劉鳳霞

[摘要] 目的 探討快速檢測方法在成人呼吸道病毒及非典型病原體檢測中的應(yīng)用。 方法 選擇成人呼吸道感染患者500例為研究對象，鼻咽部分泌物中流感病毒A、B抗原采用膠體金免疫層析法檢測，肺炎支原體抗體采用快速培養(yǎng)法檢測，同時采用間接免疫熒光法檢測血清常見呼吸道病原體IgM抗體。 結(jié)果 流感病毒A：快速檢測陽性率3.6%，血清學(xué)檢測陽性率9.2%（P<0.01）；陽性似然比：6.3，陰性似然比：0.9。流感病毒B：快速檢測陽性率0.8%，血清學(xué)檢測陽性率7.0%（P<0.01）；陽性似然比：43.0；陰性似然比：0.9。支原體：快速檢測陽性率20.2%，血清學(xué)檢測陽性率12.6%（P<0.01）；陽性似然比：1.7；陰性似然比：0.8。 結(jié)論 成人呼吸道病毒及非典型病原體快速檢測方法具有快速、簡便、結(jié)果快速等優(yōu)點(diǎn)，但是其靈敏度相對較低。在臨床工作中可將快速檢測方法作為血清學(xué)檢查的輔助檢查，指導(dǎo)臨床診斷和治療。

[關(guān)鍵詞] 呼吸道病毒；非典型病原體；膠體金免疫層析法；快速培養(yǎng)法；間接免疫熒光法

[中圖分類號] R56；R446.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2015）22-0113-03

Application effect of rapid detection in diagnosis of adult respiratory viruses and atypical pathogens

LIU Fengxia

Department of Laboratory， Juye County Hospital of Traditional Chinese Medicine in Shandong Province， Juye 274900， China

[Abstract] Objective To discuss the effect of rapid detection in diagnosis of adult respiratory viruses and atypical pathogens. Methods A total of 500 cases with adult respiratory infection were selected as research subjects. Colloidal gold immunochromatographic assay was used to detect nasopharyngeal secretions influenza virus A， B antigen. Rapid culture was used to detect Mycoplasma pneumoniae antigen. At the same time， indirect immunofluorescence was used to detect serum IgM of common respiratory pathogens. Results Influenza virus A： the positive rate of rapid detection was 3.6%， serology detection was 9.2%（P<0.01）； The positive likelihood ratio was 6.3， and the negative likelihood ratio was 0.9. Influenza virus B： the positive rate of rapid detection was 0.8%， serology detection was 7.0%（P<0.01）； the positive likelihood ratio was 43.0， and the negative likelihood ratio was 0.9. Mycoplasma： the positive rate of rapid detection was 20.2%， serology detection was 12.6%（P<0.01）； The positive likelihood ratio was 1.7， and the negative likelihood ratio was 0.8. Conclusion Rapid detection in adult respiratory viruses and atypical pathogens is rapid， simple， fast results， but with low sensitivity. In clinical work， rapid detection methods can be used as an auxiliary examination serology to guide clinical diagnosis and treatment.

[Key words] Respiratory viruses； Atypical pathogens； Gold immunochromatographic assay； Rapid culture； Indirect immunofluorescence

呼吸道感染是呼吸內(nèi)科的常見病，目前臨床上主要的病原學(xué)檢查是血清學(xué)抗體檢查，相對來說，檢查結(jié)果不夠快速簡便。隨著對呼吸道病毒及非典型病原體病原學(xué)的研究，對鼻咽部分泌物病原學(xué)的檢驗(yàn)方法越來越受到臨床重視[1，2]。本研究以血清抗體學(xué)檢查為參照，分析膠體金免疫層析法檢查鼻咽部分泌物流感病毒及快速培養(yǎng)法檢測鼻咽部分泌物肺炎支原體抗原在成人呼吸道病毒、非典型病原體檢測中的應(yīng)用，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2013年1月～2014年12月在我院呼吸內(nèi)科治療的500例呼吸道感染患者為研究對象。其中男280例，女220例，年齡18～83歲，平均（61.4±24.7）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)[3]：急性支氣管炎、肺炎、支氣管擴(kuò)張合并感染、支氣管哮喘急性發(fā)作、慢性阻塞性肺疾病急性加重，肺間質(zhì)肺病合并感染患者及發(fā)熱待查患者。排除耳鼻喉感染患者。其中急性支氣管炎131例，肺炎144例，支氣管擴(kuò)張合并感染82例，支氣管哮喘急性發(fā)作61例，慢性阻塞性肺疾病急性加重48例，肺間質(zhì)肺病合并感染19例，發(fā)熱待查15例。

