項(xiàng) 顆 孫 莉 邸 琳 李超生 馬 琳 李艷秋

（吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130021）

益氣補(bǔ)腎活血膠囊對(duì)雙側(cè)頸總動(dòng)脈狹窄所致大鼠輕度認(rèn)知障礙的影響

項(xiàng) 顆 孫 莉 邸 琳 李超生 馬 琳 李艷秋

（吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130021）

目的 探討益氣補(bǔ)腎活血膠囊對(duì)雙側(cè)頸總動(dòng)脈狹窄所致大鼠輕度認(rèn)知障礙的影響。方法 首先制作雙側(cè)頸總動(dòng)脈狹窄所致輕度認(rèn)知障礙的大鼠模型，將模型制作成功的大鼠為模型組、陽(yáng)性中藥補(bǔ)腎益腦膠囊組、陽(yáng)性西藥腦復(fù)康組、益氣活血膠囊高、中、低劑量組。連續(xù)給藥6周后做迷宮試驗(yàn)，并檢測(cè)血清MDA、SOD、GSH-Px 、Aβ1-42、BNP、NO、NOS等含量。結(jié)果 給予益氣補(bǔ)腎活血膠囊的大鼠在Y-電迷宮中空間辨別的錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)減少，血清SOD、GSH-Px、NO、NOS升高，MDA、Aβ1-42、BNP水平降低。結(jié)論 益氣補(bǔ)腎活血膠囊對(duì)雙側(cè)頸動(dòng)脈狹窄所致認(rèn)知功能障礙大鼠具有保護(hù)作用。

益氣補(bǔ)腎活血膠囊；輕度認(rèn)知障礙；影響

益氣補(bǔ)腎活血方是我科室的臨床經(jīng)驗(yàn)方，多年來(lái)用于治療輕度認(rèn)知功能障礙療效確切。本文就其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。

1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1試驗(yàn)動(dòng)物。Wistar大鼠，雄性，體質(zhì)量220～250 g，購(gòu)自吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK-（吉）2008-0003。等級(jí)：貳級(jí)。

1.2試驗(yàn)藥品：益氣補(bǔ)腎活血膠囊，2.9 g（生藥）/g粉。來(lái)源：由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院長(zhǎng)白山資源所提供。生產(chǎn)批號(hào)：20130422。補(bǔ)腎益腦膠囊，牡丹江靈泰藥業(yè)股份有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：121102。

1.3試劑和試劑盒：超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合成酶（NOS）測(cè)定試劑盒，購(gòu)自南京建成生物工程研究所20120329、20120329、20120325、20120326、20120326等。腦鈉素（BNP）、β-淀粉樣蛋白1-42（Aβ1-42）北京鼎國(guó)生物技術(shù)有限責(zé)任公司，產(chǎn)品批號(hào)：20120801A。

2　試驗(yàn)方法

2.1篩選：將大鼠分別放入Y-迷宮中，適應(yīng)3 min，給予電擊（電流強(qiáng)度0.7 mA，電壓50 V，電擊延時(shí)5 s），至其對(duì)3臂均探索進(jìn)入為止，選擇對(duì)電擊反應(yīng)較敏感、逃避反應(yīng)迅速者供測(cè)試用。淘汰反應(yīng)過(guò)于遲鈍或特別敏感的大鼠。學(xué)習(xí)訓(xùn)練：將大鼠放入安全區(qū)（Ⅰ區(qū)），通電，大鼠一次性進(jìn)入安全區(qū)（Ⅱ區(qū)）為正確反應(yīng)，否則為錯(cuò)誤反應(yīng)。

2.2制作模型：大鼠術(shù)前12～16 h禁食不禁水，用10%水合氯醛麻醉，仰位固定于手術(shù)臺(tái)上，頸部皮膚剪毛并用活力碘消毒，行頸縱向切口，仔細(xì)分離皮膚和肌肉，顯露雙側(cè)頸總動(dòng)脈，在頸總動(dòng)脈近心側(cè)距頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈分叉處約1.5 cm處，用0號(hào)手術(shù)縫合線分別將左右頸總動(dòng)脈和直徑0.45 mm的注射器針頭一并結(jié)扎，然后小心拔出針頭，縫合傷口，造成腦持續(xù)性低灌注［1-2］。術(shù)后每日每只大鼠肌注青霉素1.6萬(wàn)單位，連續(xù)3 d，抗感染。正常組大鼠不結(jié)扎總動(dòng)脈，其他方法與模型鼠一樣。正常飼養(yǎng)14 d。

