林雋丹

（福建省立醫(yī)院藥劑科，福建　福州　350001）

?基礎(chǔ)研究?

健心顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

林雋丹

（福建省立醫(yī)院藥劑科，福建福州350001）

目的 建立健心顆粒顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有效控制健心顆粒的質(zhì)量。方法 用薄層色譜法對(duì)該處方中的丹參藥材進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法測(cè)定丹參酮ⅡA的含量。結(jié)果 薄層色譜鑒別斑點(diǎn)清晰；HPLC法測(cè)定靈敏度高，進(jìn)樣量在13.93～198.38 μg，范圍內(nèi)與峰面積值呈良好的線(xiàn)性關(guān)系（r2=0.9997），陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)論 該法操作簡(jiǎn)便，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，專(zhuān)屬性強(qiáng)，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

健心顆粒；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；高效液相色譜法；阿魏酸

慢性心力衰竭在中醫(yī)診斷學(xué)中稱(chēng)“心悸”、“水腫”、“喘證”等，常見(jiàn)的標(biāo)實(shí)多為血瘀、痰濁、水飲［1］。本次試驗(yàn)的健心顆粒為自制，主要由丹參、桂枝、豬苓、蒲黃、黃芪、紅參、白術(shù)、葶藶子幾種中藥構(gòu)成。為控制該藥品的質(zhì)量，本研究對(duì)該方劑中的君藥丹參進(jìn)行了薄層色譜鑒別，并采用高效液相法測(cè)定丹參中丹參酮ⅡA的含量，同時(shí)進(jìn)行方法學(xué)考察，結(jié)果顯示：此方法準(zhǔn)確度高，可靠性高，可用于健心顆粒的質(zhì)量控制。

1　儀器與試藥

1.1 儀器

KQ3200DE型醫(yī)用數(shù)控超聲儀（昆山市超聲儀有限公司）；RE-51BA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠(chǎng)）。

1.2 試藥

丹參對(duì)照藥材（批號(hào)110766-200628）、丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)130937-200632）均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，健心顆粒（自制），缺丹參陰性樣品。甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2　薄層色譜鑒別

2.1 供試品溶液的制備

取本品約6 g，仔細(xì)研磨，加乙酸9 mL，時(shí)時(shí)振搖，靜置1 h，濾過(guò)，旋干濾液，殘?jiān)哟姿嵋阴? mL使之溶解，作為供試品溶液。

2.2 對(duì)照藥材溶液制備

取丹參對(duì)照藥材0.2 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。

2.3 陰性供試品溶液制備

按處方項(xiàng)取各味藥材（除丹參外），取陰性藥品顆粒10 g按2.1項(xiàng)目下方法制備即可。

2.4 測(cè)定方法

依據(jù)TLC（藥典2010年版一部附錄VI B）進(jìn)行操作，吸取上述溶液各10 μL，分別點(diǎn)于相同硅膠G薄層板上，將石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（8:2）作為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，吹干。在供試品的色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的斑點(diǎn)。陰性樣品色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，不顯斑點(diǎn)。見(jiàn)圖1。

圖　1

3　丹參酮ⅡA含量測(cè)定

3.1 樣品溶液制備

3.1.1健心顆粒的制備

單取紅參粉碎成細(xì)粉，備用。取丹參，加70%乙醇提取2次，1 h/次，過(guò)濾，合并濾液；取黃芪、豬苓、白術(shù)、桂枝、蒲黃、葶房子和丹參藥渣混合，加適量水煎煮2次，1 h/次，過(guò)濾，合并濾液。合并醇提濾液和水提濾液，濃縮，將得到浸膏按處方比例加入紅參細(xì)粉和適量糊精與混合，制粒，即為本品［2］。

3.1.2陰性顆粒的制備

按3.1.1項(xiàng)目下方法制備，不加入丹參藥材，即可。

3.1.3對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取丹參酮ⅡA對(duì)照品適量，加色譜甲醇制成每1 mL含丹參酮ⅡA20.3 μg的溶液，即得。

3.1.4供試品品溶液的制備

取本品顆粒15 g，精密稱(chēng)定置具圓底燒瓶中，精密加入70%甲醇30 mL，密閉，稱(chēng)定重量，回流加熱20 min，放冷。稱(chēng)重，加適當(dāng)?shù)?0%甲醇至與原重相同，搖勻，靜置，取上清液濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得［3］。

