北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠（100079）武琳 楊光 黃菲

氣管炎丸具有散寒鎮(zhèn)咳，祛痰定喘的作用，用于外感風寒引起的氣管炎發(fā)炎、肺熱咳嗽、氣促哮喘、喉中發(fā)癢、痰涎壅盛、胸膈滿悶、老年痰喘等具有較好的療效。本品收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》第四冊[1]，由黃芩、五味子（醋炙）、青黛等三十味藥材組成，而原標準中只收載了顯微鑒別，不利于對藥品質(zhì)量可控性。為了更好地控制氣管炎丸質(zhì)量，本次研究通過建立五味子、青黛的薄層鑒別方法和黃芩的含量測定方法，完善了氣管炎丸的質(zhì)量標準，提高了氣管炎丸的可控性。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 Agilent 1100高效液相色譜儀(DAD二極管陣列檢測器)，天平型號METTLER TOLEDO XP205型電子分析天平(梅特勒-托利多國際股份有限公司)，CAMAG REPROSTAR3數(shù)碼成像系統(tǒng)(瑞士CAMAG)，KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司，功率250 W，頻率40 kHz)。

1.2 試劑 五味子甲素對照品（供含量測定用110764- 200107）、青黛對照藥材（1170-200001）、黃芩苷對照品（供含量測定用110715-200514），對照品及對照藥材均購自中國藥品生物制品檢定所；氣管炎丸（北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠，批號6080771、6080767、6080768）；Merck薄層板TLC Silica gel 60和Merck薄層板TLC Silica gel 60F254（德國Merck默克公司）；配制標準溶液及供試品溶液的試劑均為分析純，液相色譜用試劑為高效液相級試劑，液相用水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 五味子 取供試品5g，研細，加二氯甲烷25ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇 2ml充分振搖，濾過，濾液作為供試品溶液。取不含五味子藥材的陰性樣品5g，同法制成陰性對照溶液。另取五味子甲素對照品，加二氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中華人民共和國藥典》（一部）附錄Ⅵ B]試驗，吸取供試品溶液和陰性對照溶液各10μl，對照品溶液2μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15∶7∶1) 的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，再展開一次，取出，晾干，置紫外燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，且陰性對照無干擾，見附圖1。

附圖1 五味子薄層色譜圖

2.1.2 青黛 取“2.1.1”項下供試品溶液作為供試品溶液。取不含青黛藥材的陰性樣品5g，同法制成陰性對照溶液。另取青黛對照藥材50mg，加二氯甲烷5ml，充分攪拌，濾過，濾液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法[2010年版《中華人民共和國藥典》（一部）附錄Ⅵ B]試驗，吸取供試品溶液和陰性對照溶液各20μl，對照藥材溶液10μl ，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－二氯甲烷－丙酮(4∶3∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的藍色和淺紫色的斑點，且陰性對照無干擾，見附圖2。

附圖2 青黛薄層色譜圖

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Zorbax SBC18(4.6×150mm， 5μm)；流動相為甲醇：0.04%磷酸 (40∶60)；流量0.8mL·min－1；檢測波長280 nm；柱溫30℃。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應不低于2500。

圖3 氣管炎丸中黃芩苷高效液相色譜圖

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品適量，加70%乙醇制成每1ml含25μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品適量，研成細粉，取約0.5g，精密稱定，置50ml量瓶中，加入70%乙醇45ml，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）50min，放冷，再加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 陰性對照溶液的制備 按處方比例取不含黃芩藥材的其余藥材，按其工藝制成空白制劑，按“2.2.3”項下方法制備，即得。

2.2.5 空白干擾試驗 精密吸取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液各5μL，在上述色譜條件下進樣，記錄色譜圖。結(jié)果黃芩苷可與其他成分基線分離，陰性對照溶液在與黃芩苷對照品相同保留時間處未顯色譜峰，故認為空白無干擾。色譜圖見附圖3。

