劉兆雄

(四川省德陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，四川 德陽(yáng) 618000)

中藥材的加工和儲(chǔ)存有使用硫磺熏蒸的習(xí)慣[1]。由于二氧化硫及其衍生物對(duì)人體的一些系統(tǒng)、器官、組織都會(huì)產(chǎn)生不同程度的傷害[2－4]，所以2010年《中國(guó)藥典(一部)第二增補(bǔ)本》收載了中藥材中二氧化硫殘留量的測(cè)定方法，采用蒸餾后用碘標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定確定二氧化硫的殘留量[5]。但該方法可能受藥材中揮發(fā)性還原物質(zhì)的影響，故有一定的缺陷。有人采用樣品加酸蒸餾提取，用3%過(guò)氧化氫溶液吸收并將二氧化硫氧化為硫酸根后，進(jìn)行離子色譜分析的方法測(cè)定中藥材中二氧化硫[6－7]。筆者采用在通氮?dú)獗Ｗo(hù)二氧化硫不被氧化為硫酸的條件下加磷酸蒸餾提取，以25 mmol/L氫氧化鉀溶液－10 mmol/L四氫硼鈉溶液(9∶1)混合溶液為吸收液，再通過(guò)離子色譜法測(cè)定溶液中亞硫酸根的含量，結(jié)果滿意，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

ICS－90A型離子色譜儀，ASRS－4MM型淋洗液發(fā)生器，ASRS300(4 mm)，陰離子抑制器，DS5型電導(dǎo)檢測(cè)器(美國(guó)DIONEX公司);Chromeleon色譜工作站;XS205型電子天平(德國(guó)Mettler Toledo公司)。亞硫酸鈉(成都市科龍化工試劑廠，優(yōu)級(jí)純，批號(hào)為20080716);氯化鈉、磷酸鉀、硫酸鉀、硝酸鈉、亞硝酸鈉、無(wú)水碳酸鈉、氫氧化鉀、四氫硼鈉均為優(yōu)級(jí)純;廣藿香(四川龍馬醫(yī)藥有限公司，批號(hào)為 20140208，20140404，20140509)，均經(jīng)我所羅國(guó)龍(主任中藥師)鑒定為唇形科植物廣藿香 Pogostemon cablin(Blanco.)Benth.的干燥地上部分(通過(guò)直接干燥制得)，經(jīng)用二氧化硫熏蒸后，批號(hào)記為 20140208－1，20140404－1，20140509－1，置塑料袋內(nèi)密封保存1個(gè)月。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:IonPac?AS11－HC色譜柱(250 mm×4 mm，載體為大孔乙基乙烯苯和2－乙烯苯的聚合物，孔徑2 000埃，功能基團(tuán)為烷醇季胺，膠聯(lián)度 55，柱容量高為 290 μmol/柱)，IonPacAG11 －HC型保護(hù)柱(50 mm×4 mm);柱溫:28℃，梯度洗脫:0～15 min(氫氧化鉀溶液15 mmoL/L)，15～40 min(氫氧化鉀溶液為40 mmoL/L);流速:1.00 mL/min;進(jìn)樣體積:100 μL;電導(dǎo)檢測(cè)法檢測(cè)(溫度28 ℃，電導(dǎo)池有效容積 1 μL，信號(hào)范圍 0 ～500 μs)。

2.2 溶液制備

精密稱取無(wú)水亞硫酸鈉70.92mg(相當(dāng)于亞硫酸根45.03mg)，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)亞硫酸根貯備液。取廣藿香(批號(hào)為20140208－1)10.976 8 g，精密稱定，置2010年版《中國(guó)藥典(第一增補(bǔ)本)》附錄ⅣU二氧化硫殘留量測(cè)定裝置的兩頸圓底燒瓶中，加水400 mL(應(yīng)加水至過(guò)氮?dú)鈱?dǎo)氣管的下端)，取6 mol/L磷酸溶液10 mL加入帶刻度分液漏斗中;取氫氧化鉀溶液(25 mmol/L)－四氫硼鈉溶液(10 mmol/L)(9∶1)80 mL，置100 mL容量瓶中;打開(kāi)冷凝管，將冷凝管的上端口處連接一橡膠導(dǎo)氣管置容量瓶?jī)?nèi)液面以下;連接氮?dú)饬魅肟冢_(kāi)通氮?dú)?，調(diào)節(jié)氣體流量(氮?dú)饬魉偌s為0.2 L/min，至蒸餾瓶?jī)?nèi)有氣泡均勻排出);打開(kāi)帶刻度分液漏斗的活塞，使磷酸溶液10 mL流入燒瓶中;將兩頸燒瓶?jī)?nèi)的溶液加熱至沸，并保持沸騰1 h，用氫氧化鉀溶液(25 mmol/L)－四氫硼鈉溶液(10 mmol/L)(9∶1)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，用0.2 μm微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液。另取廣藿香(批號(hào)為20140208)10.005 7 g，依法制備空白溶液。

