秦淑美鄒建香

(1.江蘇金湖縣動物疫病預防控制中心,江蘇金湖 211600; 2.江蘇金湖縣動物疫病預防控制中心,江蘇金湖 211600)

鵝源大腸桿菌免疫鵝抗體水平的研究

秦淑美1鄒建香2

(1.江蘇金湖縣動物疫病預防控制中心,江蘇金湖 211600; 2.江蘇金湖縣動物疫病預防控制中心,江蘇金湖 211600)

鵝的各年齡段都易感大腸桿菌病,給鵝的養(yǎng)殖造成很大的損失。本試驗通收集不同血清型的大腸桿菌等量混合滅活后免疫鵝,通過檢測鵝血清中抗體的水平及對同血清型細菌的抵抗能力,尋找預防和控制鵝大腸桿菌病方法。

鵝源大腸桿菌 ;免疫;抗體;抵抗力

大腸桿菌是動物腸道中的常在菌，10～15%的大腸桿菌屬于有致病力的血清型。鵝大腸桿菌病是鵝感染致病性大腸桿菌引起的一種急性或慢性的細菌性傳染病。鵝感染大腸桿菌后，由于其年齡、抵抗力以及大腸桿菌的致病力、感染途徑等不同因素，會產(chǎn)生許多癥狀和病變不同的病。如急性敗血癥、氣囊炎、肝周炎、心包炎、卵黃性腹膜炎、輸卵管炎、眼炎、關節(jié)炎、肉芽腫。

本試驗共搜集6株（編號為1#～6#）來自安徽、江蘇地方的雛鵝、青年鵝、產(chǎn)蛋的母鵝的O1、O2、O6、O39等六株不同血清型大腸桿菌的菌株，將這6菌株分別用液體培養(yǎng)基增殖培養(yǎng)后，再用涂布法固體培養(yǎng)基培養(yǎng)，18h后，收集細菌，分2份，一份加入0.5%福爾馬林搖勻37℃放置72h后離心濃縮后置4℃保存。另一份直接離心濃縮后置4℃保存。

1 材料和方法

1.1 材料

（1）免疫抗原：每ml含滅活細菌數(shù)各株各10億（共60億）的5%Al（OH）3的生理鹽水，100ml。

（2）攻毒液：每ml含活細菌數(shù)各株各20億的的生理鹽水，50ml。

（3）檢測抗原：每株分別配成滅活細菌數(shù)為60億/ml作為檢測抗原，30ml。

（4）18日齡的鵝18只。

1.2 方法

（1）第1d，采取18只2ml 18日齡的鵝血，分離血清，檢測血清中檢測抗原的抗體。檢測抗體的方法為：用U型96孔微量板分別加入30μl的生理鹽水，倍比稀釋待檢血清至第11孔，最后1孔為生理鹽水對照，每份待檢血清各稀釋6排，每排分別加入30μl1#～6#檢測抗原。震蕩混勻抗原血清后，用封板膜封板，置37℃恒溫箱，24h后觀察結果。從出現(xiàn)有凝集現(xiàn)象的孔做為有抗體效價的依據(jù)。同時設置陽性血清、陰性血清和生理鹽水對照。

（2）用免疫抗原肌肉注射12只18日齡的鵝，每只鵝1ml，其余6只作為攻毒對照和空白對照。（3）第6d，采2ml鵝血，分離血清，檢測各抗原的抗體。（4）第10d，采2ml鵝血，分離血清，檢測各抗原的抗體。（5）第10d下午配攻毒液，攻毒，攻毒情況如下：

是否免疫是否攻毒量(m1)0.51.00.50數(shù)量(只)6633編號1～67～1213～1516～18

（6）第11d，觀察鵝群整體狀況，包括死亡情況，精神狀態(tài)，采食、飲水，是否拉稀等糞便的情況，運動及羽毛的整潔情況。及時做好記錄并對死亡鵝進行剖解及細菌分離、鑒定。

（7）第12～15d，繼續(xù)觀察鵝群狀況并及時做好記錄。

（8）第16d，采2ml鵝血，分離血清，檢測各抗原的抗體。

3 結果

（1）第1d，18日齡的鵝血清用檢測抗原檢測均沒有1#～6#菌株的抗體：

（2）第6d，接種1周后的鵝血清檢測的1#～6#菌株抗體，12只鵝明細情況如下：

1#（2，2，2，1，2，2，1，4，3，2，3，3）log2，平均抗體滴度2.3 log2；2#（2，2，4，3，2，3，1，2，2，2，2，2）log2，平均抗體滴度2.3log2；