2.2.6 線性關系考察 分別精密吸取黃芩苷對照品溶液（0.13136mg/ml）0.2μl，0.5μl，1μl，2μl，3μl，4μl，5μl注入液相色譜儀，測定峰面積，以對照品的進樣量（μg）為橫坐標，以峰面積為縱坐標，結(jié)果表明黃芩苷在0.026272μg ～0.6568μg范圍內(nèi)進樣量與峰面積呈良好的線性關系，回歸方程為Y=3466.60567x-3.84811，r=0.99999，可用外標一點法計算。

2.2.7 精密度試驗 精密吸取同一供試品溶液，連續(xù)進樣6次，測得黃芩苷含量的平均值為1.5539mg·g-1，RSD=0.71%，表明精密度良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，12，24h進樣測定，測得黃芩苷含量的平均值為1.5195 mg·g-1，RSD值為0.71%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.9 重復性試驗 精密稱取同一批號(6080771)的樣品6份，分別按“2.2.3”項下方法制成供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件測定，黃芩苷含量的平均值為1.5391mg·g-1，RSD為2.01%。表明本方法重復性良好。

2.2.10 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的供試品（批號6080771，含黃芩苷為1.5391 mg/g）6份，每份約0.25 g，分別精密加入黃芩苷對照品溶液（0.3940 mg·mL-1）1 mL，按“2.2.3”項下的方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件測定黃芩苷的含量，平均回收率為97.90%（n=6），RSD為1.43%，結(jié)果見附表1。

2.2.11 黃芩苷對照品純度測定 精密稱取黃芩苷對照品6mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，吸取對照品溶液5μl注入液相色譜儀中，歸一化法測定含量， 黃芩苷含量為99.72%

2.2.12 樣品含量測定 取3批樣品，按“2.2.3”項下的方法制成供試品溶液，每批樣品測定3次，結(jié)果見附表2。

附表1 黃芩苷加樣回收率試驗

附表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 本研究增訂了五味子和青黛的薄層色譜鑒別方法，在薄層鑒別供試品制備時，二者供試品處理方法一致，增加了該法的實用性，降低了檢驗成本，有利于以后的生產(chǎn)檢驗工作。青黛的特征鑒別方法參考了2010年版《中國華人民共和國藥典》(一部)青黛項下收載方法[2]，將展開劑中的三氯甲烷換成了毒性更低的二氯甲烷，降低了展開劑的毒性，所得青黛斑點清晰，同法制備的陰性對照無干擾，經(jīng)樣品、陰性對照試驗，確認該方法可行。分別考察了不同溫度和不同濕度條件對分離效果的影響，結(jié)果表明在不同溫濕度下，五味子和青黛所得主斑點清晰，且陰性無干擾，該法具有良好的耐用性。

3.2 在確定含量測定的供試品溶液制備中，比較了回流提取和超聲提取方式，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲提取效果較好。通過對不同溶劑（甲醇、50%甲醇、70%乙醇、95%乙醇）超聲提取對黃芩苷提取率的影響，結(jié)果表明70%乙醇超聲提取，所得黃芩苷的提取率最高，故選用70%乙醇超聲提取。通過比較了超聲提取不同時間（30 min、40 min、50 min 、60min）對黃芩苷的提取率影響，結(jié)果表明提取50 min時，已基本提取完全，故確定提取時間為50 min。

本研究比較了不同流動相甲醇-0.04%磷酸 （40∶60）和甲醇-0.04%磷酸（47∶53），發(fā)現(xiàn)用甲醇-0.04%磷酸(40∶60)比甲醇-0.04%磷酸（47∶53）作為流動相所得黃芩苷峰的峰型好且陰性無干擾，故采用甲醇-0.04%磷酸（40∶60）作為本品含量測定的流動相。

綜上所述，本研究增加了五味子、青黛的薄層鑒別方法，建立了高效液相色譜測定氣管炎丸黃芩中黃芩苷含量的方法，操作簡單、方便，實用。通過本次研究，提高了氣管炎丸的質(zhì)量標準，增加了氣管炎丸的可控性。