李峰 劉吉山 苗立中 劉樂(lè)光 王玉茂 許繼勇 趙立寧

布魯氏菌病是由布魯氏菌引起的一種人畜共患病，該菌分為6個(gè)種19個(gè)生物型，在世界上呈廣泛性分布，能夠?qū)е氯撕团?、羊等多種家畜發(fā)病。肉羊是馬爾他布魯氏菌、流產(chǎn)布魯氏菌等多種類生物型宿主，主要表現(xiàn)為母羊流產(chǎn)、不孕、子宮炎和公羊睪丸炎、關(guān)節(jié)炎等臨床病變。飼養(yǎng)人員通過(guò)接觸感染后，常表現(xiàn)為全身乏力、長(zhǎng)期發(fā)熱、精神抑郁甚至頭痛、關(guān)節(jié)強(qiáng)直等癥狀。因此，該病不僅造成養(yǎng)殖效益下降，而且潛在威脅人類健康，被世界衛(wèi)生組織列為法定動(dòng)物報(bào)告疫病，我國(guó)衛(wèi)生部將其列為乙類傳染病，我國(guó)農(nóng)業(yè)部多年來(lái)一直高度共識(shí)布魯氏菌病的預(yù)防和凈化工作，凸顯其重要的公共衛(wèi)生意義。

近年來(lái)，隨著國(guó)家《全國(guó)牛羊肉生產(chǎn)發(fā)展規(guī)劃（2013-2020年）》的出臺(tái)，各地也相繼制定了肉牛肉羊發(fā)展規(guī)劃，為肉羊產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供了良好的機(jī)遇。而隨著肉羊產(chǎn)業(yè)規(guī)?；l(fā)展和引種等活羊大范圍的流動(dòng)，該病在各地血清學(xué)檢測(cè)一直有陽(yáng)性病例。由于布魯氏菌為胞內(nèi)寄生菌，一旦侵入機(jī)體，特別是形成多發(fā)性病灶后，很難將其從體內(nèi)根除，耐過(guò)病畜很容易成為隱性傳播源。因此，該病的凈化常采用全面檢測(cè)和淘汰陽(yáng)性家畜的辦法。為此，我們?cè)谀橙庋驁?chǎng)進(jìn)行了檢測(cè)凈化技術(shù)應(yīng)用，收到了良好效果，特此報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 檢測(cè)程序

按照檢測(cè)淘汰的程序進(jìn)行（表1）。初次檢測(cè)進(jìn)行全群采樣檢測(cè)；若存在陽(yáng)性結(jié)果，淘汰陽(yáng)性羊，并進(jìn)行全場(chǎng)消毒；間隔1～2個(gè)月，進(jìn)行2次全群采樣檢測(cè)，根據(jù)結(jié)果淘汰陽(yáng)性羊；依此間隔1～2個(gè)月進(jìn)行一次采樣檢測(cè)處理，直到?jīng)]有任何陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)。之后每隔半年對(duì)種母羊按照10%～20%的比例和全部種公羊進(jìn)行抽檢，應(yīng)沒(méi)有陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)；若出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，應(yīng)淘汰陽(yáng)性羊，并恢復(fù)對(duì)全群采樣檢測(cè)循環(huán)。

1.2 樣品采集與處理

采用人工保定，使用5mL一次性注射器頸靜脈采血，2～3mL/只，分別做好樣品標(biāo)記和采樣記錄。血樣采集后，要將針管進(jìn)行適當(dāng)回抽，以形成斜面，利于血清析出。采集樣品送入實(shí)驗(yàn)室后，將血清分裝入PG管待檢。必要時(shí)，采取離心方式分離血清。

1.3 檢測(cè)試劑與方法

布魯氏菌虎紅平板凝集抗原（批號(hào)201405），陽(yáng)性血清（批號(hào)20140228），布魯氏菌試管凝集試驗(yàn)抗原（批號(hào)20131113），均購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。全部樣品先采用虎紅平板凝集試驗(yàn)進(jìn)行初檢，再對(duì)陽(yáng)性樣品和疑似陽(yáng)性樣品用試管凝集試驗(yàn)進(jìn)行復(fù)驗(yàn)。檢測(cè)方法結(jié)果判定按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GBIT18646-2002動(dòng)物布魯氏菌診斷技術(shù)進(jìn)行。

