劉慧 蔣芷陽(yáng) 王芳 覃霞 美迪娜 林有坤

復(fù)方甘草酸苷對(duì)尋常性銀屑病患者外周血Th17細(xì)胞及IL-17A表達(dá)的影響

劉慧 蔣芷陽(yáng) 王芳 覃霞 美迪娜 林有坤

目的 探討復(fù)方甘草酸苷對(duì)尋常性銀屑病患者外周血Th17及IL-17A表達(dá)水平的影響及其與療效的相關(guān)性。方法 30例輕中度尋常性銀屑病進(jìn)展期患者分為治療1組（復(fù)方甘草酸苷+抗組胺藥+外用藥）、治療2組（抗組胺藥+外用藥），每組各15例，以12例健康人為對(duì)照組，用流式細(xì)胞儀及酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)兩組患者治療前、后及健康對(duì)照組外周血Th17細(xì)胞比例、IL-17的表達(dá)水平。結(jié)果 治療前，兩組外周血Th17細(xì)胞、IL-17A表達(dá)水平均高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，均P＜0.05。治療后，治療1組Th17細(xì)胞、IL-17A表達(dá)水平降低，較治療前差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），治療2組Th17細(xì)胞、IL-17A表達(dá)水平較治療前差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），兩組治療后Th17細(xì)胞、IL-17A表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。結(jié)論 外周血Th17、IL17A的表達(dá)可能是復(fù)方甘草酸苷治療尋常性銀屑病的機(jī)制之一。

銀屑??；白細(xì)胞介素17；Th17細(xì)胞；療效比較研究；復(fù)方甘草酸苷

銀屑病是一種慢性炎癥性皮膚病，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。已有研究表明，IL-23/Th17軸在銀屑病的發(fā)病中具有重要作用。復(fù)方甘草酸苷注射液（商品名美能）具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)等作用，臨床上用于銀屑病的治療，但機(jī)制尚不明確。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察美能治療尋常性銀屑病患者外周血Th17細(xì)胞及IL-17A表達(dá)水平的變化，并與其療效進(jìn)行相關(guān)性分析，初步探討復(fù)方甘草酸苷治療尋常性銀屑病的機(jī)制。

一、資料與方法

1.藥物與試劑：復(fù)方甘草酸苷注射液（商品名美能，日本米諾發(fā)源制藥株式會(huì)社生產(chǎn)）；地奈德乳膏（商品名力言卓，重慶華邦制藥有限公司生產(chǎn)）；膚寶乳膏（廣西醫(yī)科大學(xué)藥劑科生產(chǎn)）。人IL-17A檢測(cè)試劑盒（武漢華美公司生產(chǎn)）；抗人CD3APC、抗人CD8 PerCP、抗人IL-17A PE、抗人IgG2a PE、乙酸肉豆蔻佛波醇、流式細(xì)胞儀染色液（美國(guó)eBioscience公司）；FIX&PERM固定破膜劑、離子霉素、多聚甲醛溶液（美國(guó)Sigma公司）。

2.分組：2012年4月至2014年1月，在廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院住院或門(mén)診的30例輕中度尋常性銀屑病進(jìn)展期患者，分為治療1組及治療2組。12例本院體檢中心體檢的健康成人設(shè)為健康對(duì)照組。治療1組（復(fù)方甘草酸苷+抗組胺藥+外用藥）男11例，女4例，年齡（36.93± 11.32）歲，病程（2.23±1.93）年，銀屑病皮損和病情嚴(yán)重度（PASI）評(píng)分為（9.89±1.17）；治療2組（抗組胺藥+外用藥）男11例，女4例，年齡（34.33±10.84）歲，病程（1.79±1.65）年，PASI評(píng)分9.25±1.03；健康對(duì)照組男9例，女3例，年齡（34.08±6.56）歲。治療組與健康對(duì)照組性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩治療組病程、PASI評(píng)分比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.納入標(biāo)準(zhǔn)：符合輕中度尋常性銀屑病進(jìn)展期診斷標(biāo)準(zhǔn)，入組前2個(gè)月內(nèi)未系統(tǒng)使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、維A酸類(lèi)及其他免疫調(diào)節(jié)劑；入組前1個(gè)月內(nèi)未外用糖皮質(zhì)激素、維A酸類(lèi)及其他免疫活性（如他克莫司）等藥物。排除標(biāo)準(zhǔn)：其他類(lèi)型銀屑??；患有自身免疫性疾病、高血壓病、糖尿病及其他器質(zhì)性疾??；孕婦及哺乳期患者；不合作者。

