李海燕 劉國文 葉和平 河北省豐寧滿族自治縣農(nóng)牧局068350

羔羊大腸桿菌的藥敏試驗(yàn)

李海燕 劉國文 葉和平 河北省豐寧滿族自治縣農(nóng)牧局068350

1　材料

（1）供試菌株的分離鑒定與培養(yǎng)。從豐寧縣樂拓牧業(yè)公司羊場因腹瀉死亡的羔羊中取1只進(jìn)行試驗(yàn)研究，取肝臟做細(xì)菌分離，接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24小時(shí)，挑取表面光滑、邊緣整齊、灰白色、半透明的小菌落，接種于麥康凱瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24小時(shí)，再從麥康凱瓊脂平板上挑取孤立的紅色菌落。將分離的單個(gè)菌落涂片革蘭氏染色、鏡檢，觀察到兩端鈍圓的小桿菌，單個(gè)或成對排列，革蘭氏染色陰性。將分離的菌株進(jìn)行生化試驗(yàn)。結(jié)果見表1。

表1　生化試驗(yàn)結(jié)果

由表1可知，所分離的5個(gè)菌株均為羊的大腸桿菌。將分離鑒定后確定為大腸桿菌的菌落無菌接種在營養(yǎng)肉湯中37℃培養(yǎng)24小時(shí)，用滅菌生理鹽水稀釋10倍，備用。

（2）藥敏紙片。用6mm打孔器打出濾紙小圓片，160℃干熱滅菌1小時(shí)后按常規(guī)方法分別制備青霉素、鏈霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星和氟本尼考等藥敏紙片，備用。

（3）中藥。從本地醫(yī)藥公司采購白頭翁、蒼術(shù)、白術(shù)、黃芪、茯苓、澤瀉、大青葉、苦參、青皮和陳皮。

2　試驗(yàn)方法

（1）制備藥液。將上述中藥加適量水煎煮30分鐘后過濾，水煎2次，將2次過濾的藥液合并濃縮成含生藥1g/mL的藥液備用。

（2）中藥藥敏試驗(yàn)。采用平皿打洞法將供試藥液均勻涂布在瓊脂培養(yǎng)基表面，用直徑6mm打孔器在瓊脂平板上打孔（適當(dāng)封閉孔底），將制備好的中藥供試液分別加入各孔內(nèi)（滿而不溢），貼上標(biāo)記，置37℃溫箱培養(yǎng)24小時(shí)。

（3）抗菌藥敏試驗(yàn)。將供試菌液均勻涂布于瓊脂培養(yǎng)基表面貼上標(biāo)記，以無菌方法貼上各種藥敏實(shí)驗(yàn)紙，置37℃恒溫箱培養(yǎng)24小時(shí)。

（4）抑菌結(jié)果的判定。抑菌圈大于15mm以上為高度敏感，10～15mm為中度敏感，小于10mm為低度敏感，沒有抑菌圈為無效。

3　試驗(yàn)結(jié)果

白頭翁對菌株呈高度敏感，黃芪呈中度敏感，其他中藥均呈低度敏感，苦參、大青葉對個(gè)別菌株無抑菌效果；慶大霉素、環(huán)丙沙星呈高度敏感，恩諾沙星中度敏感，氟苯尼考、磺胺嘧啶呈低度敏感，青霉素基本沒有抑菌作用。常用的抗生素對不同菌株間的抑菌效果具有一定的差異性，這種菌株差異比中藥明顯，說明在解決臨床耐藥菌株方面，中藥具有更好的效果，但是中草藥的敏感程度不如常用的抗生素藥物，需要進(jìn)一步探討和研究兩者間如何合理有效地配合問題。