曾祥燕，顏萍花，唐玉榮，蔡毅（廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧　530001）

空心莧質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步研究

曾祥燕，顏萍花，唐玉榮，蔡毅
（廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧530001）

摘要：［目的］對(duì)空心莧質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行初步研究。［方法］通過(guò)生藥學(xué)鑒別研究，并按照2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》附錄方法對(duì)空心莧的水分、總灰分、酸不溶性灰分及浸出物含量等進(jìn)行測(cè)定。［結(jié)果］建立了空心莧的生藥學(xué)鑒別方法，初步擬定其水分不得超過(guò)15%，總灰分低于23%，酸不溶性灰分小于4%，水溶性浸出物含量大于30%。［結(jié)論］所建立的方法可為空心莧藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：空心莧；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；生藥學(xué)

空心莧，又名空心蕹、水花生、過(guò)塘蛇、水馬齒莧、肥豬菜、喜旱蓮子草、空心蓮子草等，來(lái)源于莧科植物空心莧Alternanthera philoxeroides（Mart）Griseb的全草，具有清熱、涼血、解毒功效，內(nèi)服可用于乙腦、流感初期、流行性出血性結(jié)膜炎、肺結(jié)核咯血，外用可治濕疹、帶狀皰疹、疔瘡、毒蛇咬傷等疾?。?］?，F(xiàn)代研究表明空心莧含有甾醇、三萜、皂苷和黃酮類等化學(xué)成分［2-5］，并具有抑菌、抗病毒、抗甲型H3N2流感病毒和抗呼吸道合胞病毒等藥理作用［6-11］。本文通過(guò)對(duì)其進(jìn)行生藥學(xué)初步研究，旨為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　試藥與儀器

1.1試藥空心莧采于廣西各地，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)蔡毅教授鑒定為莧科植物空心莧Alternanthera philoxeroides（Mart）Griseb.的全草；薄層層析硅膠G（化學(xué)純，青島海洋化工公司）；其余試劑均為化學(xué)純；水為純凈水。

1.2儀器Leica Miccrosystems（德國(guó)萊卡儀器公司，型號(hào): DFC500）；Leica光學(xué)顯微鏡（德國(guó)萊卡儀器公司，型號(hào): DM2500）；自動(dòng)輪轉(zhuǎn)切片機(jī)（德國(guó)萊卡儀器公司，RM2145）；上皿電子天平（上海精科天平，型號(hào):FA1104）；超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，型號(hào):KQ5200B）。

2　生藥學(xué)鑒別

2.1藥材性狀鑒別全草長(zhǎng)短不一，扁莖圓柱形，有縱直條紋，表面黃棕色；莖節(jié)處簇生白色絨毛和棕褐色須狀根；斷面中空。葉對(duì)生，皺縮卷曲，兩面均具疏生短毛。偶見(jiàn)頭狀花序單生與葉腋，具總花梗；花白色。氣微，味微苦澀。

2.2顯微鑒別

2.2.1莖橫切面類圓形。表皮細(xì)胞1列，類長(zhǎng)方形，排列緊密，外被角質(zhì)層，可見(jiàn)氣孔及非腺毛；厚角細(xì)胞2～3列，成不連續(xù)的環(huán)狀。皮層由4～10列薄壁細(xì)胞組成，細(xì)胞類圓形或橢圓形，排列疏松。維管束外韌型，8～15個(gè)，大小不等，排列成環(huán)。韌皮部狹窄，由韌皮薄壁細(xì)胞和篩管組成，外側(cè)可見(jiàn)纖維束。形成層明顯，束間形成層內(nèi)方有1～6列厚壁的木化細(xì)胞，與木質(zhì)部外側(cè)的木化細(xì)胞連接成環(huán)狀。木質(zhì)部由木薄壁細(xì)胞和導(dǎo)管等組成，管徑較大，近圓形，內(nèi)側(cè)的木薄壁細(xì)胞壁未木化。髓部寬廣，細(xì)胞較大，常形成空腔。皮層和髓部散在有異形細(xì)胞，內(nèi)含草酸鈣簇晶。見(jiàn)圖1、圖2。

