李盡哲，黃雅琴，2*，葉兆偉（.信陽農(nóng)林學(xué)院 生物與制藥工程學(xué)院，河南 信陽 464000；2.鄭州大學(xué)河南省離子束生物工程重點實驗室，河南 鄭州 450052）

蛹蟲草銀杏葉保健飲料的研制

李盡哲1，黃雅琴1，2*，葉兆偉1
（1.信陽農(nóng)林學(xué)院 生物與制藥工程學(xué)院，河南 信陽 464000；2.鄭州大學(xué)河南省離子束生物工程重點實驗室，河南 鄭州 450052）

以蛹蟲草和銀杏葉為原料，以木糖醇、檸檬酸、蜂蜜為調(diào)味劑，羧甲基纖維素鈉作為穩(wěn)定劑，研制蛹蟲草銀杏葉保健飲料。通過正交試驗設(shè)計和感官品質(zhì)評價，確定了該保健飲料的最佳配方為蛹蟲草和銀杏葉浸提液體積比為1∶3，木糖醇的添加量為40 g/L、檸檬酸的添加量為0.4 g/L、蜂蜜的添加量為20 g/L、羧甲基纖維素鈉的添加量為3 g/L。經(jīng)過有效成分含量檢測結(jié)果表明，該保健飲料中蟲草素及總黃酮含量分別為0.01 mg/L和12.0 mg/L。該飲料保健性能突出、口感協(xié)調(diào)、有效成分含量穩(wěn)定、質(zhì)量符合相關(guān)標準。

蛹蟲草；銀杏葉；保健飲料

蛹蟲草（Cordyceps mi1itaris）是人工培育的冬蟲夏草的替代品，馬俊等［1］研究證明，在蛹蟲草中蟲草素、腺嘌呤、核苷這三種成分含量遠高于野生的冬蟲夏草，《新華本草綱要》中其具有平補腎陽和滋補肺陰的功效，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明其具有降血糖、降血脂、降血壓、延緩衰老、抗腫瘤、增強免疫力、治療肺炎和支氣管炎等方面的功效［2］。銀杏（Ginkgo bi1oba）葉中含有以黃酮為主要成分的酮類、酚類和萜類混合物，其具有顯著的降血脂、降血壓、緩解支氣管炎和哮喘癥狀等方面的功能［3］，同時穆婷婷等［4-5］研究證明經(jīng)常食用含有黃銅的食品可以顯著降低腫瘤的發(fā)病率。從藥性和功效上來講，蛹蟲草和銀杏葉具有相近和互補的功效，二者結(jié)合能夠更好地發(fā)揮其藥用價值，本研究以蛹蟲草和銀杏葉為主要原料，通過單因素及正交試驗，確定木糖醇、檸檬酸、蜂蜜和羧甲基纖維素的添加量，開發(fā)出一款色澤美觀、味道鮮美、具有降三高（血壓、血糖、血脂）、提高免疫力、抗腫瘤等功能的低糖保健飲料，尤其適合患有糖尿病的中老年人。本款蛹蟲草銀杏葉復(fù)合保健飲料的開發(fā)能夠填補該方面的市場空白，提高人民群眾的健康水平。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

蛹蟲草子實體：食用菌實驗室培養(yǎng)保存；銀杏葉：采自校內(nèi)實訓(xùn)基地，秋季發(fā)黃銀杏葉；蘆?。兌取?8%）：中國藥品生物制品檢定所；蟲草素（純度≥99%）：美國Sigma公司；木糖醇、檸檬酸、蜂蜜和羧甲基纖維素鈉（carboxy methy1 ce11u1ose-Na，CMC-Na）等：市售。

1.2儀器與設(shè)備

XFB-200型中藥粉碎機：湖南中誠制藥設(shè)備公司；101-0型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱：上海梅香儀器公司；SHB-IIIS循環(huán)水式多用型真空泵：鄭州長城科工貿(mào)有限公司；FA2004B型電子天平：上海精密科學(xué)儀器公司；PHS-3C型pH計：深圳怡華電子公司；RA-600型阿貝折光儀：中科恒遠實驗儀器公司；HH-S6型恒溫水浴鍋：金壇市國旺實驗儀器公司；GJB8-20型高壓均質(zhì)機：常州均質(zhì)設(shè)備公司；XFS-280MB型高壓滅菌鍋：浙江新豐醫(yī)療公司；LC-10AT高效液相色譜儀：日本島津公司；TU-1901型分光光度計：北京普析儀器設(shè)備公司。