1.4 淘汰和凈化措施

對(duì)檢測(cè)陽(yáng)性羊要堅(jiān)決進(jìn)行淘汰處理，不能用于生產(chǎn)和育肥。淘汰方法為定點(diǎn)屠宰，肉品進(jìn)行蒸煮后外賣或食用，毛皮、內(nèi)臟等進(jìn)行深埋作無(wú)害化處理。有陽(yáng)性結(jié)果檢出時(shí)，要徹底清理圈舍中積糞，集中進(jìn)行密閉堆肥發(fā)酵，對(duì)場(chǎng)地用5%的生石灰進(jìn)行鋪撒；對(duì)水槽等用具選用綠都百毒殺（稀戊二醛溶液）或綠都金碘（聚維酮碘溶液）進(jìn)行消毒后，用清水沖洗干凈；對(duì)密閉的空間，選用煙水寶（二氯異氰脲酸鈉粉45%）進(jìn)行煙熏消毒。

2 結(jié)果

2.1 首次檢測(cè)結(jié)果

全群共357只，其中種公羊6只，種母羊128只，其他為青年羊或羔羊。首次全群檢測(cè)虎紅平板凝集試驗(yàn)5只陽(yáng)性，2只疑似陽(yáng)性；對(duì)陽(yáng)性結(jié)果和疑似陽(yáng)性結(jié)果樣品用試管凝集試驗(yàn)復(fù)驗(yàn)，5只陽(yáng)性結(jié)果凝集效價(jià)均在1：50以上，全部為陽(yáng)性；2只疑似陽(yáng)性試管凝集試驗(yàn)效價(jià)在1：25以下，初步判斷為陰性。羊群布魯氏菌陽(yáng)性率約為1.4%。

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，按照既定的淘汰和凈化措施對(duì)陽(yáng)性羊和羊舍進(jìn)行淘汰、兀害化處理和全面消毒。并制定了帶羊消毒方案，1～2次/d對(duì)羊舍進(jìn)行消毒。

2.2 二次檢測(cè)結(jié)果

繼首次全群檢測(cè)1個(gè)月時(shí)間，對(duì)淘汰陽(yáng)性羊后的352只羊進(jìn)行了二次檢測(cè)。結(jié)果顯示，虎紅平板凝集試驗(yàn)2只陽(yáng)性，通過(guò)試管凝集試驗(yàn)復(fù)驗(yàn)仍為陽(yáng)性。陽(yáng)性率約為0.56%。

淘汰無(wú)害化處理和凈化措施按照既定的方案實(shí)施。

2.3 三次檢測(cè)結(jié)果

繼二次全群檢測(cè)2個(gè)月時(shí)間，對(duì)全群350只羊進(jìn)行了虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)，結(jié)果均為陰性。

2.4 四次檢測(cè)結(jié)果

繼三次全群檢測(cè)6個(gè)月時(shí)間，對(duì)羊群全部種公羊和部分母羊共計(jì)66只進(jìn)行了采樣檢測(cè)，虎紅平板凝集試驗(yàn)結(jié)果顯示均為陰性。

3 小結(jié)與討論

1）布魯氏菌病的血清學(xué)檢測(cè)方法主要包括凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)、變態(tài)反應(yīng)、ELISA試驗(yàn)等。平板凝集試驗(yàn)由于簡(jiǎn)便易行，對(duì)試驗(yàn)儀器耗材等條件要求較低等優(yōu)勢(shì)利于基層推廣應(yīng)用，并且能夠滿足大面積檢疫篩選的需求。對(duì)陽(yáng)性和疑似陽(yáng)性結(jié)果采用試管凝集試驗(yàn)進(jìn)行復(fù)檢，能夠提高檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性，降低假陽(yáng)性結(jié)果的誤判。