4.治療方法：治療1組：美能注射液40 ml加入生理氯化鈉液250 ml靜脈滴注，每天2次，同時(shí)外用地奈德乳膏及膚寶乳膏，每天2次，口服地氯雷他定或左西替利嗪，每天1次；治療2組：除未靜脈滴注美能外，其余治療同治療1組。于治療前1天及治療時(shí)間達(dá)3周時(shí)進(jìn)行PASI評(píng)分及靜脈采血。

5.流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血Th17細(xì)胞：吸入600 μl EDTA抗凝全血置于流式管，依次加入RPMI 1640，PMA，離子霉素，莫能離子素，37℃、5%CO2溫箱內(nèi)孵育5 h，胞外標(biāo)記CD3、CD8，胞內(nèi)標(biāo)記IL-17，1%多聚甲醛重懸細(xì)胞，4℃過(guò)夜，上機(jī)檢測(cè)并計(jì)算Th17細(xì)胞占CD3+CD8-T淋巴細(xì)胞的百分比。

6.酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)外周血IL-17表達(dá)水平：將干燥管全血3 ml靜止30 min后離心（3 840×g）15 min，取上清后按ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

二、結(jié)果

1.治療組治療前、后PASI評(píng)分及療效比較：治療1組PASI評(píng)分療前后比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.000）；治療2組PASI評(píng)分療前后比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.005），與治療1組療后比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.003）。見(jiàn)表1。治療1組15例中痊愈2例，顯效8例，改善4例，無(wú)效1例，有效率66.67%；治療2組15例中顯效3例，改善5例，無(wú)效7例，有效率20%，兩組療效比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.000）。

表1 兩治療組療前后的PASI評(píng)分（±s）

表1 兩治療組療前后的PASI評(píng)分（±s）

注：a：與治療1組比較，P＜0.05；b：與治療前相比，P＜0.05

組別 例數(shù) 治療前 治療后治療1組 15 9.89±1.17 4.05±2.24b治療2組 15 9.25±1.03a 7.11±2.82ab

2.外周血中Th17細(xì)胞及IL-17A表達(dá)水平：治療1組Th17細(xì)胞療前后比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與健康對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療2組療前后比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與健康對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與治療1組療后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療1組外周血IL-17A表達(dá)水平療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與健康對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療2組療前后比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與健康對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與治療1組療后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。

表2 3個(gè)組治療前后Th17細(xì)胞及IL-17A表達(dá)水平（±s）

表2 3個(gè)組治療前后Th17細(xì)胞及IL-17A表達(dá)水平（±s）

注：a：與治療前相比，P＜0.05；b：與治療前相比，P＞0.05

組別 例數(shù)Th17（%） IL-17A（pg/ml）治療前 治療后 治療前 治療后治療1組 15 3.47±2.09 0.63±0.47a 42.21±18.49 8.63±4.35a治療2組 15 3.34±2.14 2.67±2.05b 45.14±20.46 38.93±25.49b健康對(duì)照組 12 0.38±0.25 - 2.89±0.62 -

3.治療組療前、后Th17細(xì)胞、IL-17A表達(dá)與PASI評(píng)分的相關(guān)性分析：治療前：治療1組Th17細(xì)胞及IL-17 A表達(dá)與PASI評(píng)分呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r值分別為0.65、0.80，P值分別為0.01、0.000）；治療2組Th17細(xì)胞及IL-17 A表達(dá)與PASI評(píng)分呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r值分別為0.68、0.54，P值分別為0.01、0.04）。治療后：治療1組Th17細(xì)胞及IL-17 A表達(dá)與PASI評(píng)分呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r值分別為0.74、0.85，P值分別為0.002、0.000）；治療2組Th17細(xì)胞及IL-17A表達(dá)與PASI評(píng)分呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r值分別為0.62、0.66，P值分別為0.02、0.01）。

