敖恩寶力格 烏達(dá)巴拉 張園園 (內(nèi)蒙古師范大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010022)

果蠅生命周期短、繁殖快、飼養(yǎng)方便，因此與其他生物相比更有利于衰老實(shí)驗(yàn)的研究〔1，2〕。耬斗菜屬毛茛科耬斗菜屬植物，是蒙古族藥用及食用野生植物，具有通經(jīng)活血、催產(chǎn)、下胎衣、愈傷、止痛等功效，主要活性成分是生物堿〔3，4〕。本實(shí)驗(yàn)旨在探討耬斗菜提取物對(duì)黑腹果蠅的抗衰老作用。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 耬斗菜采自呼和浩特市大青山。采摘后自然晾干，取全草粉碎過(guò)100目的篩子后保存于陰涼干燥處。黑腹果蠅由內(nèi)蒙古師范大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院遺傳實(shí)驗(yàn)室提供?；九囵B(yǎng)基原料為瓊脂粉(天津市英德生化試劑有限公司)、丙酸(北京百利化學(xué)品開(kāi)發(fā)中心)、乙醚(天津市津東天正精細(xì)化學(xué)試劑)、玉米粉、紅糖、酵母粉。其他化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?。?shí)驗(yàn)用水為二次石英亞沸蒸餾水。主要儀器有MGC-350BP-2光照培養(yǎng)箱(上海一恒科技有限公司)，DC-2006型超級(jí)數(shù)控恒溫水槽(上海天平儀器技術(shù)有限公司)，UV-2000紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京萊伯泰科有限公司)，XMT數(shù)控超級(jí)恒溫槽(上海長(zhǎng)豐計(jì)量?jī)x器儀表廠)和HVE-50全自動(dòng)高壓滅菌鍋(HIRA YAMA制造公司)等。

1.2 提取方法 準(zhǔn)確稱取耬斗菜粉末1.00 g于100 ml錐形瓶中，加入80%濃度的乙醇15 ml，浸泡6 h，超聲輔助提取(12 kHz，10 min)，過(guò)濾，濾液用冷凍干燥儀干燥，稱重，然后用為10%二甲基亞砜(DMSO)溶液使其溶解并用蒸餾水稀釋至一定體積。

1.3 果蠅壽命的測(cè)定 培養(yǎng)果蠅的基本培養(yǎng)基原料為瓊脂粉、丙酸、乙醚、玉米粉、紅糖和酵母粉。收集8 h內(nèi)孵出的雌雄果蠅各600只，相同性別的果蠅以100只為單位隨機(jī)分為6個(gè)小組，雌雄同步分瓶培養(yǎng)。將其中一組接于基礎(chǔ)培養(yǎng)基作為對(duì)照組，其余兩組分別培養(yǎng)在耬斗菜提取物(0.06 mg/100 g和0.12 mg/100 g)培養(yǎng)基上作為實(shí)驗(yàn)組。各組均放在(25±1)℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每3 d更換1次培養(yǎng)基。自接種次日開(kāi)始觀察和記錄各飼養(yǎng)瓶?jī)?nèi)果蠅死亡數(shù)，直至全部死亡。以每組存活天數(shù)的總和除以該組果蠅數(shù)目作為平均壽命，每組中最后死亡的10只果蠅壽命的平均數(shù)為最高壽命。

1.4 果蠅性活力測(cè)定 連續(xù)喂養(yǎng)15 d后做性活力測(cè)定。雌雄果蠅1∶1配對(duì)，記錄40 min內(nèi)交配的果蠅對(duì)數(shù)、交配潛伏期、交配時(shí)長(zhǎng)。如果40 min后交尾果蠅沒(méi)有分開(kāi)，則等其自然分開(kāi)并記錄交尾時(shí)長(zhǎng)。

1.5 果蠅繁殖力測(cè)定 對(duì)上述果蠅進(jìn)行性活力測(cè)定之后，將同一小組中的雌雄果蠅以1∶1比例置于培養(yǎng)管內(nèi)進(jìn)行交配。3管/組、每管30對(duì)果蠅。置于(25±1)℃的培養(yǎng)箱內(nèi)孵育，第7天清除親本。第13天開(kāi)始統(tǒng)計(jì)子代成蟲(chóng)，連續(xù)統(tǒng)計(jì)5 d，記錄每管果蠅數(shù)目。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS10.0軟件行t檢驗(yàn)、單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 耬斗菜提取物對(duì)果蠅壽命的影響 實(shí)驗(yàn)組平均壽命均高于對(duì)照組(P＜0.05)。0.06 mg/100 g劑量組雌雄果蠅的壽命分別延長(zhǎng)了10 d和3 d;0.12 mg/100 g劑量組分別延長(zhǎng)了11 d和4 d。對(duì)于雌雄果蠅，實(shí)驗(yàn)組最高壽命均高于對(duì)照組，但無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。雌果蠅平均壽命差異極顯著(P＜0.01)，雄果蠅平均壽命差異顯著(P＜0.05)。0.06 mg/100 g劑量組的雌雄果蠅間平均壽命差異顯著(P＜0.05)，而0.12 mg/100 g實(shí)驗(yàn)組的雌雄果蠅之間有極顯著的差異(P＜0.01)。見(jiàn)表1。

2.2 耬斗菜提取物對(duì)果蠅性活力的影響 實(shí)驗(yàn)組交配對(duì)數(shù)明顯多于對(duì)照組(P＜0.05)，交配率提高7.8% ～18.9%，交配潛伏期相對(duì)短，交配時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P＜0.01)。見(jiàn)表2。