1.3方法

1.3.1蛹蟲草銀杏葉保健飲料生產(chǎn)工藝流程

操作要點：

蛹蟲草子實體浸提液的制備：將蟲草子實體放入電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中50℃烘干，再放入中藥粉碎機中充分粉碎至50目，按照蟲草∶水1∶100（g∶mL）的比例，70～80℃浸提1.5 h，過濾取濾液。濾渣加入等體積的熱水，同等條件下浸提1 h后過濾，合并兩次濾液獲得蟲草浸提液［6-7］。

銀杏葉浸提液的制備：將銀杏葉用清水反復(fù)沖洗2～3次，瀝干水分，放入電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中50℃烘干，粉碎至50目，按照銀杏葉∶水1∶10（g∶mL）的比例，80℃浸提3 h，過濾取濾液，濾渣加入等體積的熱水再浸提2 h后過濾，合并兩次濾液獲得銀杏葉浸提液［8-9］。

調(diào)配：將蟲草浸提液和銀杏葉浸提液按照1∶3（V/V）的比例混合［10］，用不同配比的木糖醇、蜂蜜、檸檬酸和羧甲基纖維素鈉調(diào)節(jié)該飲料的風(fēng)味，通過正交試驗和感官評定確定該飲料最佳配方。

均質(zhì)、滅菌、灌裝：將混合后的料液放入高壓均質(zhì)機中，20 MPa，均質(zhì)10 min；將飲料迅速加熱到85℃，維持5 min；迅速灌裝到已經(jīng)潔凈且無菌的玻璃瓶中，降溫到40℃以下，冷涼待測。

1.3.2質(zhì)量指標檢測

（1）感官指標

表1　蛹蟲草銀杏葉保健飲料感官評價標準Table 1 Sensory evaluation standards of healthy beverage of C.militarisandG.biloba

蛹蟲草銀杏葉保健飲料的感官評分標準見表1。通過隨機挑選10名食品專業(yè)人員從色澤、香味、透明度、滋味等方面對產(chǎn)品進行感官評價，滿分100分。

（2）理化指標

用高效液相色譜法測定飲料中蟲草素含量［11］；用紫外分光光度計法測定飲料中總黃酮含量［8］；用阿貝折光儀在室溫（20℃）下測定飲料中可溶性固形物的含量；利用酸堿滴定法測定測定飲料總酸含量（以檸檬酸計）。

（3）微生物指標

用常規(guī)的微生物學(xué)檢測方法對飲料中細菌總數(shù)、大腸桿菌及病原菌進行檢測。

1.3.3配方優(yōu)化單因素試驗

固定蟲草和銀杏葉浸提液體積比為1∶3，以該保健飲料的感官評分為評價指標，分別考察木糖醇（10 g/L、20 g/L、30 g/L、40 g/L、50 g/L）、檸檬酸（0.2 g/L、0.4 g/L、0.6 g/L、0.8 g/L、1.0 g/L）、蜂蜜（10 g/L、20 g/L、30 g/L、40 g/L、50 g/L）和羧甲基纖維素鈉（1 g/L、2 g/L、3 g/L、4 g/L、5 g/L）添加量對產(chǎn)品感官品質(zhì)的影響。

1.3.4配方優(yōu)化正交試驗

在單因素試驗基礎(chǔ)上，固定蟲草和銀杏葉浸提液體積比為1∶3，以該保健飲料的感官評分為評價指標，對產(chǎn)品配方進行正交試驗優(yōu)化，因素與水平見表2。

表2　配方優(yōu)化正交試驗因素與水平Table 2 Factors and levels of orthogonal experiments for formula optimization g/L

2　結(jié)果與分析

2.1單因素試驗結(jié)果

木糖醇、檸檬酸、羧甲基纖維素鈉以及蜂蜜對飲料感官評分的影響見圖1。由圖1可知，感官評分隨木糖醇的添加量增加呈上升趨勢，添加量在30～50 g/L時，飲料的感官品質(zhì)最好，最高可達82分。感官評分隨檸檬酸添加量增加呈先上升后下降趨勢，添加量在0.4～0.8 g/L時品質(zhì)較好，此后下降。隨羧甲基纖維素鈉添加量的增加，感官評分變化較為波動，在1～3 g/L時感官品質(zhì)較好。感官評分隨蜂蜜添加量增加呈先上升后下降趨勢，在30 g/L時感官評分最高達到81分，綜合看來在20～40 g/L時，其感官品質(zhì)較好，但是10 g/L和40 g/L感官品質(zhì)相差不大，考慮到成本問題，后續(xù)的正交試驗中選擇10～30 g/L。