2.3 方法學(xué)考察

分離度試驗(yàn):精密稱取氯化鈉71.32 mg、磷酸鉀110.16 mg、硫酸鉀 118.51 mg、無(wú)水碳酸鈉 213.91 mg、亞硝酸鈉 70.99 mg、硝酸鈉115.10 mg，置100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻;精密量取上述溶液和標(biāo)準(zhǔn)亞硫酸根貯備液各1 mL，置100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為氯離子、磷酸根、硫酸根、亞硫酸根、硝酸根、亞硝酸根、碳酸根陰離子對(duì)照溶液。取陰離子對(duì)照溶液、上述空白溶液及供試品溶液按2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，結(jié)果見(jiàn)圖1。供試品溶液色譜圖中，在陰離子對(duì)照溶液色譜圖亞硫酸根色譜峰相同保留時(shí)間位置有相應(yīng)的色譜峰，而空白溶液色譜中則無(wú)此色譜峰，亞硫酸根色譜峰與其他相鄰色譜峰有較好的分離度，分離度大于1.5，理論板數(shù)按亞硫酸根色譜峰計(jì)算大于3 000;氯離子、磷酸根、硫酸根、亞硫酸根、硝酸根、亞硝酸根、碳酸根陰離子對(duì)照溶液色譜圖中亞硫酸根和相鄰離子色譜峰有較好的分離度，分離度均大于1.5。

圖1 離子色譜圖

精密度試驗(yàn):取標(biāo)準(zhǔn)亞硫酸根貯備液1 mL，置100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，取上述溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣6次。結(jié)果亞硫酸根峰面積變化不大，平均峰面積為0.824 0，RSD 為 0.3%(n=6)。

重復(fù)性試驗(yàn):取廣藿香(批號(hào)為20140208－1)約10 g，精密稱定，共6份，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣。結(jié)果亞硫酸根平均含量為每1 g廣藿香含二氧化硫 0.003 77 mg(相當(dāng)于亞硫酸根 0.004 72 mg)，RSD 為 1.2%(n=6)。

線性關(guān)系考察:精密量取標(biāo)準(zhǔn)亞硫酸根貯備液0.05，0.10，0.50，1.00，1.50，2.00 mL，分別置 100 mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，按2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，以亞硫酸根峰面積 A與亞硫酸根進(jìn)樣量 C(μg)作回歸曲線，得回歸方程 A=1.820 8 C －0.000 13，r=0.999 8(n=6)。結(jié)果表明，亞硫酸根進(jìn)樣量在0.020 26～0.810 6 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

最低檢出限和最低定量限確定:在陰離子對(duì)照溶液色譜圖中，亞硫酸根色譜峰信噪比(S/N)為1 537.5，溶液質(zhì)量濃度為4.503 μg/mL。按3倍信噪比計(jì)算，最低檢出限每1 mL被測(cè)定溶液中含亞硫酸根0.008 8 μg。按10倍信噪比計(jì)算，最低定量限為每1 mL被測(cè)定溶液中含亞硫酸根0.029 μg。

加樣回收試驗(yàn):取廣藿香(批號(hào)為20140208－1，每1 g含二氧化硫 0.003 77 mg，即相當(dāng)于1 g含亞硫酸根 0.004 72 mg)9份，每份約5 g，精密稱定，置兩頸圓底燒瓶中，分為3組，各3份，每組依次精密加入標(biāo)準(zhǔn)亞硫酸根貯備液30，55，75 μL，照擬訂方法制備待測(cè)溶液，按擬定色譜條件依次進(jìn)樣，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 亞硫酸根加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

穩(wěn)定性試驗(yàn):將取同一供試品溶液，放置 0，2，4，8，12 h 后，按2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣。結(jié)果亞硫酸根色譜峰面積變化不大，RSD 為 0.9%(n=5)。

2.4 樣品含量測(cè)定

分別稱取3批自制硫熏后廣藿香藥材(批號(hào)為20140208－1，20140404－1，20140509－1)約 10 g，精密稱定，照 2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，按回歸方程計(jì)算每1 g廣藿香中亞硫酸根含量，將亞硫酸根含量乘以0.8，即為每1 g廣藿香中二氧化硫含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

在試驗(yàn)中，為了避免蒸餾時(shí)二氧化硫氧化為硫酸，采用了通氮?dú)獾姆椒?。吸收液為加四氫硼鈉作保護(hù)劑的情況下，將溶液放置5 h后，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，供試品溶液色譜峰色譜圖中有與陰離子對(duì)照溶液色譜圖硫酸根離子色譜峰相對(duì)應(yīng)的色譜峰，說(shuō)明有亞硫酸根被氧化成了硫酸根。使用電導(dǎo)檢測(cè)器時(shí)，淋洗液有很高的檢測(cè)信號(hào)，抑制器可降低淋洗液的背景電導(dǎo)，增加被測(cè)定離子的電導(dǎo)值。二氧化硫的含量是通過(guò)測(cè)定亞硫酸根的量來(lái)確定的，將所測(cè)得的亞硫酸根含量乘以0.8作為二氧化硫的含量。

表2 3批樣品含量測(cè)定(mg/g)

[1]王桂英，田 宇.硫熏法加工中藥材的利弊淺析[J].華西藥學(xué)雜志，1997，12(4):262 － 263.

[2]朱敏豐.硫熏中藥材中有效成分含量變化及二氧化硫殘留的研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué)，2012，24(8):55 －56.

[3]劉 偉，茹凡書(shū)，崔永霞，等.烘干與硫熏金銀花藥材HPLC指紋圖譜對(duì)比[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19(4):111－113.

[4]張玉方，余紅梅.硫熏對(duì)白芷香豆素類成分含量的影響研究[J].中國(guó)中藥雜志，1997，22(9):536 －538.

[5]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)第一增補(bǔ)本[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2012:262－263.

[6]朱雪妍，羅 軼，黃 捷，等.離子色譜法測(cè)定中藥材中二氧化硫的含量[J].中國(guó)藥師，2013，16(9):1 130 －1 132.

[7]孫 磊，岳志華，陳 佳，等.離子色譜法測(cè)定中藥材中總二氧化硫殘留[J].中國(guó)藥事，2011，25(4):336 －338.