圖1　空心莧莖橫切面詳圖

圖2　空心莧莖橫切面放大示意圖

2.2.2葉橫切面上表皮細(xì)胞1列，類圓形或長(zhǎng)方形，外被角質(zhì)層；下表皮細(xì)胞較小，可見(jiàn)氣孔及非腺毛。柵欄細(xì)胞圓柱形，1～2列，不通過(guò)主脈；海綿細(xì)胞3～4列，排列疏松；兩組織間散在有異形細(xì)胞，內(nèi)含草酸鈣簇晶。主脈處有3個(gè)外韌型維管束，木質(zhì)部在上方，韌皮部在下方。上下表皮內(nèi)具1~數(shù)列厚角細(xì)胞。見(jiàn)圖3。

圖3　空心莧葉橫切面詳圖

2.2.3葉表面片上表皮細(xì)胞垂周壁平直或微波狀，可見(jiàn)直軸式氣孔及兩種多細(xì)胞非腺毛，一種短小，似蠶形；另一種較長(zhǎng)，約由3～5個(gè)細(xì)胞構(gòu)成，具疣狀突起。下表皮細(xì)胞垂周壁波狀彎曲，氣孔較多，亦見(jiàn)兩種非腺毛。見(jiàn)圖4。

圖4　空心莧葉表面圖

2.2.4全草粉末特征非腺毛易見(jiàn)，一種似蠶形，約由6～8個(gè)細(xì)胞構(gòu)成，微彎曲，壁薄，粗短，先端鈍圓或鈍尖，長(zhǎng)62～117μm，直徑18～38 μm，內(nèi)含淺棕色物；另一種非腺毛細(xì)長(zhǎng)，約由3～5個(gè)細(xì)胞構(gòu)成，長(zhǎng)160～380 μm，先端漸尖，近基部短小，近頂端細(xì)胞長(zhǎng)大，壁增厚，具疣狀突起。氣孔為直軸式。大量草酸鈣簇晶散在，直徑為46～100 μm。亦見(jiàn)草酸鈣方晶，直徑為19～100 μm。導(dǎo)管為螺紋導(dǎo)管和梯紋導(dǎo)管，壁多木化。纖維束碎片易見(jiàn)。見(jiàn)圖5。

圖5　空心莧粉末顯微特征圖

2.3薄層鑒別

2.3.1薄層色譜條件的篩選

2.3.1.1提取溶劑的選擇取對(duì)照藥材（KXX-1）適量，分別加入乙酸乙酯、甲醇、50%乙醇、水等4種不同極性的溶劑進(jìn)行提取，最終以乙酸乙酯提取液所得薄層色譜圖斑點(diǎn)最明顯。

2.3.1.2提取方法的選擇取對(duì)照藥材（KXX-1）適量，分別考察冷浸12 h、超聲提取30 min、水浴回流30 min等3種不同提取方法，結(jié)果表明3種方法所得薄層色譜圖基本一致，其中以超聲提取30 min最為省時(shí)簡(jiǎn)便，故選定為提取方法。

2.3.1.3藥材取樣量的選擇取對(duì)照藥材（KXX-1）粉末3份，分別為0.5 g、1 g、2 g，分別加入乙酸乙酯各20 ml，超聲提取30 min制備供試品溶液。結(jié)果表明，藥材取樣量為0.5～2 g時(shí)，均可檢視到3個(gè)斑點(diǎn)。但取樣量為0.5 g時(shí)，主斑點(diǎn)顯色不夠清晰，取樣量為2 g時(shí)，主斑點(diǎn)略有拖尾；只有取樣量為1 g時(shí)，主斑點(diǎn)較集中且明顯，故藥材取樣量采用1 g。

2.3.1.4展開(kāi)劑的選擇分別以對(duì)環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（9∶3.5∶1∶0.5）、環(huán)己烷-三氯甲烷-甲醇-甲酸（9∶3.5∶1∶0.5）、環(huán)己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（12∶3.5∶2.5∶1∶0.5）等展開(kāi)系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（9∶3.5∶1∶0.5）作為展開(kāi)劑時(shí)，展開(kāi)效果較好，斑點(diǎn)集中且分離較好，Rf值適中。

2.3.1.5顯色劑的選擇考察了10%磷鉬酸硫酸乙醇，10%硫酸乙醇溶液、5%香草醛濃硫酸溶液等顯色系統(tǒng)，其中以10%磷鉬酸硫酸乙醇為顯色劑所得色譜圖斑點(diǎn)清晰，穩(wěn)定。