3#（2，3，2，2，3，2，2，3，2，2，2，2），平均抗體滴度為2.3log2；

4#（2，2，1，1，2，2，2，2，2，1，2，2）log2，平均抗體滴度為1.8 log2，

5#（2，3，1，1，2，2，2，3，2，3，2，3）log2，平均抗體滴度為2.2log2；

6#（2，3，2，2，3，3，3，3，3，2，3，2）log2，平均抗體滴度為2.6log2。

（3）第10d，接種10d后，18只鵝血清檢測1#～6#菌株抗體，12只鵝明細情況如下：

1#（4，3，3，4，3，4，3，4，3，3，2，3）log2，平均抗體滴度3.3 log2；2#（3，3，3，3，3，4，4，5，4，4，3，3）log2，平均抗體滴度3.5log2；

3#（3，4，3，3，5，3，4，4，3，3，3，4）log2，平均抗體滴度為3.5log2；

4#（2，3，3，3，3，3，3，3，3，3，2，4）log2，平均抗體滴度為2.9log2，5#（4，3，4，3，3，4，3，3，4，4，4，3）log2，平均抗體滴度為3.5log2；6#（3，3，4，4，4，4，3，3，4，3，4，4）log2，平均抗體滴度為3.6log2。

（4）攻毒1d后，2只攻毒對照的雛鵝死亡。剖檢，各臟器呈敗血癥狀，血液不凝結。心包積液，心包膜增厚，肝、氣囊表面有滲出物。肝、脾腫大，腸道無明顯病變。用麥康凱分離肝、脾、血液，可見粉紅色菌落。分離得到的細菌進行生化試驗和血清學試驗。

（5）其余攻毒鵝精神狀態(tài)沉郁，羽毛松亂，采食量明顯下降，臥地不動，糞便呈白色，較稀薄，泄殖腔下方羽毛潮濕、污穢、粘連。12只免疫鵝中，攻毒1ml的6只鵝精神狀態(tài)及采食量均較攻毒0.5ml的6只鵝差。空白對照的3只鵝精神狀態(tài)、飲食均正常。

（6）第12～15d，攻毒的12只免疫鵝逐漸恢復正常采食量和精神狀態(tài)，生長發(fā)育與空白對照一致。攻毒對照組的1只鵝，生長緩慢，較其他鵝瘦小，采食量少，喜臥，精神狀態(tài)差?？瞻讓φ盏?只鵝精神狀態(tài)、飲食正常。

（7）第16d，免疫、攻毒的12只鵝及3只空白對照在確認發(fā)育正常后，采血淘汰。鵝血清檢測1#-6#菌株抗體，明細如下：

1#（5，3，6，4，4，5，4，4，3，5，4，5）log2，平均抗體滴度4.3 log2；

2#（4，5，5，5，5，5，4，6，4，5，5，5）log2，平均抗體滴度4.8log2；

3#（5，5，5，4，5，5，5，5，3，4，5，5）log2，平均抗體滴度為4.7log2；

4#（3，4，4，4，5，5，4，4，3，4，5，5）log2，平均抗體滴度為4.2log2，5#（4，4，5，4，6，5，4，6，4，5，4，6）log2，平均抗體滴度為4.8log2；6#（5，6，4，4，4，6，4，5，5，6，4，5）log2，平均抗體滴度為4.8log2。

（8）攻毒對照的1只鵝撲殺，內(nèi)臟無明顯病變，用麥康凱培養(yǎng)基分離培養(yǎng)肝、脾、血，無細菌生長。

4 討論與結論

本試驗通過收集不同血清型菌株的細菌進行滅活后，給雛鵝接種。接種滅活細菌6d后，鵝的體內(nèi)已產(chǎn)生這幾種血清型細菌的免疫抗體。鵝血清中各菌株抗體水平在一定時間里，呈現(xiàn)上升趨勢。而攻毒對照組死亡鵝體內(nèi)器官和血液里分離到不同血清型的大腸桿菌，細菌在未免疫鵝體內(nèi)快速繁殖，釋放毒素，引起敗血癥，導致鵝死亡。

本試驗等量混合制成的多價的抗原注射試驗鵝，10d后就可保護加倍量活細菌的攻擊，可有效的防止相同血清型大腸桿菌病的發(fā)生。免疫鵝攻毒試驗后，這幾種血清型的大腸桿菌抗體在鵝體內(nèi)再次上升，在一定時間內(nèi)能有效保護鵝群，抵抗相同或有交叉抗原的大腸桿菌再次感染。本試驗不使用抗生素，可防止大腸桿菌耐藥菌株的產(chǎn)生。

[1] 王永坤.水禽病診斷與防治手冊[M].上?？茖W技術出版社，2002.