附、增殖的基本條件。另有研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞在溝槽表面會(huì)產(chǎn)生不同程度的形變，且隨著溝槽寬度的增加而形變?cè)龃?，表明?xì)胞產(chǎn)生的形變作用是細(xì)胞受到溝槽形貌力學(xué)作用后的一種反應(yīng)[2]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HGF在相對(duì)較寬(T30和T60)的溝槽表面時(shí)，其intergrin α5的表達(dá)水平均明顯高于T0組，其中T60組的表達(dá)量又明顯高于T30組；而T15組的intergrin α5蛋白基因表達(dá)量甚至明顯低于光滑組(intergrin β1在T15、T30組與T0組無(wú)差異)。由以上結(jié)果可以推測(cè)，intergrin α5蛋白的表達(dá)除了與細(xì)胞受力有關(guān)外，還與粘附表面的幾何寬度有關(guān)。另外，在同一個(gè)細(xì)胞粘附表面存在斷層情況下，也會(huì)影響粘附結(jié)構(gòu)蛋白intergrin α5的表達(dá)，此時(shí)深度越大表達(dá)量越低(T15/10組 intergrin α5表達(dá)水平明顯低于T15/5組)；提示，溝槽的深度越大，導(dǎo)致細(xì)胞懸空附著的程度越大，就越不利于粘附結(jié)構(gòu)蛋白intergrin α5的表達(dá)，比較intergrin α5和intergrin β1蛋白的表達(dá)水平還發(fā)現(xiàn)，溝槽寬度和深度對(duì)intergrin α5蛋白表達(dá)的影響大于后者，與Lin Wang等的研究結(jié)果一致[13]；該作者認(rèn)為，intergrin α5、β1對(duì)三維形貌的反應(yīng)程度不一致，其中intergrin α5蛋白對(duì)三維形貌的垂直軸向更為敏感，不同的三維形貌可導(dǎo)致其表達(dá)量的差異加大。

此外，intergrin的表達(dá)還可能與材料表面的親水性相關(guān)[14]，增加材料表面的親水性更有利于液態(tài)環(huán)境下培養(yǎng)的細(xì)胞接觸材料表面，從而促進(jìn)其intergrin的表達(dá)[15]。本試驗(yàn)中各組材料的表面接觸角測(cè)定結(jié)果顯示，其親水性隨著溝槽的加寬而增強(qiáng)，其中T15/5組和T15/10組表面的接觸角甚至高于光滑表面；由于T15組材料表面呈強(qiáng)疏水性可能是導(dǎo)致其intergrin α5蛋白的表達(dá)水平比光滑表面少的另一主要原因。此外，T60/5的親水性高于T60/10，而intergrin α5蛋白表達(dá)水平也是后者高于前者，可能與深度的增加加大了溝槽側(cè)壁的粘附面有關(guān)，或由于T60/10材料表面的細(xì)胞形變率較高而受到力學(xué)作用最大相關(guān)聯(lián)。

綜合以上，intergrin蛋白可直接參與將力信號(hào)轉(zhuǎn)換為生物化學(xué)信號(hào)或作為力學(xué)信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中的關(guān)鍵中介，而細(xì)胞骨架(核)的形變則是細(xì)胞受到環(huán)境影響而導(dǎo)致的力學(xué)作用的間接表達(dá)；因此intergrin的表達(dá)不僅與細(xì)胞受形貌主動(dòng)力學(xué)作用后的變形程度有關(guān)，還與粘附表面的幾何形貌尺寸大小、材料表面的親水性有關(guān)。由于intergrin α5亞基與胞外環(huán)境連接因此比β1亞基受外界環(huán)境的影響較大，所以T15組的intergrin α5蛋白的表達(dá)水平最低，可能與其表面疏水性和過(guò)窄的溝槽形貌不利于細(xì)胞粘附有關(guān)。而T60表面細(xì)胞骨架形變大、材料表面親水性高、粘附表面幾何平面連續(xù)性較大等可能是T60/10組intergrin表達(dá)水平最高的原因。就細(xì)胞粘附中起重要作用的粘著斑附著(FAs)-跨膜結(jié)構(gòu)蛋白intergrin α5、β1表達(dá)而言，建議將T60/10作為種植體穿齦部分的微溝槽尺寸。

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Effects of microgroove surface morphology on the expression of intergrin α5and intergrin β1in human gingival fibroblasts

LAI Ying- zhen*, LIN Shan, CHEN Jiang

(*DepartmentofOralMedicine,Xiamenmedicalcollege,Xiamen361000,China)

AIM: To investigate the effects of microgroove surface morphology on the expression of intergrin α5and intergrin β1in human gingival fibroblasts(HGFs). METHODS: Microgroove titanium surface was fabricated by photolithography with parallel grooves: 15 μm, 30 μm or 60 μm in width and 5 μm or 10 μm in depth. The combinations of groove width and depth were hereafter denoted as T15/5, T15/10, T30/5, T30/10, T60/5 and T60/10. Smooth titanium surface(T0) was used as the control. Surface topography and hydrophilicity were detected. HGFs were cultured on the microgroove surfaces for 3 days. Intergrin α5and intergrin β1expression was examined by Real- time PCR and western blotting. RESULTS: T60/5 microgroove showed the highest surface hydrophilicity. However, T15/10 had the highest surface hydrophobicity, even higher than T0 (P<0.05). T60/10 group showed the highest expression of intergrin α5and intergrin β1mRNA, and in T15/10 group the lowest (P<0.05). In groups with lower microgroove depth (T15, T30), expression of intergrin α5decreased with the increase of microgroove depth; while in groups with higher microgroove depth (T60), expression of intergrin α5mRNA increased with the increase of microgroove depth. T60/10 group showed the highest expression of intergrin β1mRNA (P<0.05), among the other 3 groups,P>0.05. The expression of intergrin α5and β1 protein showed similar pattern with mRNA expression. CONCLUSION: The effects of microgroove depth on intergrin α5and intergin β1depended on micro- groove width. Microgroove width and depth showed less effect on intergrin β1mRNA and protein when compared to that on intergrin α5.

implant; microgroove; human gingival fibroblasts; intergrin

2014-07-16

賴穎真(1984-), 女， 漢族，福建人。博士，講師，主治醫(yī)師

林 珊, E-mail: 121708065@qq.com

R780.2

A

1005-2593(2015)01-0008-07