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        熱休克蛋白60在香煙煙霧誘導(dǎo)的高血壓合并慢性阻塞性肺疾病大鼠體內(nèi)的表達(dá)及意義

        2015-10-24 09:24:26高銳婷金樹琦內(nèi)蒙古包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院內(nèi)蒙古包頭014010
        關(guān)鍵詞:煙熏休克阻塞性

        高銳婷,金樹琦,陳 寧*(內(nèi)蒙古包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院,內(nèi)蒙古 包頭 014010)

        熱休克蛋白60在香煙煙霧誘導(dǎo)的高血壓合并慢性阻塞性肺疾病大鼠體內(nèi)的表達(dá)及意義

        高銳婷,金樹琦,陳 寧*
        (內(nèi)蒙古包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院,內(nèi)蒙古 包頭 014010)

        目的 通過研究熱休克蛋白60(HSP60)在正常、高血壓合并慢性阻塞性肺疾?。–OPD)大鼠血清中的濃度變化,初步探索其在COPD發(fā)展進(jìn)程中的作用機(jī)制,為臨床治療提供新靶點(diǎn)。方法 選取40只8周齡清潔級健康雄性w istar大鼠隨機(jī)分對照組(正常環(huán)境下正常喂養(yǎng))和實(shí)驗(yàn)組(煙熏法建立高血壓合并慢阻肺大鼠模型),各20只。18周后對兩組大鼠稱重,處死,收集標(biāo)本。肺組織經(jīng)固定-浸蠟-包埋-切片-HE染色后進(jìn)行病理學(xué)觀察;兩組血清中HSP60的濃度采用酶聯(lián)免疫吸附法測定;利用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析HSP60在兩組間的差異及相關(guān)性。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組大鼠血清中HSP60的濃度較對照組增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 (1)單純煙熏法能成功復(fù)制高血壓合并慢性阻塞性肺疾病的模型。(2)實(shí)驗(yàn)組HSP60在慢性阻塞性肺疾病中含量高于對照組,預(yù)測其可能在COPD病程進(jìn)展中起著重要作用。

        熱休克蛋白60;香煙煙霧;慢性阻塞性肺疾病

        慢性阻塞性肺疾?。–OPD)是呼吸系統(tǒng)疾病中的常見病及高發(fā)病,病程長、死亡率高,影響患者的生活質(zhì)量,造成巨大的家庭和社會負(fù)擔(dān)。本實(shí)驗(yàn)通過對比兩組大鼠血清中熱休克蛋白60的濃度差異,研究香煙煙霧引起的高血壓合并COPD中HSP60的表達(dá)及影響。

        1 材料及方法

        1.1 一般材料

        選取40只8周齡清潔級健康雄性w istar大鼠(重約180 g左右),購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物有限公司;熱休克蛋白60試劑盒試劑盒購自美國R&D公司;大青山香煙由內(nèi)蒙古昆明卷煙有限責(zé)任公司出品(焦油量11mg,煙堿量1.0 mg,一氧化碳量14 mg,20支/盒);MultiskanMK3酶標(biāo)儀(美國熱電THERMO);離心機(jī)由美國熱電公司制造;-80℃冰箱由海爾電器公司提供;電溫箱由北京醫(yī)療設(shè)備廠提供;自制煙熏箱(尺寸80 cm×50 cm×80 cm,于左右上角分別留置直徑1 cm的通氣孔)。

        1.2 高血壓合并慢阻肺大鼠模型的建立

        將40只8周齡健康雄性wistar大鼠隨機(jī)分對照組(正常環(huán)境下正常喂養(yǎng))和實(shí)驗(yàn)組(煙熏法建立高血壓合并慢阻肺大鼠模型),各20只。實(shí)驗(yàn)動物養(yǎng)于我院動物實(shí)驗(yàn)室,采光良好,室溫22~25℃,定期消毒。實(shí)驗(yàn)前大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。對照組大鼠在自然環(huán)境下正常喂養(yǎng),大鼠自由攝食飲水;實(shí)驗(yàn)組大鼠在自制煙熏箱內(nèi)被動吸煙(煙熏箱左右上角分別留一直徑1 cm的通氣孔,保持箱內(nèi)通氣),2次/d,香煙15支/次,同時(shí)點(diǎn)燃放入箱內(nèi)燃燒,時(shí)間持續(xù)至煙霧基本消失,約1 h。4 h后再次進(jìn)行被動吸煙。每周6天,連續(xù)熏至16周,行X線片其中15只診斷為慢阻肺。剩余5只繼續(xù)煙熏,至18周后行X線檢測5只均符合高血壓合并慢阻肺的表現(xiàn)。除在密封箱內(nèi)時(shí)間外,兩組大鼠在相同環(huán)境中飼養(yǎng)。

        1.3 HSP60濃度的測定方法

        采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測各組大鼠血清中HSP60的含量,嚴(yán)格按照試劑盒中說明書的實(shí)驗(yàn)步驟操作執(zhí)行。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以“±s”表示,采用t檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié) 果

