王春艷，鄭旭，高月，宋恒元

（遼寧省畜牧科學(xué)研究院，遼寧遼陽111000）

遼寧省部分地區(qū)種豬氟烷基因檢測統(tǒng)計與分析

王春艷，鄭旭，高月，宋恒元

（遼寧省畜牧科學(xué)研究院，遼寧遼陽111000）

為消滅種豬氟烷敏感基因，減少其對養(yǎng)豬業(yè)的危害，降低劣質(zhì)肉造成的經(jīng)濟損失，本文對2011～2013年遼寧部分地區(qū)種豬氟烷敏感基因進行檢測。本試驗采用PCR-RFLP法，共檢測樣品14 392個，檢測出的陽性種豬1 518全部淘汰。經(jīng)統(tǒng)計，長白、大白、杜洛克氟烷基因陽性率分別為9.11%、10.15%、10.78%，其中種公豬氟烷基因陽性率分別為13.62%、11.19%、12.61%，種公豬的陽性率都比大群豬的氟烷基因陽性率高。

氟烷基因；遼寧地區(qū)；統(tǒng)計與分析

隨著人們生活水平的不斷提高,豬肉品質(zhì)受到了市民廣泛的關(guān)注，養(yǎng)豬生產(chǎn)者不僅需要增加豬肉的產(chǎn)量，還必須不斷提高豬肉的品質(zhì),才能獲得較好的經(jīng)濟效益，氟烷敏感基因是目前世界公認的影響豬肉品質(zhì)的主效基因之一。

氟烷基因有三種基因型：即顯性純合子（HalN HalN）、雜合子（HalN Haln）和隱性純合子（Haln Haln），顯性純合子和雜合子表現(xiàn)為氟烷陰性，隱性純合子（nn基因型）表現(xiàn)為氟烷陽性。隱性純合子是導(dǎo)致豬應(yīng)激綜合征發(fā)生的主要原因，豬應(yīng)激綜合征也稱為惡性高熱綜合征，它是指在非特異性的應(yīng)激因子（如運輸、轉(zhuǎn)欄、高溫、預(yù)防注射、配種等）作用下，豬發(fā)生呼吸急促、心跳亢進、體溫升高、肌肉僵直、后肢呈現(xiàn)痙攣性收縮，并伴隨突然死亡的一種征候群。這種豬死后往往出現(xiàn)PSE肉，PSE（pale,soft,exudative）肉是指肉色蒼白、質(zhì)地柔軟、表面滲水的豬肉，這種基因的出現(xiàn)給養(yǎng)豬生產(chǎn)、銷售和加工造成了巨大的經(jīng)濟損失[1]。氟烷基因雜合子豬在生產(chǎn)性能和體形外貌上具有雜合優(yōu)勢，在種豬選育時，由于氟烷敏感基因陽性豬體型好、瘦肉率高，很容易被留作種用[2]。隨著我國高瘦肉率豬種的引進和使用，并且豬的品種選育把胴體瘦肉率作為一項主要經(jīng)濟指標進行選擇時，這必然會導(dǎo)致Haln基因頻率的上升。

因此，在種豬品種選育中如何消除氟烷有害基因是一個必須考慮的問題?，F(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，可以使得從分子水平直接測定豬的氟烷基因型成為可能[3]。為消滅種豬氟烷敏感基因，減少其對養(yǎng)豬業(yè)的危害，降低劣質(zhì)肉造成的經(jīng)濟損失，本試驗采用PCR-RFLP法檢測氟烷敏感基因，檢測出的雜合子（HalN Haln）和純合子（Haln Haln）種豬全部淘汰。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗樣本遼寧省畜牧科學(xué)研究院氟烷基因檢測實驗室接收的各種豬場送檢的豬耳組織樣本。

1.1.2 試驗試劑北京百泰克生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的細胞/組織基因組DNA提取試劑盒（離心柱型）、蛋白酶K、2×Power Taq PCR MasterMix，TaKaRa生產(chǎn)的上下游引物、瓊脂糖；其他為國產(chǎn)分析純試劑。

1.1.3 試驗設(shè)備美國EPPENDOF生產(chǎn)的5430R冷凍離心機，美國ABI生產(chǎn)的2720PCR儀，上海培清生產(chǎn)的JS-680D凝膠成像儀，北京六一生產(chǎn)的DYY-6C電泳儀。

1.2 試驗方法PCR-RFLP技術(shù)檢測法，DNA提取采用試劑盒提取法。

2 氟烷敏感基因的檢測結(jié)果統(tǒng)計與分析

2.1 所有樣品檢測結(jié)果統(tǒng)計2011～2013年共收到7個市/縣107個種豬場或種公豬站送檢的14 392個樣品，經(jīng)檢測，氟烷基因雜合豬1 456頭，占10.12%，氟烷基因陽性純合豬58頭，占0.40%，氟烷基因陽性豬占送檢豬總數(shù)的10.52%。

