張 哲 霍 巖 周 明 喬 楠 (錦州市第二醫(yī)院創(chuàng)傷骨科，遼寧 錦州 121000)

老年骨肉瘤發(fā)生與常見的中青年骨肉瘤相比，可能具有不同特征。老年人常伴有骨質(zhì)疏松，并常伴有相關(guān)的病變，如骨Paget病、放射后骨肉瘤等，也有少數(shù)呈普通型骨肉瘤的病變。病理學(xué)顯示腫瘤性骨組織，并伴有明顯異型性，其間質(zhì)可見較多血管，證實(shí)骨肉瘤是富于血管的腫瘤〔1〕。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是經(jīng)典的血管內(nèi)皮生成促進(jìn)因子，其高表達(dá)時(shí)可以激活血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖〔2，3〕。癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子(CEACAM)6是免疫球蛋白超家族的重要成員，相對(duì)分子量為90～95 kD〔4〕。在腫瘤相關(guān)因素誘導(dǎo)下，CEACAM6表達(dá)可以升高，引起腫瘤細(xì)胞的增生和間質(zhì)的血管生成〔4〕，此時(shí)細(xì)胞增殖活躍，生長旺盛。本研究觀察老年人骨肉瘤中CEACAM6、VEGF及白細(xì)胞分化抗原(CD)31標(biāo)記的微血管密度(MVD)的特征。

1 材料與方法

1.1一般資料 我院確診骨肉瘤患者43例作為觀察組，其中男30例，女13例;年齡60～75歲，平均63歲。腫瘤發(fā)生部位:股骨18例，脛骨13例，肱骨3例，腓骨3例，其他部位6例。

1.2方法 CEACAM6、VEGF和CD31試劑均購自武漢博士德生物工程公司，蛋白的檢測應(yīng)用免疫組化SP法、應(yīng)用DAB染色。嚴(yán)格按說明書操作，減少誤差，做好質(zhì)控工作。

1.3結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) CEACAM6和VEGF的陽性部位為細(xì)胞質(zhì)，出現(xiàn)深棕色顆粒為陽性細(xì)胞，選擇腫瘤細(xì)胞密集且典型的區(qū)域進(jìn)行觀察，選擇5個(gè)400倍高倍視野，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞的百分率，取平均值，陽性率≥25%為陽性，＜25%為陰性。CD31的陽性部位為細(xì)胞質(zhì)，其染色的特異性細(xì)胞為血管內(nèi)皮細(xì)胞，以染成深棕色的內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞叢定為一個(gè)血管。選擇間質(zhì)染色較為密集的區(qū)域，記錄5個(gè)400倍高倍視野內(nèi)的微血管數(shù)，取其平均數(shù)作為最終MVD值。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和線性相關(guān)分析。

2結(jié)果

2.1觀察組CEACAM6和VEGF表達(dá)的陽性率、MVD值觀察觀察組CEACAM6表達(dá)的陽性率是24% ～86%，VEGF表達(dá)的陽性率是34% ～90%，MVD值是12～46個(gè)。

2.2CEACAM6和VEGF表達(dá)的陽性率、MVD值在觀察組不同特征分組中的比較 觀察組中CEACAM6和VEGF表達(dá)的陽性率、MVD值均與腫瘤最大徑和Ki67增殖指數(shù)密切相關(guān)。見表1。

2.3CEACAM6、VEGF與CD105在老年人骨肉瘤中表達(dá)的關(guān)系 骨肉瘤中CEACAM6表達(dá)與MVD呈正相關(guān)(r=0.48，P＜0.05)，VEGF 表達(dá)與 MVD 呈正相關(guān)(r=0.54，P＜0.05)，CEACAM6與VEGF表達(dá)呈正相關(guān)性(r=0.44，P＜0.05)。

表1CEACAM6和VEGF表達(dá)的陽性率、MVD值在觀察組不同特征分組中的比較〔n(%)〕

3討論

骨肉瘤是成骨性腫瘤，雖然最常發(fā)生于年輕人;但是老年人也可以出現(xiàn)腫瘤性病變，大部分與Paget骨肉瘤、放療后肉瘤或輻射后引起的肉瘤相關(guān)。由于老年人骨骼具有退行性改變，且常伴有不同程度的代謝性改變，其可能有特異性改變。病變過程中腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移均依賴于腫瘤內(nèi)新生血管的形成〔5〕。新生血管的觀察有賴于血管生成促進(jìn)因子的激活。王東等〔6〕通過在骨肉瘤中觀察VEGF的表達(dá)，認(rèn)為在血管生成以前腫瘤細(xì)胞是很少進(jìn)入循環(huán)的，而間質(zhì)血管的新生為腫瘤細(xì)胞進(jìn)入脈管提供了便捷的途徑，因此腫瘤轉(zhuǎn)移也依賴血管的生成。由于新生毛細(xì)血管的基底膜常不連續(xù)，且存在較多的間隙，因此腫瘤細(xì)胞可以利用此間隙進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)〔7，8〕。因此血管生成對(duì)腫瘤進(jìn)展同樣具有重要促進(jìn)作用。CD31是血管內(nèi)皮細(xì)胞較為特異性的標(biāo)志物，對(duì)新生血管的標(biāo)記作用強(qiáng)〔9，10〕。CEACAM6在發(fā)揮作用過程中，可以特征性地識(shí)別靶基因DNA序列中的E盒序列，增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄功能〔11〕。也有研究顯示CEACAM6能通過轉(zhuǎn)錄及中介調(diào)節(jié)因子促進(jìn)腫瘤發(fā)生，尤其是在腫瘤的前期病變中表達(dá)升高，促進(jìn)腫瘤的惡性轉(zhuǎn)變〔12，13〕。CEACAM6蛋白也參與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)變的增殖過程中，能使腫瘤細(xì)胞的周圍環(huán)境產(chǎn)生變化，對(duì)促進(jìn)轉(zhuǎn)移及播散起明顯的促進(jìn)作用〔14〕。

本實(shí)驗(yàn)提示CEACAM6和VEGF在腫瘤中有明確的表達(dá)，是腫瘤形成的重要促進(jìn)蛋白，結(jié)果也顯示骨肉瘤的間質(zhì)中可見較多的微血管，提示老年人中形成的骨肉瘤是富于血管的惡性腫瘤。CEACAM6和 VEGF是促進(jìn)腫瘤生長的重要蛋白，CEACAM6和VEGF對(duì)腫瘤的此種作用類似癌基因的作用。CEACAM6和VEGF可以促進(jìn)腫瘤的失控性增殖進(jìn)程，使腫瘤的生長更快，侵襲能力更強(qiáng)。Duxbury等〔15〕認(rèn)為胰腺癌中CEACAM6高表達(dá)是重要促進(jìn)因子，此時(shí)可以調(diào)節(jié)胰島素樣生長因子的異常活化，使細(xì)胞的增殖過程明顯增強(qiáng)。也有學(xué)者認(rèn)為CEACAM6可能對(duì)有絲分裂原的刺激產(chǎn)生反應(yīng)，使腫瘤的分化能力下降，細(xì)胞更為原始〔16〕。CEACAM6和VEGF均具有直接促進(jìn)間質(zhì)血管生成的作用。VEGF在作用過程中有多種影響蛋白〔17〕，CEACAM6對(duì)VEGF的作用可能是其促進(jìn)腫瘤血管生成的重要機(jī)制之一。

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