三、討論

IL-17細(xì)胞家族包括IL-17A～F，其中IL-17A具有強(qiáng)大的致炎性，同時(shí)還具有強(qiáng)大的動(dòng)員、招募和激活中性粒細(xì)胞能力，從而啟動(dòng)免疫反應(yīng)［1］。研究發(fā)現(xiàn)［2-4］，IL-17和Th17細(xì)胞比例在銀屑病患者血清與皮損中含量增加，提示IL-17、Th17在銀屑病的發(fā)生、發(fā)展中起作用。在我們的研究中，治療1組外周血Th17百分比及血清中IL-17水平均顯著高于健康對(duì)照組，且與PASI評(píng)分呈正相關(guān)，說(shuō)明Th17細(xì)胞及其主要相關(guān)細(xì)胞因子IL17可能參與銀屑病的發(fā)生發(fā)展。本文結(jié)果表明，尋常性銀屑病患者外周血Th17細(xì)胞比例、IL-17表達(dá)明顯降低，且下降幅度與PASI評(píng)分下降指數(shù)呈正相關(guān)，隨著Th17及相關(guān)細(xì)胞因子趨于正常，患者的臨床癥狀改善。推測(cè)抑制Th17細(xì)胞的功能及IL-17的表達(dá)，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫狀態(tài)，可能是復(fù)方甘草酸苷治療尋常性銀屑病的機(jī)制之一。

［1］Shabgah AG,Fattahi E,Shahneh FZ.Interleukin-17 in human inflammatory diseases［J］.Postepy Dermatol Alergol,2014,31（4）: 256-261.

［2］Takahashi H,Tsuji H,Hashimoto Y,et al.Serum cytokines and growth factor levels in Japanese patients with psoriasis［J］.Clin Exp Dermatol,2010,35（6）:645-649.

［3］陳永鋒,常樹(shù)霞,鄭道城.尋常性銀屑病患者外周血和皮損中Th17細(xì)胞及相關(guān)因子的表達(dá)［J］.中華皮膚科雜志,2011,44（1）:11-14.

［4］何榮國(guó),伍紹國(guó),田華,等.尋常性銀屑病患者外周血Th17/Treg失衡的研究［J］.中華皮膚科雜志,2011,44（6）:411-416.

Effects of compound glycyrrhizin on the percentage of Th17 cells and expression of interleukin-17A in peripheral blood of patients with psoriasis vulgaris

Liu Hui,Jiang Zhiyang,Wang Fang,Qin Xia,Mei Dina,Lin Youkun. Department of Dermatology and Venereology,First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Nanning 530021, China
Corresponding author:Lin Youkun,Email:linyoukun7@aliyun.com

ObjectiveTo evaluate the effects of compound glycyrrhizin on the percentage of Th17 cells and expression of interleukin（IL）-17A in peripheral blood of patients with psoriasis vulgaris,and to explore their relationship with therapeutic effects.MethodsA total of 30 patients with mild to moderate progressive psoriasis vulgaris were randomly and equally divided into two groups:group 1 treated with compound glycyrrhizin injection,antihistamines and topical drugs,group 2 treated with antihistamines and topical drugs.Twelve healthy human subjects served as the control group.Blood samples were collected from the patients 1 day before start of treatment and after 3 weeks of treatment,and from the control group.Flow cytometry and enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）were performed to determine the percentage of Th17 cells and expression level of IL-17A respectively in the peripheral blood samples.Results Before the treatment,the percentage of Th17 cells and expression level of IL-17A were both significantly higher in the two patient groups than in the control group（allP＜0.05）.After the treatment,group 1 showed significant decreases in the percentage of Th17 cells and expression level of IL-17A compared with those before the treatment（bothP＜0.05）,while no significant differences were observed in group 2 between pre-and posttreatment IL-17A expression level or Th17 cell percentage（bothP＞0.05）.Furthermore,both Th17 cell percentage and IL-17A expression were significantly different between the two patient groups after the treatment（bothP＜0.05）.Conclusion Compound glycyrrhizin may treat psoriasis vulgaris by regulating Th17 cell percentage and IL-17A expression in peripheral blood.

Psoriasis;Interleukin-17;Th17 cells;Comparative effectiveness research;Glycyrrhizin

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2015.09.014

中華醫(yī)學(xué)會(huì)皮膚性病學(xué)分會(huì)衛(wèi)材（中國(guó)）藥業(yè)有限公司美能皮膚病學(xué)研究基金

530021南寧，廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院皮膚性病科

林有坤，Email：linyoukun7@aliyun.com

2015-01-20）

（本文編輯：吳曉初）