2.3.1.6溫濕度的選擇試驗(yàn)中考察了不同溫濕度對(duì)薄層色譜的影響，結(jié)果表明在室溫（30℃）下，相對(duì)濕度在50%～88%內(nèi)，均可使主斑點(diǎn)分離較好，斑點(diǎn)顯色集中、清晰，且比移值變化不大。

2.3.2薄層鑒別方法取樣品粉末1g，加入乙酸乙酯20ml，超聲處理30min，蒸干濃縮至1ml，照薄層色譜法（《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)［12］附錄26，吸取供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各2 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，在T=30℃，RT=62%條件下，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（9∶3.5∶1∶0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸硫酸乙醇，置于105℃下烘烤，斑點(diǎn)顯色清晰，結(jié)果見(jiàn)圖6。

圖6　空心莧薄層色譜圖

3　檢查項(xiàng)目

3.1浸出物測(cè)定

3.1.1浸出方法的選擇分別考察不同方法（冷浸法及熱浸法）及不同溶劑（水、不同濃度乙醇溶液）對(duì)空心莧浸出物的浸出效果，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　空心莧浸出物方法學(xué)考察（%）

結(jié)果顯示:采用熱浸法，以水為溶劑提取所得浸出物含量最高。

3.1.2樣品測(cè)定按《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部附錄XA水溶性浸出物項(xiàng)下熱浸法［12］550對(duì)15批空心莧進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

3.2水分、總灰分及酸不溶性灰分的測(cè)定按《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部附錄IXH、IXK方法測(cè)定［12］附錄26，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　空心莧水分、總灰分、酸不溶性灰分及浸出物測(cè)定結(jié)果（%）（n=3，RSD＜3%）

表2結(jié)果顯示:空心莧水分為6.32%～12.72%，總灰分為11.55%～21.96%，酸不溶性灰分為0.43%～3.06%，浸出物為31.11%～46.16%。

4　小結(jié)

4.1空心莧的主要鑒別特征為:全草長(zhǎng)短不一，莖節(jié)處簇生白色絨毛或棕褐色須狀根；葉對(duì)生，皺縮卷曲，兩面均有疏生短毛。莖橫切面維管束外韌型，8～15個(gè)；束間形成層內(nèi)方有1～6列厚壁的木化細(xì)胞，與木質(zhì)部外側(cè)的木化細(xì)胞連接成環(huán)狀；髓部寬廣，常裂成空腔；皮層和髓部散在有異形細(xì)胞，內(nèi)含草酸鈣簇晶。全草粉末中可見(jiàn)草酸鈣簇晶、方晶和兩種多細(xì)胞非腺毛。藥材粉末以乙酸乙酯提取，用環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（9∶3.5∶1∶0.5）展開(kāi)，所得斑點(diǎn)清晰，分離度較好。上述鑒別特征明顯、穩(wěn)定，可作為藥材真?zhèn)舞b別的依據(jù)。

4.2根據(jù)15批藥材的測(cè)定結(jié)果，初步擬定空心莧藥材水分不得超過(guò)15%，總灰分低于23%，酸不溶性灰分小于4%，水溶性浸出物含量大于30%。目前對(duì)空心莧的的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究仍處于真?zhèn)舞b定為主，其優(yōu)劣的控制方法尚需進(jìn)一步研究、完善。

4.3文中數(shù)據(jù)顯示總灰分含量很高，考慮到有可能是藥材中泥土、沙石所引起，需進(jìn)行酸不溶性灰分測(cè)定。結(jié)果表明空心莧中含有大量草酸鈣簇和方晶，并非含大量泥土、沙石，表明采集的藥材樣本均合格。因此，為了準(zhǔn)確控制藥材質(zhì)量，確保臨床用藥質(zhì)量，總灰分及酸不溶性灰分的測(cè)定亦具有一定意義。

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（編輯陳明偉）

中圖分類號(hào)：R282.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：2095-4441（2015）02-0071-04

收稿日期:2015-04-20

基金項(xiàng)目:廣西自然科學(xué)基金創(chuàng)新研究團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（編號(hào):2011GXNSFF018006）；《廣西壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（第三卷）》質(zhì)量評(píng)價(jià)與標(biāo)準(zhǔn)研究項(xiàng)目（編號(hào):MZY2013045）

通信作者:蔡毅，E-mail:Caiyi118@163.com