        2.1 大鼠一般情況

        (1)對照組大鼠:進(jìn)食正常,精神狀態(tài)良好,體毛光亮,反應(yīng)靈活,身體健碩,無死亡。(2)實(shí)驗(yàn)組大鼠:熏煙2周后開始出現(xiàn)咳嗽,第95天死亡1只,原因?yàn)楹粑ソ摺?/p>

        2.2 大鼠體重的比較(見表1)

        2.3 大鼠肺組織病理學(xué)檢查

        2.3.1 一般觀察

        對照組:表面粉紅,彈性良好;實(shí)驗(yàn)組:肺組織過度膨脹,顏色灰白,局部顏色發(fā)黑,彈性降低,表面可見肺大泡,切面呈蜂窩狀。見圖1。

        表1 兩組大鼠體重比較(g)

        圖1 左邊是正常肺,右邊是肺氣腫

        2.3.2 光鏡觀察

        (1)對照組:氣管壁完整光滑,肺組織結(jié)構(gòu)完整,纖毛上皮無脫落,肺泡間隔均勻,肺泡腔大小均勻,氣管壁內(nèi)無粘液分泌,支氣管平滑肌無增生。見圖2。

        (2)實(shí)驗(yàn)組:支氣管粘膜上皮細(xì)胞變性壞死,潰瘍形成,纖毛變短,倒伏、粘連,脫落,杯狀細(xì)胞增生、肥大,基底膜變厚壞死,支氣管壁充血、水腫。氣泡腔不規(guī)則擴(kuò)大,肺泡間隔變薄斷裂,有肺大泡形成。細(xì)支氣管周圍大量淋巴細(xì)胞,中性粒細(xì)胞浸潤,氣道粘液分泌增多。見圖3。

        2.3.3 HE染色病理切片(見圖2、圖3)

        圖2 正常肺組織

        圖3 慢阻肺肺氣腫

        2.3.4 影像學(xué)檢測

        (1)對照組:雙側(cè)胸廓前后徑正常,雙肺野透過度正常,肺紋理清晰,雙側(cè)胸膜無增厚,未見胸腔積液。

        (2)實(shí)驗(yàn)組:雙側(cè)胸廓前后徑大于左右徑,雙肺野透過度增高,肺紋理稀疏,氣管支氣管通暢,未見狹窄或阻塞征,雙側(cè)胸膜無增厚,未見胸腔積液。

        2.4 兩組HSP60濃度比較

        實(shí)驗(yàn)組(慢阻肺組)大鼠血清中HSP60的濃度較對照組(正常組)增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

        表2 正常組與慢阻肺組HSP60濃度比較

        3 討 論

        熱休克蛋白60作為一種分子伴侶,主要由內(nèi)皮細(xì)胞分泌和釋放,在內(nèi)皮細(xì)胞受外界因素如缺血缺氧、應(yīng)激、高血壓、感染等刺激時(shí)HSP60的釋放增加,被樹突狀細(xì)胞、淋巴細(xì)胞所識別,從而觸發(fā)自身免疫反應(yīng)[1-2]。目前有研究表明通過口服HSP60可誘導(dǎo)機(jī)體內(nèi)特異性CD 4+CD 25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分泌增加,從而起到抑制免疫炎癥反應(yīng)的作用[3]。高血壓大鼠生長早期,會持續(xù)增加血管阻力,誘因血壓升高,機(jī)體的腎素-血管緊張素系統(tǒng)激活,此過程持續(xù)進(jìn)展至生命結(jié)束。

        近年來有研究表明,熱休克蛋白60可通過誘導(dǎo)自身免疫炎癥反應(yīng),促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖遷移,參與多種疾病的發(fā)展。HSP60在慢性阻塞性肺疾病中的表達(dá)文獻(xiàn)中報(bào)道較少。本研究進(jìn)一步證實(shí)HSP60在COPD中表達(dá)的臨床意義,研究發(fā)現(xiàn)HSP60在COPD大鼠中表達(dá)明顯高于正常組大鼠,提示HSP60在COPD中過表達(dá)可能是由于COPD病程進(jìn)展中應(yīng)激反應(yīng)和細(xì)胞的免疫應(yīng)答,具體機(jī)制目前尚不明確,有待進(jìn)一步臨床實(shí)踐研究證實(shí)。

        [1] 肖 建,等.慢性阻塞性肺疾病病因及發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國老年學(xué)雜志,2014,34(11):3191-3193.

        [2] 龔素波,等.HSP60與支氣管哮喘相關(guān)性探討[J].中華哮喘雜志(電子版),2013,7(2):126-129.

        [3] 李雙雪.重組人血管內(nèi)皮抑制素對慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肺組織低氧誘導(dǎo)因子-1α和血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的影響[J].《中國藥物與臨床》,2013,(3):317-318.

        本文編輯:吳 衛(wèi)

        R563

        B

        ISSN.2095-6681.2015.026.197.02

        陳寧 女 郵箱 482316344@qq.com

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