郭日東　吳曉亮　宋麗華　韓吉雨　魏小軍　李平安　關(guān)平原　蘭儒冰

1.內(nèi)蒙古伊利實(shí)業(yè)集團(tuán)股份有限公司奶牛科學(xué)研究院，呼和浩特010080；2.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，呼和浩特010018

奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定

郭日東1吳曉亮1宋麗華1韓吉雨1魏小軍1李平安2關(guān)平原2蘭儒冰1

1.內(nèi)蒙古伊利實(shí)業(yè)集團(tuán)股份有限公司奶?？茖W(xué)研究院，呼和浩特010080；2.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，呼和浩特010018

在1年的時(shí)間里，對北方的1個(gè)規(guī)?；翀鋈榉垦撞∨＿B續(xù)采集45個(gè)樣品，進(jìn)行分離鑒定，分離到葡萄球菌、大腸桿菌、克雷伯菌和無乳鏈球菌4種乳房炎病原菌，在發(fā)病時(shí)間分布上有明顯的特點(diǎn)，6-10月期間，大腸桿菌為乳房炎的主要病原菌，12月至次年4月期間，無乳鏈球菌為乳房炎的主要病原菌。

奶牛乳房炎；病原菌；分離鑒定；發(fā)病特點(diǎn)

奶牛乳房炎是奶牛乳腺受到物理、化學(xué)或微生物等因素刺激所引發(fā)的一種炎癥反應(yīng)，其中病原微生物是引起奶牛乳房炎的主要原因。乳房炎可以使患牛奶產(chǎn)量和質(zhì)量降低，嚴(yán)重的患牛被淘汰或者直接導(dǎo)致其死亡，給奶牛業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。該病是世界范圍內(nèi)多發(fā)的奶牛疾病，其發(fā)生范圍廣，發(fā)病率高。全球約有奶牛2.2億頭，其中約有1/3患有不同類型的乳房炎。據(jù)報(bào)道，我國隱性奶牛乳房炎平均發(fā)病率為74.5%，臨床奶牛乳房炎的平均發(fā)病率為33.41%[1]。

1　材料與方法

1.1病原菌的采樣

選取臨床型乳房炎的奶牛采集乳樣，先用溫水清洗采樣乳頭，再用0.1%新潔爾滅溶液和75%乙醇分別進(jìn)行消毒，在每次清洗或消毒乳頭后均用消毒紙巾擦干；棄去采樣乳區(qū)的頭3把奶，然后采集乳樣約10mL于滅菌瓶中，加蓋封緊，并作好標(biāo)記，置于附有冰袋的保溫箱內(nèi)帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離培養(yǎng)及相關(guān)檢測。

1.2病原菌分離方法

1）將無菌采集的乳樣充分搖勻，分別劃線接種于普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、鮮血瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，作好標(biāo)記，置37℃溫箱中培養(yǎng)24h后觀察菌落特征，挑取典型菌落進(jìn)行涂片，革蘭氏染色，于顯微鏡下觀察，根據(jù)菌體形態(tài)、溶血情況及染色特性初步判定細(xì)菌類別，并將其進(jìn)一步純化培養(yǎng)[2]。

2）球菌的鑒定。鏡檢形態(tài)符合葡萄球菌特性，在普通營養(yǎng)瓊脂和血液瓊脂平板形成圓形、金黃色、灰白色或檸檬色菌落，且接觸酶試驗(yàn)、凝固酶試驗(yàn)和甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)陽性的細(xì)菌，即鑒定為金黃色葡萄球菌。鏡檢形態(tài)符合鏈球菌特性，且接觸酶試驗(yàn)陰性細(xì)菌，即鑒定為鏈球菌屬細(xì)菌。若細(xì)菌CAMP試驗(yàn)陽性，不水解七葉苷和馬尿酸鈉，即鑒定為無乳鏈球菌[3]。

3）桿菌的鑒定。革蘭氏陰性桿菌氧化酶試驗(yàn)陰性，在麥康凱瓊脂平板形成紅色菌落，在伊紅美藍(lán)瓊脂平板形成紫黑色帶金屬光澤菌落，在三糖鐵瓊脂平板培養(yǎng)產(chǎn)酸或產(chǎn)氣，不分解尿素，V-P試驗(yàn)陰性的細(xì)菌即鑒定為大腸桿菌[3]。

2　結(jié)果與分析

1）分離到葡萄球菌5株，占11.11%，大腸桿菌13株，占28.89%，克雷伯菌3株，占6.67%，無乳鏈球菌24株，占53.33%，與鄧海平等[3]、王鳳等[4]、李娟娟等[5]、范成英等[6]報(bào)告的乳房炎病原菌種類基本一致。