1.2 檢測方法

試劑：流感病毒A檢測試劑盒，流感病毒B檢測試劑盒，支原體培養(yǎng)基，呼吸道感染病原IgM抗體檢測試劑盒。

檢測方法：患者入院后采集鼻或咽部分泌物，鼻部分泌物或咽部分泌物的采集根據(jù)患者的意愿選擇。咽拭子采集：患者漱口，壓舌板壓住舌根，將2支無菌拭子自口腔插入咽喉擦拭扁桃體隱窩及咽喉壁；鼻拭子：將2支無菌拭子插入鼻腔1～2 cm，轉(zhuǎn)動，并向內(nèi)部推送，至鼻甲處，貼鼻腔內(nèi)壁扭轉(zhuǎn)拭子多次后取出。2支拭子分別用于檢測流感病毒及支原體抗原培養(yǎng)。膠體金免疫層析法檢測流感病毒，分別向流感病毒A和流感病毒B檢測試紙卡中加含有鼻或咽分泌物裂解液4滴，加樣后15 min觀察結(jié)果，陽性為檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)均出現(xiàn)紅線，陰性為僅質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)紅線。支原體培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶放入37℃恒溫培養(yǎng)箱匯總，培養(yǎng)24～48 h觀察結(jié)果。培養(yǎng)基由紅色變?yōu)榫G色或淺黃色，但仍然透明則有支原體生長；顏色未變或變得不清亮則為陰性；培養(yǎng)基渾濁，有絮狀、片狀物則為無效。血清學(xué)檢查：入院后24 h內(nèi)采集靜脈血3 mL，離心后取血清，采用呼吸道感染病原體IgM抗體檢測試劑盒進(jìn)行檢測。所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。陽性為觀察道細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核或細(xì)胞膜出現(xiàn)蘋果綠色熒光，陰性為無熒光或細(xì)胞呈紅色。

1.3 研究方法

本研究以血清學(xué)檢查結(jié)果為參照，分別比較流感病毒A、流感病毒B、支原體快速培養(yǎng)快速檢測方法與血清學(xué)檢查結(jié)果的陽性似然比、陰性似然比、靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值。靈敏度：即患者中得出陽性檢測的樣本占患者總數(shù)的百分比，即A/A+C；特異度：即健康人中得出陰性檢測的樣本占健康人總數(shù)的百分比，即D/B+D；陽性預(yù)測值：即得出陽性檢測的樣本總數(shù)中，患者樣本占陽性檢測樣本總數(shù)的百分比，即A/A+B；陰性預(yù)測值：即得出陰性檢測的樣本總數(shù)中，正常人樣本占陰性檢測樣本總數(shù)的百分比，即D/C+D；陽性似然比：靈敏度/（1-特異性）；陰性似然比：（1-靈敏度）/特異度。當(dāng)陽性似然比>10 或陰性似然比<0.1時，診斷或排除某種疾病的可能性顯著增加[3]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，陽性率比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 流感病毒A兩種檢查方法結(jié)果比較

快速檢測陽性率3.6%（18/500），血清學(xué)檢測陽性率9.2%（46/500）（χ2=15.68，P<0.01）。靈敏度15.2%（7/46），特異度97.6%（443/454），陽性預(yù)測值38.9%（7/18），陰性預(yù)測值91.9%（443/482），陽性似然比：0.152/（1-0.976）=6.3，陰性似然比：（1-0.152）/0.976=0.9。見表1。