2.3分組給藥：將模型制作成功大鼠放到Y(jié)-型點(diǎn)迷宮中進(jìn)行篩選，連續(xù)3 d進(jìn)行空間辨別學(xué)習(xí)試驗(yàn)，每天10次，按3 d錯(cuò)誤次數(shù)平均值分組，分別為模型組、陽(yáng)性中藥補(bǔ)腎益腦膠囊組和陽(yáng)性西藥腦復(fù)康組、益氣活血膠囊高、中、低劑量組。陽(yáng)性西藥組，灌胃腦復(fù)康0.8 g/kg；陽(yáng)性中藥組灌胃0.4 g補(bǔ)腎益腦膠囊內(nèi)容物/kg；益氣補(bǔ)腎活血膠囊高、中、低劑量組按4、2、1 g生藥/kg（1.38、0.69、0.34g粉/kg）灌胃。每日灌胃給藥1次，連續(xù)6周。

2.4觀察指標(biāo)：在給藥后第4周和第6周將大鼠放入電迷宮中，記錄20次內(nèi)錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)。末次給藥后24 h，大鼠水合氯醛麻醉，①腹主動(dòng)脈采血，3000 rpm離心，取血清，測(cè)定自由基和與衰老相關(guān)酶：MDA、SOD、GSH-Px、Aβ1-42、BNP、NO、NOS等。②取腦，做組織學(xué)檢查，觀察海馬神經(jīng)元形態(tài)變化。

3　試驗(yàn)結(jié)果

3.1益氣補(bǔ)腎活血膠囊對(duì)雙側(cè)頸動(dòng)脈狹窄所致認(rèn)知功能障礙大鼠空間辨別能力的影響。給予益氣補(bǔ)腎活血膠囊后，大鼠在Y-電迷宮中空間辨別的錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)減少，由于每個(gè)組的標(biāo)準(zhǔn)差都較大，故各給藥組與模型組比較，均無(wú)明顯差異。見(jiàn)表1。

表1　益氣補(bǔ)腎活血膠囊對(duì)雙側(cè)頸動(dòng)脈狹窄所致認(rèn)知功能障礙大鼠空間辨別能力的影響

3.2益氣補(bǔ)腎活血膠囊對(duì)雙側(cè)頸動(dòng)脈狹窄所致認(rèn)知功能障礙大鼠MDA、SOD、GSH-Px含量或活性的影響。大鼠雙側(cè)頸動(dòng)脈狹窄后，血清中丙二醛含量明顯增加，超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性明顯降低。益氣補(bǔ)腎活血膠囊高、中、低劑量組均能提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性，減少丙二醛含量，與模型組比較有顯著或明顯差異。作用強(qiáng)度優(yōu)于陽(yáng)性藥腦復(fù)康和補(bǔ)腎益腦膠囊組。見(jiàn)表2。

表2　益氣補(bǔ)腎活血膠囊對(duì)雙側(cè)頸動(dòng)脈狹窄所致認(rèn)知功能障礙大鼠MDA、SOD、GSH-Px含量的影響

3.3益氣補(bǔ)腎活血膠囊雙側(cè)頸動(dòng)脈狹窄所致認(rèn)知功能障礙大鼠對(duì)雙側(cè)頸動(dòng)脈狹窄所致認(rèn)知功能障礙大鼠血清中NO、T-NOS含量的影響。雙側(cè)頸動(dòng)脈狹窄所致認(rèn)知功能障礙大鼠血清中NO和T-NOS顯著減少。益氣補(bǔ)腎活血膠囊高、中劑量組能夠明顯增加NO含量，與模型組比較有明顯差異；益氣補(bǔ)腎活血膠囊中、低劑量組能夠明顯增加T-NOS含量，與模型組比較有顯著或明顯差異。見(jiàn)表3。

表3　益氣補(bǔ)腎活血膠囊對(duì)雙側(cè)頸動(dòng)脈狹窄所致認(rèn)知功能障礙大鼠大鼠NO、T-NOS含量的影響

3.4益氣補(bǔ)腎活血膠囊對(duì)雙側(cè)頸動(dòng)脈狹窄所致認(rèn)知功能障礙大鼠Aβ1-42、BNP含量的影響。雙側(cè)頸動(dòng)脈狹窄所致認(rèn)知功能障礙大鼠Aβ1-42、BNP顯著高于正常對(duì)照組。益氣補(bǔ)腎活血膠囊高、中劑量組能夠顯著或明顯減少Aβ1-42、BNP含量，與模型組比較有顯著或明顯差異，益氣補(bǔ)腎活血膠囊低劑量組能夠明顯減少Aβ1-42含量，與模型組比較有明顯差異。見(jiàn)表4。