3.2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

3.2.1色譜條件

色譜柱為C18柱（上海月旭科技股份有限公司，250 mm×4.5 mm，5 μm）；以甲醇-乙腈-甲酸-水（20:10:1:69）流動(dòng)相；測(cè)試得到的λm為287 nm；柱溫35℃；流速為1 mL/min，進(jìn)樣量為15 μL，理論板數(shù)按丹參酮ⅡA計(jì)算應(yīng)不低于2000。

3.2.2線(xiàn)性關(guān)系的考察

在上述色譜條件下分別進(jìn)樣2、4、6、10、20、30 μL對(duì)照品溶液，記錄色譜圖，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程：Y=2.2759X-0.2442。r2=0.9997，線(xiàn)性范圍13.93～198.38 μg范圍內(nèi)，呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性關(guān)系。見(jiàn)圖2。

圖　2

3.2.3精密度實(shí)驗(yàn)

精密量取對(duì)照品溶液進(jìn)樣6次，10 μl/次，注入液相色譜儀，峰面積的RSD=0.87%。見(jiàn)表1。

表 1

3.2.4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取健心顆粒供試品溶液分別在0、2、4、6、8、12、24、48 h進(jìn)樣7次，15 μl/次，記錄丹參酮ⅡA的峰面積，RSD=1.02%，說(shuō)明樣品在48 h內(nèi)的供試品溶液較為穩(wěn)定。

3.2.5重復(fù)性試驗(yàn)

稱(chēng)取本品顆粒6份按照3.1.1項(xiàng)下操作制備6份樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，平均峰面積為21.30496，RSD=0.88%。

3.2.6供試品含量測(cè)定

分別精密吸取供試品與對(duì)照品溶液各10 μL，進(jìn)樣，測(cè)定，峰面積代入回歸方程求得含量為7.236 μg/g。

4　討 論

4.1 指標(biāo)成分選擇

丹參所含有的有機(jī)酸具有抗心肌缺血作用。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)丹參具有增加心臟供血、改善、保護(hù)心肌細(xì)胞的作用［4-5］。丹參酮ⅡA具有多重藥理活性，能對(duì)抗急性心肌缺氧損傷、抗心律失常、改善血管平滑肌功能，對(duì)缺血/再灌注引起的組織損傷具有保護(hù)作用，丹參酮ⅡA通過(guò)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷、誘導(dǎo)分化和凋亡、抑制侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用，所以選擇丹參酮ⅡA作為指標(biāo)成分進(jìn)行含量測(cè)定。

4.2 實(shí)驗(yàn)方法考察

通過(guò)TLC檢視對(duì)該復(fù)方制劑進(jìn)行定性鑒別，結(jié)果各薄層斑點(diǎn)無(wú)陰性對(duì)照干擾，斑點(diǎn)清晰。因?yàn)榈⒃谠搹?fù)方中為君藥，故以丹參酮ⅡA含量含丹參的健心顆粒制劑質(zhì)量控制指標(biāo)，丹參酮ⅡA進(jìn)樣量在13.93～198.38 μg范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系，r2=0.9997。在287 nm波長(zhǎng)處丹參酮ⅡA有最大吸收，且干擾峰較少。選擇甲醇-乙腈-甲酸-水（20:10:1:69）流動(dòng)相，柱溫35℃，理論塔板數(shù)2000，分離度較好。

［1］ 周 瑜，方 銳，王國(guó)佐，等.活血化瘀方藥對(duì)血瘀證模型的作用機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2015，21（12）:87-91.

［2］ 程 沛，韓東岐，胡偉慧，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定丹參中10種水溶性和4種脂溶性成分的含量［J］.藥物分析雜志，2015，35（6）:991-996.

［3］ 佟志軍，楊 磊，王安波，等.用薄層方法系統(tǒng)鑒別復(fù)方虎眼萬(wàn)年青膠囊中丹參藥材［J］.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2015，2（4）:114-119.

［4］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.一部.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

［5］ 孫毅坤，邸 峰，周富榮.復(fù)方丹參片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究及其質(zhì)量考察［J］.中國(guó)藥事，2000，14（6）:383-385.

本文編輯：吳玲麗

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ISSN.2095-6681.2015.21.193.02