高慧等

[摘要]目的 比較生熟五味子對復(fù)方化學成分的影響，為五味子“生熟異用”臨床合理用藥提供實驗依據(jù)。 方法 采用HPLC法，測定小青龍湯中（含生五味子或酒五味子）五味子醇甲、芍藥苷的含量。 結(jié)果 小青龍湯（含生五味子）中五味子醇甲、芍藥苷的含量分別為0.0524%、0.0152% ，小青龍湯（含酒五味子），五味子醇甲、芍藥苷的含量分別為0.0502%、0.0146% 。 結(jié)論 從化學成分角度能夠驗證五味子“入嗽藥生用”的傳統(tǒng)理論。

[關(guān)鍵詞]五味子；炮制；小青龍湯；化學成分

[中圖分類號] R289 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2015）11-35-03

[Abstract] Objective To provide scientific basis for the research and the clinical applications of "the processed Schisandra chinensis Fruits is different from the raw ones" through comparing the difference about chemical compounds in Xiaoqinglong decoction（contains raw Schisandra chinensis）and Xiaoqinglong decoction （contains processed Schisandra chinensis）. Methods To determine schisandrin and paeoniflorin in Xiaoqinglong decoction（contains raw Schisandra chinensis or wine processed Schisandra chinensis） by HPLC. Results The contents of schisandrin and paeoniflorin in Xiaoqinglong decoction which contain raw Schisandra chinensis were0.0524% and 0.0152%； the contents of schisandrin and paeoniflorin in Xiaoqinglong decoction which contain wine Schisandra chinensis were 0.0502% and 0.0146%. Conclusion Verified the traditional theory "raw Schisandra chinensis should be used in cough" from the chemical compounds of view.

[Key words] Schisandra chinensis； Processed； Xiaoqinglong decoction；Chemical compounds

五味子為木蘭科植物五味子（Schisandra chinensis （Turcz.）Baill.）的干燥成熟果實，主產(chǎn)于遼寧、吉林、黑龍江、河北等地，習稱“北五味子”，五味子酸、甘，溫，歸肺、心、腎經(jīng)，收斂固澀，益氣生津，補腎寧心[1]。傳統(tǒng)理論認為五味子“入補藥熟用，入嗽藥生用”[2]，即五味子“生熟異用”。五味子常見的炮制品種有醋五味子、酒五味子，五味子醋制后能夠增強酸澀收斂之性，酒制后能夠增強益腎固精的作用[3]。關(guān)于五味子炮制的研究，見有炮制工藝、化學成分、藥效學等方面的報道[4-8]。本課題組緊緊圍繞五味子“生熟異用”，開展五味子生熟對比研究[9-10]，從藥效學角度驗證了五味子“入補藥熟用，入嗽藥生用”的傳統(tǒng)理論，并將生熟五味子分別納入復(fù)方小青龍湯，比較了小青龍湯中用生五味子或熟五味子抗過敏性哮喘作用的差異[11]。因生熟五味子在復(fù)方中表現(xiàn)出藥理作用上的差異，推測其

化學成分也一定存在差異，所以本文在前期研究基礎(chǔ)上，選取小青龍湯指標性成分芍藥苷、五味子指標性成分五味子醇甲，采用高效液相色譜法分析指標性成分的含量，為藥理作用的改變尋找依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津LC-10AP液相色譜儀。醫(yī)用超聲清洗器（昆山超聲儀器有限公司），電子天平（Mettler Toledo AG285）。

1.2 試藥

芍藥苷對照品（批號：110736-201438）、五味子醇甲對照品（批號：110857-200709）購自中國藥品生物制品檢定所。水為純水，乙腈為色譜純。

五味子，購自遼寧丹東大梨樹五味子GAP基地；麻黃、芍藥、細辛、干姜、炙甘草、桂枝、法半夏均購自開發(fā)區(qū)保健大藥房，均自行對照2010版《中國藥典》鑒定。

2 實驗方法

2.1 色譜條件

色譜柱ECOSIL120-5-C18柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm）；流動相為甲醇：水（1%異丙醇1%HAC），梯度洗脫條件及檢測波長見表1；流速1.0mL/min；柱溫為室溫，色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取五味子醇甲、芍藥苷對照品，用甲醇溶解，制成混合對照品溶液，濃度分別為0.586mg/mL、0.142mg/mL。

2.3 供試品溶液的制備

取麻黃15g，芍藥15g，細辛5g，生五味子（或酒五味子）10g，干姜10g，炙甘草10g，法半夏15g、桂枝15g加入800mL水，煎煮3次，過濾，濃縮至100mL，精密吸取25mL濾液置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后加入甲醇超聲30min（功率250W，頻率20kHz），過濾，濾液轉(zhuǎn)移至25mL量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，即得。

2.4 方法學考察

2.4.1 標準曲線制備 精密稱取五味子醇甲5mg、芍藥苷1mg，置100mL量瓶中甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取對照品溶液0.25，0.5，0.75，1，2，3mL分別置10mL量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣10?L，測定。以進樣量為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y）繪制標曲，五味子醇甲Y=2.73×106X-4.01×103，線性范圍1.25～150?g/mL，r=0.9999，芍藥苷Y=2.46×106X-2.25×103，線性范圍0.25～30?g/mL，r=0.9999。

2.4.2 精密度試驗 精密吸取對照品溶液連續(xù)進樣5次，依次測定，五味子醇甲、芍藥苷峰面積的RSD為0.24%、0.17%。

2.4.3 重復(fù)性實驗 按“2.3 供試品溶液的制備”的方法，制備6份供試品，按照測定方法測定、計算五味子醇甲、芍藥苷含量，五味子醇甲、芍藥苷含量的RSD分別為0.90%、0.18%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8h進樣，測定五味子醇甲與芍藥苷的峰面積，其峰面積的RSD為0.28%、0.51%，表明供試品在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品6份，精密加入對照品，按“2.3”項下操作，制備成供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行分析，結(jié)果見表2 ～ 表3。

2.5 樣品含量測定

取各樣品，按“2.3”項下操作，制備成供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行分析，記錄峰面積，計算樣品中各成分含量，結(jié)果見表4。

3 討論

復(fù)方是中藥臨床應(yīng)用的主要形式，方劑是中醫(yī)臨床用藥的一大特點，中藥通過配伍組方可起到增效、減毒、緩和藥性或產(chǎn)生新藥效等作用，所以將中藥炮制納入復(fù)方進行研究很有意義[12]。

因?qū)ι煳逦蹲釉趶?fù)方中藥效學研究發(fā)現(xiàn)，小青龍湯中分別用生五味子或制五味子，表現(xiàn)出藥理作用上的差異，含有生五味子的小青龍湯對雞卵白蛋白致敏的哮喘小鼠治療作用優(yōu)于含有制五味子的小青龍湯[11]。本實驗通過化學成分研究表明，含生五味子的小青龍湯中的五味子醇甲、芍藥苷含量都略高于含有酒五味子的小青龍湯。說明五味子炮制后入復(fù)方利于五味子醇甲成分的增加，同時能夠利于煎煮過程中酒五味子與其他藥物相互作用，促進了有效成分（如芍藥苷）的溶出。小青龍湯中以芍藥酸寒五味酸溫而收之，五味子醇甲、芍藥苷分別是藥典規(guī)定的五味子、小青龍湯的指標性成分，其含量的增加能夠從化學成分角度進一步驗證五味子“入嗽藥生用”的傳統(tǒng)理論。

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（收稿日期：2015-03-20）