2）分離鑒定的4種病原菌引起乳房炎發(fā)病，在時(shí)間分布上有明顯特點(diǎn)，在6-10月期間，大腸桿菌為乳房炎的主要病原菌，12月至次年4月期間，無乳鏈球菌為乳房炎的主要病原菌。分離病原菌明細(xì)如表1。

表1　樣品分離鑒定結(jié)果

3　討論

1）大腸桿菌、克雷伯菌是環(huán)境性乳房炎的主要致病因素。北方6-10月期間溫暖濕潤，牧場奶牛生活環(huán)境中存活大量的大腸桿菌和克雷伯菌，是奶牛乳房炎的主要致病菌，也是主要預(yù)防和治療的病原菌種類。

2）葡萄球菌、無乳鏈球菌是傳染性乳房炎的主要致病因素。北方12月至次年4月期間干燥寒冷，牧場奶牛生活環(huán)境中大腸桿菌和克雷伯菌大量減少，致病機(jī)會減少，乳房寄生菌是主要致病菌，也是主要預(yù)防和治療的病原菌種類。

3）藥敏試驗(yàn)報(bào)告指出[4-7]，這4種細(xì)菌對氧氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、頭孢類和磺胺甲惡唑/甲氧芐啶敏感，是有效治療乳房炎的首選藥物。

4）在夏秋季節(jié)，加強(qiáng)牛體衛(wèi)生的綜合管理，加強(qiáng)奶牛生活環(huán)境的綜合治理和有效消毒，是預(yù)防環(huán)境性乳房炎的有效方法。在冬春季節(jié)，加強(qiáng)傳染性乳房炎病牛的隔離治療，加強(qiáng)奶襯的清洗消毒，認(rèn)真執(zhí)行擠奶操作程序和乳頭藥浴，是預(yù)防傳染性乳房炎的最佳方法。

5）本次試驗(yàn)沒有分離到金黃色葡萄球菌，金黃色葡萄球菌導(dǎo)致的乳房炎，傳染性很強(qiáng)，易產(chǎn)生耐藥性，易復(fù)發(fā)，一定要徹底隔離治療。若條件有限，建議淘汰、放棄治療，堅(jiān)持這項(xiàng)措施，可以預(yù)防金黃色葡萄球菌型乳房炎。

6）在預(yù)防奶牛乳房炎的措施中，保護(hù)好乳頭孔很重要，若乳頭孔損壞，不能完全閉合，病原菌很容易侵入乳房導(dǎo)致乳房炎發(fā)生；定期進(jìn)行乳頭評分，定期更換奶襯，及時(shí)修復(fù)擠奶機(jī)的負(fù)壓和脈動(dòng)頻率，不要過度擠奶，可以有效保護(hù)乳頭孔。

7）應(yīng)用優(yōu)質(zhì)奶牛干奶藥可以有效預(yù)防乳房炎的發(fā)生。

8）加強(qiáng)奶牛飼養(yǎng)管理，完善乳房炎管理措施，培育抗病力強(qiáng)的奶牛品種，均衡奶牛營養(yǎng)，提高奶牛疾病抵抗力，可以有效減少乳房炎的發(fā)生。

[1]郭銳，苑宇.湖北兩個(gè)奶牛場奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及藥物敏感性分析[A].第五屆全國牛病防制及產(chǎn)業(yè)發(fā)展大會論文集[C].2013，150-152.

[2]東秀珠，蔡妙英.常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊[M].北京：北京科學(xué)出版社，2001：132-134.

[3]魏小娟，蒲萬霞，周緒正，等.蘭州地區(qū)奶牛乳房炎病原茵的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2007，28（8）：113-114.

[4]鄧海平，俞詩源.內(nèi)蒙古地區(qū)奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（2）：595-596，598.

[5]王鳳，宋立，湯德元，等.奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定、血清型及耐藥性研究[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，34（6）：62-67.

[6]李娟娟，魏恒，王韋華.奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].中國草食動(dòng)物科學(xué)，2013，33（3）：53-54.

[7]范成英，潘鑫龍.奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2013，19（18）：119-120.

[8]李娟娟，魏恒，王韋華.奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].中國草食動(dòng)物科學(xué)，2013，33（3）：53-54.

2015-05-28

科技部十二五項(xiàng)目“現(xiàn)代奶業(yè)發(fā)展科技工程”牧區(qū)及農(nóng)牧交錯(cuò)帶奶牛健康養(yǎng)殖技術(shù)集成及產(chǎn)業(yè)化示范（2012BAD12B09）郭日東，男，1963年生，高級獸醫(yī)師。