2）通過(guò)檢測(cè)結(jié)果可以看出該場(chǎng)存在羊布魯氏菌的感染問(wèn)題。通過(guò)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，與該場(chǎng)從外面引種有直接關(guān)系。該場(chǎng)引種檢測(cè)時(shí)，為布魯氏菌病陰性羊，購(gòu)進(jìn)后直接混群飼養(yǎng)，沒(méi)有隔離飼養(yǎng)和再次檢測(cè)，致使?jié)摲腥镜难虺蔀樵摬〉膫魅驹础Ｄ乜贵w的產(chǎn)生需要一個(gè)過(guò)程，潛伏期可能檢測(cè)不到抗體，致使無(wú)法準(zhǔn)確判斷是否感染。正確的做法應(yīng)該是，引種前后至少檢測(cè)兩次，即首次檢測(cè)布魯氏菌陰性，在隔離飼養(yǎng)1～2個(gè)月再行采樣檢測(cè)，全部為陰性結(jié)果時(shí)才能混群飼養(yǎng)。

3）本試驗(yàn)通過(guò)連續(xù)4次檢測(cè)，并淘汰無(wú)害化處理病羊，配合全場(chǎng)強(qiáng)制性消毒等措施，陽(yáng)性感染由最初的1.4%降至0，沒(méi)再有新的感染病例出現(xiàn)，收到了較好的效果。有效證明了當(dāng)前對(duì)于布魯氏菌病無(wú)定義流行病區(qū)及以上區(qū)域，檢測(cè)淘汰仍然是控制該病有效的辦法。

4）對(duì)于布魯氏菌感染羊的兀害化處理，本試驗(yàn)采取了定點(diǎn)監(jiān)督屠宰，肉品加工食用，毛皮、內(nèi)臟等無(wú)害化處理的嘗試。一是擔(dān)心場(chǎng)主減少虧損的實(shí)際需求，將病羊外賣，增加疫病傳播和擴(kuò)散的問(wèn)題發(fā)生。二是考慮布魯氏菌對(duì)濕熱的抵抗力不強(qiáng)，60℃30min或70℃5min，甚至煮沸可以瞬間將其殺死，其肉品在熟制后完全可以食用。由于無(wú)害化處理辦法配套措施和要求還有待完善和規(guī)范，如補(bǔ)貼費(fèi)用不足等；建議由政府部門新設(shè)或指定定點(diǎn)屠宰和加工，但同時(shí)要做好安全運(yùn)輸、屠宰過(guò)程控制和廢棄物的無(wú)害化處理等全程控制工作。

5）在凈化過(guò)程中，消毒工作同樣重要。重點(diǎn)包括糞便清理、密閉發(fā)酵處理；場(chǎng)地消毒，如果為床上飼養(yǎng)，還要做好飼養(yǎng)床的全面高壓清洗和消毒工作；羊舍飲用水槽等物品及飼養(yǎng)人員衣物的清洗消毒等，關(guān)鍵是不留死角，以免病原菌殘存，引起疫病復(fù)發(fā)。

6）長(zhǎng)期看來(lái)，布魯氏菌新型疫苗的研發(fā)和應(yīng)用應(yīng)該成為該病防控的有力武器。特別是標(biāo)記疫苗等新型疫苗和相關(guān)檢測(cè)診斷試劑盒的研發(fā)，將有效破解疫苗免疫反應(yīng)和自然感染兀法區(qū)別、疫苗毒性大和容易存在殘毒等問(wèn)題，為該病檢測(cè)凈化及防控提供多樣化的選擇。要切實(shí)加強(qiáng)養(yǎng)殖人員和相關(guān)行業(yè)從業(yè)者的公共衛(wèi)生教育，提高防控布魯氏菌病的風(fēng)險(xiǎn)意識(shí)，降低人員感染的機(jī)率，為構(gòu)建和諧社會(huì)，推動(dòng)肉羊產(chǎn)業(yè)可持續(xù)健康發(fā)展做出積極的貢獻(xiàn)。