孫守國 高廣印 王琛 孟偉 黃曉燕

【摘要】目的：采用高效液相色譜（HPLC）對用大黃素一種對照品檢測大黃藥材中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚五種成分的總量，以減少對照品的使用數(shù)目、節(jié)約資源。方法：采用HPLC技術(shù)進(jìn)行分析，色譜柱：大連依利特Hypersil BDS C18柱（250×4.6mm，5?m）；檢測波長為254nm。流動相： 甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15），柱溫25℃，檢測波長為254nm，結(jié)果：用大黃素對照品測定五種成分的相對保留時間的重復(fù)性良好、儀器精密度RSD為2.5%。結(jié)論：本法簡單、快捷，能夠滿足質(zhì)量檢測的需求。

【關(guān)鍵詞】一測多評；HPLC；大黃

【中圖分類號】R-0 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】1671-8801（2015）04-0298-01

1 儀器與試劑

1.1 儀器 Agilent 1100 高效液相色譜儀（含在線真空脫氣機(jī)，四元泵，手動進(jìn)樣器，柱溫箱，檢測器），Agilent化學(xué)工作站；島津LC-10ADvp高效液相色譜儀，SPD-M10Avp二極管陣列檢測器，島津化學(xué)工作站。

1.2 試劑 甲醇為色譜純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），其它試劑均為分析純。大黃素對照品（批號：110766-200416）、蘆薈大黃素（批號：110795-200504）、大黃酸（批號：0757-200206）、大黃素（批號：110756-200110）、大黃酚（批號：110796-200716）、大黃素甲醚（批號：110758-200610）均購于中國藥品生物制品檢定所，大黃藥材由安徽華佗國藥股份有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為大連依利特公司Hypersil BDS C18（250×4.6mm，5?m）；以甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）為流動相；檢測波長為254nm。理論板數(shù)按大黃素峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2 對照品、供試品溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品、大黃素甲醚對照品適量，加甲醇分別制成每1ml含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各80μg，大黃素甲醚40μg的溶液；分別精密量取上述對照品溶液各2ml，混勻，即得（每1ml中含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各16μg，含大黃素甲醚8μg） [1]。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品粉末（過四號篩）約0.15g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5ml，置燒瓶中，揮去溶劑，加8%鹽酸溶液10ml，超聲處理2分鐘，再加三氯甲烷10ml，加熱回流1小時，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[1]。

測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，以大黃素對照品的峰面積為對照，分別計算蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量，用待測成分色譜峰與大黃素色譜峰的相對保留時間確定。

2.3精密度試驗(yàn) 分別精密吸取大黃素對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10μl，按上述實(shí)驗(yàn)方法項下的色譜條件測定，結(jié)果每次峰面積的RSD為2.5%，表明本方法儀器精密度良好。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn) 按供試品溶液的制備方法處理10批樣品，采用不同高效液相色譜儀，按上述色譜條件分別測定，記錄色譜圖，以大黃素色譜峰，計算5種成分的相對保留時間的平均值為：蘆薈大黃素0.52、大黃酸0.67、大黃素1.0、大黃酚1.38和大黃素甲醚2.01。結(jié)果每種成分相對保留時間都<4%，表明各共有峰的相對保留時間穩(wěn)定，表明本方法重復(fù)性良好。

2.4 樣品含量測定 采用不同高效液相色譜儀測定，按上述處理和計算方法與中國藥典2010年版一部比較，計算5批大黃藥材中五種成分的總量結(jié)果見下表2。

3 討論

3.1采用一種對照品測定兩種及兩種以上成分的測定方法即一測多評（一標(biāo)多測）。一測多評（一標(biāo)多測）技術(shù)首次在中國藥典2010年版一部“黃連”藥材中采用，僅“黃連”藥材含量測定項采用此方法[2]，即用鹽酸小檗堿一種對照品測定鹽酸小檗堿、表小檗堿、黃連堿和巴馬汀四種成分的含量。

表2 5批大黃藥材含量測定結(jié)果比較

Tab.1 5 batches of assay results compared medicinal rhubarb

結(jié)果 批 號 average

0101 0102 0201 0301 0302

藥典方法計算（%） 1.81 1.72 1.83 1.50 1.67 1.71

本文方法計算（%） 2.00 1.95 2.03 1.68 1.89 1.91

本文比藥典方法高出（%） 10.5 13.4 10.9 12.0 13.1 12.0

3.2 計算結(jié)果 以本文的方法與中國藥典2010年版做了比較，結(jié)果使用本文方法比中國藥典計算高出約12%，如果大黃藥材采用本文方法計算，標(biāo)準(zhǔn)限度可提高為1.68%，基本與現(xiàn)在的中國藥典方法的限度1.5%相當(dāng)。

3.3 色譜條件、對照品和供試品溶液的制備 由于完全選用中國藥典2010年版一部大黃藥材（P22）項下含量測定中的色譜條件、對照品和供試品溶液的制備方法，所以沒有再考察線性關(guān)系、樣品溶液的穩(wěn)定性、加樣回收；主要考察了儀器的精密度、采用不同高效液相色譜儀的相對保留時間的重復(fù)性、本方法的含量計算結(jié)果的重復(fù)性。

參考文獻(xiàn)：

1 ChP（中國藥典）.2010.Vol（一部）：22

2 ChP（中國藥典）.2010.Vol（一部）：285