2.3 耬斗菜提取物對(duì)果蠅繁殖力的影響 各實(shí)驗(yàn)組子代果蠅數(shù)較對(duì)照組均有所增加，增值率達(dá)48.3% ～65.2%，0.12 mg/100 g劑量組子代雄果蠅數(shù)目與對(duì)照組比較差異顯著(P＜0.01)。見(jiàn)表3。

表1 耬斗菜提取物對(duì)果蠅壽命的影響(n=200)

與對(duì)照組比較:1)P＜0.01，2)P＜0.05;與雌性比較:3)P＜0.05，4)P＜0.01下表同

表2 耬斗菜提取物對(duì)果蠅性活力的影響

表3 耬斗菜提取物對(duì)果蠅繁殖力的影響(±s)

表3 耬斗菜提取物對(duì)果蠅繁殖力的影響(±s)

組別 代果蠅數(shù)雌蠅(只) 雄蠅(只) n 增殖率(%F1)21.25±6.0120.86±6.122010 0.06 mg/100 g組 29.08±8.8532.34±5.5529848.30.12 mg/100 g組 33.12±7.2937.69±7.5841)對(duì)照組33265.2

3 討論

壽命是評(píng)價(jià)受試生物抗衰老作用的重要指標(biāo)，田金強(qiáng)等〔5〕研究發(fā)現(xiàn)，阿魏菇多糖能夠明顯延長(zhǎng)果蠅壽命。李連德等〔6〕研究表明，不同來(lái)源的蟲(chóng)草多糖對(duì)果蠅均有不同程度的延壽作用。虞磊等〔7〕研究發(fā)現(xiàn)蜜環(huán)菌菌索多糖可顯著延長(zhǎng)果蠅壽命。陳葆荃等〔8〕研究證實(shí)，枸杞子提取物能夠延長(zhǎng)雌果蠅平均壽命和半數(shù)成活期。本研究結(jié)果表明耬斗菜提取物具有顯著延長(zhǎng)雌果蠅壽命、增強(qiáng)果蠅性活力及繁殖能力的作用。

性活力和繁殖能力可從生理角度反映受試生物的抗衰老作用。阿娃漢等〔9〕研究發(fā)現(xiàn)，黑果枸杞色素能夠延長(zhǎng)果蠅壽命，但對(duì)提高果蠅性活力無(wú)效。李春紅等〔10〕研究發(fā)現(xiàn)，南沙參具有明顯增強(qiáng)小鼠和果蠅性活力的作用，并指出其作用與清除自由基有關(guān)。楊冬梅等〔11〕的研究表明，凍干胡蜂蜂蛹可顯著延長(zhǎng)果蠅壽命，并增強(qiáng)果蠅繁殖力。王沂等〔12〕研究發(fā)現(xiàn)，厚樸酚具有延緩衰老、促進(jìn)果蠅繁殖力及提高生育能力的作用。儀慧蘭等〔13〕表明，靈芝浸提液具有加速果蠅幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育、增加子代數(shù)、延長(zhǎng)果蠅壽命。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果推測(cè)適量的耬斗菜提取物能使果蠅受精卵生存力提高。

1 王塔娜，邰麗華，富新年.藻藍(lán)蛋白(Phycocyanin)對(duì)果蠅壽命的影響〔J〕.國(guó)際遺傳學(xué)雜志，2010;33(4):215-7.

2 王塔娜，邰麗華，圖雅嘎日拉，等.節(jié)旋藻藻膽蛋白對(duì)果蠅性活力及繁殖能力的影響〔J〕.內(nèi)蒙古師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2010;39(6):608-11.

3 林 镕，陳藝林.中國(guó)植物志〔M〕.北京:科學(xué)出版社，1985:43.

4 陳四寶，王立為.耬斗菜族藥用植物化學(xué)成分及資源利用概況〔J〕.中藥學(xué)，2001;32(11):3-5.

5 田金強(qiáng)，朱克瑞，李新明，等.阿魏菇多糖的抗氧化功能及其對(duì)果蠅壽命的影響〔J〕.食品科學(xué)，2006;27(4):223-6.

6 李連德，樊美珍，李增智.14種蟲(chóng)草多糖對(duì)果蠅成蟲(chóng)壽命影響的試驗(yàn)〔J〕.微生物學(xué)通報(bào)，2000;27(6):427-8.

7 虞 磊，沈業(yè)壽，吳建民.蜜環(huán)菌菌索多糖抗衰老作用研究〔J〕.中成藥，2006;28(7):994-6.

8 陳葆荃，謝梅林，錢(qián)曾年.枸杞子提取物對(duì)小鼠免疫功能和果蠅壽命的影響〔J〕.中國(guó)野生植物資源，1995;2(8):5-7.

9 阿娃漢，陳 瑛，陶大勇.黑果枸杞色素對(duì)果蠅性活力及壽命影響的研究〔J〕.塔里木法大學(xué)學(xué)報(bào)，2007;19(3):19-20.

10 李春紅，李 泱，李新芳.南沙參多糖對(duì)小鼠和果蠅性活力的影響〔J〕.生殖醫(yī)學(xué)雜志，2002;11(4):213-7.

11 楊冬梅，李俊年，張 麗.凍干胡蜂蜂蛹對(duì)果蠅壽命和繁殖性能的影響〔J〕.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2005;17(4):450-2.

12 王 沂，吳 翔，翁新楚.厚樸酚對(duì)果蠅壽命和繁殖力的影響〔J〕.四川動(dòng)物，2006;25(4):700-2.

13 儀慧蘭，高翠蓮.靈芝浸提液對(duì)果蠅生物學(xué)特性的影響〔J〕.山西大學(xué)學(xué)報(bào)，2000;23(3):146-9