圖1　木糖醇（A）、檸檬酸（B）、羧甲基纖維素鈉（C）及蜂蜜（D）添加量對飲料感官品質(zhì)的影響Fig.1 Effect of xylitol（A），citric acid（B），CMC-Na（C）and honey（D）addition on sensory quality of beverage

2.2配方優(yōu)化正交試驗結(jié)果

在單因素試驗基礎(chǔ)上，考察木糖醇、檸檬酸、蜂蜜和羧甲基纖維素鈉4種因素對飲料感官品質(zhì)的影響，以該保健飲料的感官評分為評價指標，設(shè)計4因素3水平的正交試驗，結(jié)果與分析見表3，方差分析見表4。

由表3可知，對該飲料品質(zhì)影響最大的因素是木糖醇和蜂蜜的添加量，其中蜂蜜的添加量影響最大，而檸檬酸和CMC-Na的添加量對飲料品質(zhì)的影響相對較小，分析其原因可能是由于蟲草和銀杏葉的浸提液苦味明顯，故甜味劑木糖醇和蜂蜜對飲料品質(zhì)影響較大。獲得的最佳配方條件是A2B1C2D3，即40 g/L的木糖醇、0.4 g/L的檸檬酸、20 g/L的蜂蜜和3 g/L的CMC-Na。在此最佳條件下經(jīng)過3次驗證試驗，該配方的平均得分達到92分。

表3　配方優(yōu)化正交試驗結(jié)果與分析Table 3 Results and analysis of orthogonal experiments for formula optimization

由表4可知，木糖醇和蜂蜜添加量對該保健飲料的感官品質(zhì)影響極顯著（P＜0.01），檸檬酸和羧甲基纖維素鈉的添加量對飲料的感官影響不顯著（P＞0.05），木糖醇和蜂蜜的價格要遠高于檸檬酸和羧甲基纖維素鈉，因此，A2B1C2D3作為最佳配方較為合適。

表4　正交試驗結(jié)果方差分析Table 4 Variance analysis of orthogonal experiments results

2.3質(zhì)量檢測結(jié)果

（1）感官指標

蛹蟲草銀杏葉保健飲料，色澤鮮亮，呈現(xiàn)金黃色，澄明度高，有濃郁的蛹蟲草和銀杏葉的香味，入口酸甜適宜，余味悠長。

（2）理化指標

可溶性固形物含量≥8%；總酸（以檸檬酸計）≥0.04%；蟲草素含量0.01 mg/L；總黃酮含量12.0 mg/L；重金屬含量符合國家標準。

（3）微生物指標

細菌總數(shù)≤100CFU/mL，大腸桿菌≤30 MPN/100 mL，致病菌未檢出。

3　結(jié)論

本研究在單因素試驗的基礎(chǔ)上，采用正交試驗優(yōu)化蟲草銀杏葉保健飲料的配方。結(jié)果表明蟲草銀杏葉保健飲料的最佳配方為每升飲料中，添加5 g蟲草子實體、25 g銀杏葉、40 g木糖醇、0.4 g檸檬酸、20 g蜂蜜和3 g羥甲基纖維素鈉。該飲料湯色亮黃，具有蟲草和桑葉所特有的清香味，酸甜可口，口感綿爽。

在產(chǎn)品質(zhì)量檢測過程中，參考藥物制劑質(zhì)量檢測標準，除了對理化及衛(wèi)生質(zhì)量檢測指標進行了檢測，還對蟲草素和黃酮含量進行了檢測［14-17］，從而確定了飲料中關(guān)鍵有效成分蟲草素和總黃酮的含量，進而對飲料的保健效果提供科學(xué)依據(jù)。除此之外，在該保健飲料中沒有添加任何防腐劑，因為蟲草素本身具有一定的防腐作用，減少了防腐劑對人體健康的危害。

在環(huán)境污染日益嚴重、食品安全觸目驚心、亞健康狀態(tài)人數(shù)越來越多、高血糖人群趨于低齡化的今天，開發(fā)蟲草銀杏葉低糖保健飲料能夠充分滿足不同年齡段人群追求綠色、營養(yǎng)、天然保健的要求，也符合飲料市場的發(fā)展趨勢。

［1］金莉莉，馬俊，李婷，等.不同來源北冬蟲夏草活性成分差異及其對小鼠免疫功能的影響［J］.食品科學(xué)，2015，36（13）：243-246.［2］孫連海，尚新彬，郭明月.無糖蟲草酸奶的研制［J］.中國釀造，2014，33 （2）：154-156.