表1 流感病毒A兩種檢查方法結(jié)果比較

2.2 流感病毒B兩種檢查方法結(jié)果比較

快速檢測陽性率0.8%（4/500），血清學(xué)檢測陽性率7.0%（35/500）（χ2=29.12，P<0.01）。靈敏度8.6%（3/35），特異度99.8%（464/465），陽性預(yù)測值75.0%（3/4），陰性預(yù)測值93.5%（464/496），陽性似然比：0.086/（1-0.998）=43.0，陰性似然比：（1-0.086）/0.998=0.9。見表2。

表2 流感病毒B兩種檢查方法結(jié)果比較

2.3支原體兩種檢測方法結(jié)果比較

快速檢測陽性率20.2%（101/500），血清學(xué)檢測陽性率12.6%（63/500）（χ2=49.19，P<0.01）。靈敏度31.7%（20/63），特異度81.5%（356/437），陽性預(yù)測值19.8%（20/101），陰性預(yù)測值89.2%（356/399），陽性似然比：0.317/（1-0.815）=1.7，陰性似然比：（1-0.317）/0.815=0.8。見表3。

表3 支原體兩種檢測方法結(jié)果比較

3討論

呼吸道感染可同時存在多種病毒及非典型病原體感染，病原學(xué)快速檢驗(yàn)對及時診斷及選擇合理治療方案至關(guān)重要。呼吸道病毒感染及非典型病原體感染所導(dǎo)致的臨床癥狀和體征缺乏特異性，盲目使用抗生素治療，一方面可能取不到良好的臨床療效，一方面也會造成抗生素的濫用。因此在臨床診斷中，能夠盡早快速檢測抗原，對診斷、治療以及疫情報告均具有重要的意義。

膠體金技術(shù)創(chuàng)于20世紀(jì)70年代，是以膠體金作為示蹤劑標(biāo)志物或顯色劑，應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)[4]。膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，稱為膠體金[5，6]。由于膠體金具有肉眼可觀測的紅色，所以既可用于免疫電鏡、光鏡檢測，也可作為指示物結(jié)合固相載體用于體外免疫檢測抗原或抗體，特別是試紙條的發(fā)展，使操作更加方便快捷[7，8]。試紙條技術(shù)的特點(diǎn)是快速、簡便，全部檢測過程在20 min內(nèi)，不需要其他任何儀器設(shè)備，操作也極其簡單，無需專業(yè)人員，攜帶方便，能隨時隨地進(jìn)行。其多用于血液檢查，也可用于尿檢、唾液檢查、分泌物檢測等，適合各種檢查[9]；缺點(diǎn)是只能定性檢查，不能定量檢查，另外靈敏度相對較低[10]。

在本次研究中，流感病毒A檢測結(jié)果顯示，膠體金層析法與血清學(xué)比較，特異度較高，而靈敏度較低。流感病毒B檢測結(jié)果顯示，膠體金層析法特異度較高，陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值均較高，而陽性似然比顯著高于1，陰性似然比超過0.1，說明在流感病毒B的檢測中陽性檢測結(jié)果說明診斷的可能性較高。肺炎支原體快速培養(yǎng)法是利用肺炎支原體的代謝產(chǎn)物使培養(yǎng)基液體中的指示劑顏色發(fā)生改變來判斷其生長，標(biāo)本中的其他支原體和細(xì)菌則被培養(yǎng)基中的青霉素和醋酸陀抑制[11-14]。此法操作簡便、快速、無痛苦。在本次研究中，支原體抗原快速培養(yǎng)結(jié)果陽性率高于血清學(xué)檢測結(jié)果，提示假陽性率相對較高，靈敏度31.7%，特異度81.5%，陽性預(yù)測值19.8%，陰性預(yù)測值89.2%，陽性似然比1.7，陰性似然比0.8。陽性似然比低于10，陰性似然比高于0.1，說明在支原體病原檢測中快速培養(yǎng)法診斷或排除支原體感染的可能性相對較低。

綜上所述，成人呼吸道病毒及非典型病原體快速檢測方法具有快速、簡便、結(jié)果快速等優(yōu)點(diǎn)，但是其靈敏度相對較低。在臨床工作中，可將快速檢測方法作為血清學(xué)檢查的輔助檢查，指導(dǎo)臨床的診斷和治療，并且隨著技術(shù)的發(fā)展，快速檢測方法的靈敏度也會有所提高。

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（收稿日期：2015-04-15）