2.2 重點種豬場氟烷基因陽性率的統(tǒng)計結(jié)果見表1。

表1 50頭以上種豬場氟烷基因陽性率分布Table1 More than 50 head of a pig halothane gene distribution of positive rate

由表1可知，三年中檢測50頭以上重點種豬場共79家，各家種豬場氟烷基因陽性率相差很大。有的種豬場氟烷基因陽性率非常高，其中氟烷基因陽性豬占送檢豬百分率達20%以上的豬場有13家。有的種豬場氟烷基因豬陽性率很低，低于5%的有40家，其中無氟烷基因陽性豬場有27家。

2.3 不同品種氟烷基因陽性率統(tǒng)計結(jié)果見表2。

由表2可知，遼寧省種豬品種主要有長白、大白和杜洛克，經(jīng)進一步統(tǒng)計，送檢樣品為純種豬且品種明確的樣品9 982個，其中氟烷基因陽性豬978頭，陽性率9.80%。種公豬845頭，氟烷基因陽性豬105頭，陽性率12.43%。長白、大白、杜洛克氟烷基因陽性率分別為9.11%、10.15%、10.78%，種公豬氟烷基因陽性率分別為13.62%、11.19%、12.61%。

3 討論及建議

3.1 氟烷基因陽性種公豬是種豬陽性率高的主要原因經(jīng)統(tǒng)計分析，氟烷基因陽性率高的豬場多數(shù)有氟烷基因陽性種公豬存在，其陽性率高的原因主要在于自繁。

3.2 品種間陽性率相差不大，但種公豬陽性率高長白、大白和杜洛克豬的氟烷基因豬陽性率相差不大，但都比較高，而種公豬的陽性率都比大群豬（包括種公豬）的陽性率還高。因此，剔除氟烷基因陽性種公豬是重中之重的工作。

3.3 提高種豬生產(chǎn)者對清除氟烷基因的積極性①提高種豬生產(chǎn)者對氟烷敏感基因危害認識；②樹立遼寧種豬和商品豬質(zhì)量品牌，切實調(diào)動企業(yè)選育應(yīng)激抵抗豬的積極性；③推動全國開展此項工作，為實現(xiàn)消滅目標創(chuàng)造條件。

3.4 種豬氟烷基因型檢測工作應(yīng)常抓不懈雖然遼寧省近幾年已對省內(nèi)所有純種豬進行了檢測，并對檢出的氟烷基因陽性（Nn、nn）種豬做到全部淘汰[4]。全省生豬種源環(huán)節(jié)氟烷敏感基因得到有效控制，商品豬應(yīng)激死亡率大幅度下降。但由于我國其他省份還沒有做氟烷敏感基因的清除工作，國外引入的種豬也沒有完全清除氟烷敏感基因，因此，提高對外來引入種豬檢測的時效性，以降低陽性種豬在遼寧省繁育機率，遼寧地區(qū)種豬氟烷基因檢測應(yīng)是一項長期性的技術(shù)工作。

[1]Eikelenboom G,MinkemaD.Predietion of Pale, soft and exudative musele with a non-lethal test for halothane indueed Porcine malignant hyPerthmiasyndrome[J].Neth.J.Vet.Sei., 1974,99∶421-426.

[2]FujiiJ,OtsuK,ZorzatoFetal.IdentifieationofamutationinPorcineryanodine recePtor assoeiated with malignant hyterthermia[J].SCIENCE,1991,253∶448-451.

[3]何志平，呂學(xué)斌，陳曉輝，等.利用PCR-RFLP技術(shù)測定種豬的氟烷基因型[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報，2002，30（2）：48-50.

[4]李銘興，鄭麗杰，姜畔.遼寧省種豬氟烷敏感基因清除工作實施進展及對策研究[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2013，2：15-17.

Detection of Swine Halothane Gene in Some Areas of Liaoning Province Statistics and Analysis

Wang Chunyan,Zheng Xu,Gao Yue,Song Hengyuan

（Animal Husbandry Institute of Liaoning Province,LiaoningLiaoyang111000）

In this paper,from 2011 to 2013 in parts of Liaoning pig halothane sensitive genes were detected，to eliminate the swine sensitive halothane gene,reduce the harm to pig industry, reduce economic losses caused by the bad meat.The experiment detected 14 392 samples,using the method of PCR-RFLP,and eliminate all 1518 positive swine.After the statistics,landrace,Large white and duroc positive rate of halothane gene were 9.11%,10.15%,10.78%respectively.The boars were 13.62%,11.19%,12.61%,which was higher than that of herd of swine.

Halothane gene;Liaoning area;Statistics and analysis

S828

B

1672-9692(2015)03-0035-03

2015-02-02

王春艷（1973-），女，大學(xué)本科，碩士學(xué)位，高級獸醫(yī)師，主要從事氟烷基因檢測、肉質(zhì)測定、種豬精液質(zhì)量檢測、種豬生產(chǎn)性能測定等工作。