［3］李虎，徐奇，李文靜，等.銀杏葉黃酮粗提物提取及其抑菌性質(zhì)研究［J］.中國釀造，2011，30（10）：107-110.

［4］穆婷婷，韓玲，李儒仁.超聲波萃取苦蕎麥皮中總黃酮工藝的研究［J］.食品科技，2011，36（6）：251-254.

［5］林汝法.中國蕎麥［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1994.

［6］岳春，田進軍，葛中巧，等.枇杷葉蛹蟲草黃酒的研究與開發(fā)［J］.中國釀造，2012，31（7）：186-190.

［7］孫連海，郭明月.蛹蟲草發(fā)酵乳飲料的研制［J］.北方園藝，2013（18）：133-135.

［8］陳海挺，胡江飚，盧敏攀，等.銀杏葉提取物對胃癌SGC7901細胞增殖與凋亡的影響［J］.中國藥房，2015，26（25）：3510-3512.

［9］尹麗，郭小慧.銀杏葉總黃酮正交提取工藝優(yōu)化及其抗氧化能力與抑制亞硝化反應(yīng)研究［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19（18）：260-262.

［10］張亞紅，周凱，方磊，等.蛹蟲草菠蘿皮復(fù)合飲料的研制［J］.飲料工業(yè)，2009（9）：21-23.

［11］甘賓賓，潘艷坤.HPLC法測定保健食品中的蟲草素和腺苷含量［J］.中國衛(wèi)生檢測雜志，2006，16（11）：1310-1311.

［12］黨花利，秦秀麗.蛹蟲草-獼猴桃保健飲料工藝研究［J］.食用菌，2014 （5）：58-60.

［13］秦秀麗，金艷梅.蛹蟲草枸杞保健飲料生產(chǎn)工藝條件的優(yōu)化［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（3）：227-229.

［14］HUANG L，LI Q，CHEN Y Y，et a1.Determination and ana1ysis of cordycepin and adenosine in the products ofGordycepsspp.［J］.Afr J Microbiol Res，2009，3（12）:957-961.

［15］李琴，廖紅華.高效液相色譜法測定3種蛹蟲草中蟲草素及比較分析［J］.食品科學(xué)，2014，35（14）：118-122.

［16］LI S P，YANG F Q，TSIM K W K.Qua1ity contro1 ofCordyceps sinenisis，a va1ued traditiona1Chinese medicine［J］.J Pharm Biomed Anal，2006，41（5）:1571-1584.

［17］尹紅衛(wèi)，潘蘇華.HPLC測定復(fù)方銀杏葉刺梨膠囊中銀杏黃酮醇苷的含量［J］.中國現(xiàn)代中藥，2015，17（1）：54-57.

Deve1opment of hea1thy beverage ofCordyceps mi1itarisandGinkgo bi1oba

LI Jinzhe1，HUANG Yaqin1，2*，YE Zhaowei1
（1.Co11ege of Bio1ogica1 and Pharmaceutica1 Engineering，Xinyang Co11ege of Agricu1ture and Forestry，Xinyang 464000，China；2.Henan Provincia1 Key Laboratory of Ion Beam Bio-engineering，Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，China）

UsingCordyceps mi1itarisandGinkgo bi1obaas raw materia1s，xy1ito1，citric acid，honey and as condiment，CMC-Na as stabi1izer，the hea1thy beverage ofC.mi1itarisandG.bi1obawas deve1oped.Through orthogona1 experiments and sensory qua1ity eva1uations，the optimum formu1a of hea1thy beverage was determined as fo11ows:the vo1ume ratio ofC.mi1itarisandG.bi1obaextract 1iquid 1∶3，xy1ito1 40 g/L，citric acid 0.4 g/L，honey 20 g/L，CMC-Na 3 g/L.The detection resu1ts of effective component content showed that the cordycepin and tota1 f1avonoids content in the hea1thy beverage was 0.01 mg/L and 12.0 mg/L，respective1y.The beverage had hea1thy function，harmonious taste，and stab1e effective content and met the corre1ation standard.

Cordyceps mi1itaris；Ginkgo bi1oba；hea1thy beverage

TS275.4

B

0254-5071（2015）12-0175-04

10.11882/j.issn.0254-5071.2015.12.039

2015-10-25

河南省科技攻關(guān)項目（152102210222）；信陽農(nóng)林學(xué)院青年基金項目（201401010）

李盡哲（1982-），男，講師，碩士，主要從事生物制藥方面的研究工作。

黃雅琴（1986-），女，講師，博士研究生，主要從事生物技術(shù)方面的研究工作。