表4　益氣補(bǔ)腎活血膠囊對(duì)雙側(cè)頸動(dòng)脈狹窄所致認(rèn)知功能障礙大鼠GSH-Px、Aβ1-42、BNP含量的影響

3.5益氣補(bǔ)腎活血膠囊對(duì)雙側(cè)頸動(dòng)脈狹窄所致認(rèn)知功能障礙大鼠腦海馬神經(jīng)元的影響。對(duì)照組大鼠海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)完整清晰，未見(jiàn)異常改變。模型組大鼠海馬神經(jīng)元排列紊亂，細(xì)胞分散，出現(xiàn)細(xì)胞核濃縮、核仁消失、結(jié)構(gòu)不清的神經(jīng)元。經(jīng)陽(yáng)性西藥藥物治療后的大鼠海馬形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)有所改善，細(xì)胞排列較整齊。經(jīng)陽(yáng)性中藥藥物治療后的大鼠海馬形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)有所改善，結(jié)構(gòu)不清細(xì)胞較少。高劑量組大鼠海馬細(xì)胞形態(tài)與陽(yáng)性藥物組相似，細(xì)胞濃縮減少，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清的情況得到改善。中劑量組大鼠海馬細(xì)胞形態(tài)與模型組比較，可見(jiàn)細(xì)胞濃縮現(xiàn)象減少，有效改善細(xì)胞排列狀況。低劑量組大鼠海馬細(xì)胞形態(tài)與模型組比較，可見(jiàn)細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清現(xiàn)象的減少，改善細(xì)胞排列狀況。

4　討 論

腦動(dòng)脈狹窄是血管性認(rèn)知障礙的一個(gè)重要原因，可能機(jī)制：狹窄遠(yuǎn)端腦的低灌注狀態(tài)，低灌注部位神經(jīng)元由于供血供氧不足，細(xì)胞的有氧代謝被抑制，無(wú)氧酵解途徑代償性激活，但由于無(wú)氧酵解途徑的能量產(chǎn)生有限，故神經(jīng)元處于能量低下?tīng)顟B(tài)，進(jìn)而引發(fā)病理狀態(tài)，當(dāng)梗死區(qū)或缺血區(qū)累及與認(rèn)知功能有關(guān)的腦組織時(shí)患者會(huì)出現(xiàn)認(rèn)知功能下降的不同表現(xiàn)［3］。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎后2.5 h腦血流量可減少至25%～50%，結(jié)扎后1周乃至1個(gè)月，腦血流量仍較低［4-5］。雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎所致的慢性腦缺血可導(dǎo)致嚴(yán)重認(rèn)知功能障礙，類(lèi)似老年癡呆［6］。近年來(lái)，雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎模型已逐漸得到公認(rèn)，成為研究血管性癡呆認(rèn)知功能障礙機(jī)制及治療的經(jīng)典模型［7］。

NO在體內(nèi)的作用十分廣泛，概括起來(lái)主要有使血管擴(kuò)張，抑制血小板聚集與黏附，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)毒性雙重作用。NO在腦神經(jīng)損傷早期主要以炎性介質(zhì)存在，起到神經(jīng)毒性作用，腦神經(jīng)損傷晚期主要以舒張血管，保護(hù)腦神經(jīng)細(xì)胞的作用［8］。我們是在大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎后8周，檢查各組指標(biāo)，故大鼠在腦損傷神經(jīng)恢復(fù)期，故NO和NOS減少，經(jīng)益氣補(bǔ)腎活血膠囊治療后NO和NOS明顯增加。

雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎后，腦血管供血嚴(yán)重不足，導(dǎo)致腦缺血，所以BNP和β-淀粉樣蛋白含量明顯增加［9-10］，經(jīng)益氣補(bǔ)腎活血膠囊治療后BNP和β-淀粉樣蛋白含量顯著或明顯減少。益氣補(bǔ)腎活血膠囊對(duì)雙側(cè)頸動(dòng)脈狹窄所致認(rèn)知功能障礙大鼠具有保護(hù)作用。

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R285.5

B

1671-8194（2015）29-0041-02

吉林省科技發(fā)展計(jì)劃資助項(xiàng)目（課題號(hào)：20110942）