陸娜　王偉科　宋吉玲等

摘要：比較14個杏鮑菇菌株的菌絲生長速度、產(chǎn)量、農(nóng)藝性狀、拮抗性和酯酶同工酶酶譜，結(jié)果表明，14個菌株間存在遺傳差異，大致可以分為5大類群，菌株P(guān)14、P2、P1、P6、P7、P8和P4為第1類群，菌株P(guān)11為第2類群，菌株P(guān)13、P10、P5為第3類群，菌株P(guān)12和P3為第4類群，菌株P(guān)9為第5類群；拮抗試驗和同工酶試驗結(jié)果基本吻合。

關(guān)鍵詞：桑枝；杏鮑菇；生物學(xué)特性；遺傳差異；同工酶

中圖分類號： S646.01 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1002-1302（2015）03-0231-03

食用菌產(chǎn)業(yè)是浙江省十大特色優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)之一，也是杭州市新興發(fā)展的一個朝陽產(chǎn)業(yè)。近年來，杭州市珍稀食用菌產(chǎn)業(yè)呈現(xiàn)穩(wěn)定快速發(fā)展態(tài)勢，已成為杭州都市農(nóng)業(yè)發(fā)展新的亮點。珍稀食用菌杏鮑菇是一種品質(zhì)極佳的大型肉質(zhì)傘菌，營養(yǎng)價值高、菇肉肥厚、質(zhì)地脆嫩，具有淡淡的杏仁香味，保質(zhì)期長，深受廣大消費者喜愛，產(chǎn)品在市場上供不應(yīng)求，且價格基本穩(wěn)定在16～20元/kg，比普通平菇等高出4～5倍，商品價值高。目前，杏鮑菇在杭州建德、淳安、臨安等地有規(guī)模種植，年栽培達(dá)200多萬袋，并呈逐年擴大的趨勢。當(dāng)前，杭州市種植杏鮑菇主要存在的問題有：一是杏鮑菇品種混雜，由于品系不清，菇農(nóng)每年都需要反復(fù)引種、試種，不敢大面積栽培，經(jīng)常耽誤生產(chǎn)季節(jié)；二是栽培管理存在不足，造成產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，影響生產(chǎn)效益。筆者通過引進(jìn)各地杏鮑菇優(yōu)良菌株，采用桑枝立體栽培方法進(jìn)行品比試驗，研究菌株的遺傳差異，以獲得適宜本地栽培的杏鮑菇菌株，為杭州地區(qū)桑枝杏鮑菇栽培提供有益幫助。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

14個杏鮑菇菌株，從國內(nèi)有代表性的科研單位和基地引進(jìn)。

1.2 培養(yǎng)基

母種培養(yǎng)基（馬鈴薯綜合培養(yǎng)基）：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，蛋白胨5 g，酵母膏1 g，水1 000 mL，pH值為5.5；原種培養(yǎng)基：棉籽殼78%，麩皮20%，石灰1%，石膏1%；栽培料配方：桑枝17%，木屑20%，棉籽殼37%，麩皮24%，糖1%，輕質(zhì)CaCO3 1%，含水量65%。

1.3 杏鮑菇不同菌株菌絲的長勢試驗

每個杏鮑菇菌株接種5個750 mL玻璃瓶，培養(yǎng)基配方為原種培養(yǎng)基，每瓶含干料300 g；從同步培養(yǎng)的杏鮑菇母種中取約3 cm×2 cm的菌塊接種于玻璃瓶中央，置于26 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫培養(yǎng)[1]；當(dāng)菌絲鋪滿整個瓶面時開始測量，定期記錄，當(dāng)有菌株菌絲長滿玻璃瓶時，試驗結(jié)束。通過記錄菌絲生長的長度和時間，計算菌絲生長速度，同時觀察菌絲形態(tài)及其長勢。

1.4 杏鮑菇不同菌株出菇試驗

1.4.1 菌包制作 采用用菌棒式栽培，每袋干料為0.5 kg，每個配方100棒。將培養(yǎng)料裝到袋內(nèi)，松緊適度；裝料后用線扎實，在火焰上熔封；用特制打孔器，在塑料袋的一側(cè)等距離打4個孔，洞徑1.5 cm，孔深2 cm，用膠布貼在接種孔上[2]。

1.4.2 菌包消毒與接種 采用高壓滅菌鍋進(jìn)行滅菌，料袋分層放置，保持壓力0.15 MPa，121 ℃、滅菌2 h。接種前進(jìn)行消毒處理，料溫降至30 ℃時，將袋料及杏鮑菇原種放入接種室內(nèi)，無菌接種臺采用紫外線進(jìn)行消毒殺菌；接種時揭開膠布一角，從原種瓶中取1勺原種培入穴中，貼好膠布。

1.4.3 菌絲培養(yǎng) 接種后，在培養(yǎng)室將菌袋袋口朝同一方向橫放上堆，堆高6～8層；培養(yǎng)室在堆放菌袋前采用石灰進(jìn)行衛(wèi)生消毒殺菌，堆放菌袋后培養(yǎng)室溫度控制在26～28 ℃，空氣相對濕度控制在65%～70%，培養(yǎng)環(huán)境基本黑暗，加強通風(fēng)管理；培養(yǎng)室培養(yǎng)30 d左右，接種后1周檢查1次，及時剔除被污染的栽培袋，觀察記錄菌絲長勢。

1.4.4 出菇管理 菌袋袋口朝上豎排放在床架上，將菌袋上膠布撕下作為出菇口，溫度控制在15～18 ℃為宜，當(dāng)原基出現(xiàn)并達(dá)4～5 cm時，菇棚內(nèi)相對濕度控制在80%～90%為宜，不能直接向子實體噴水。

1.4.5 采收與記錄 當(dāng)杏鮑菇子實體成熟、菌蓋卷邊未平展時即可采收，出菇后分潮次對產(chǎn)量進(jìn)行記錄，并對杏鮑菇子實體的形態(tài)進(jìn)行觀察。

1.5 杏鮑菇不同菌株菌絲的拮抗試驗

2個菌種為1組，接種于含母種培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上，25 ℃避光培養(yǎng)10 d。每個處理重復(fù)3次，觀察各菌株間是否有拮抗反應(yīng)，是否形成明顯的拮抗線。

1.6 杏鮑菇不同菌株酯酶同工酶比較

采用標(biāo)準(zhǔn)NY/T 1097—2006《食用菌菌種真實性鑒定 酯酶同工酶電泳法》中規(guī)定的方法[3]進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 杏鮑菇不同菌株菌絲的長勢

根據(jù)觀察，各杏鮑菇菌株的菌絲生長良好，生長均勻整齊，菌絲潔白。由表1可見，杏鮑菇P5菌絲的生長速度為0505 cm/d，是長勢最好的菌株，其生長速度與其他菌株存在一定差異；杏鮑菇P12、P9、P11的菌絲生長速度次之，分別為0.503、0.491、0.491 cm/d；生長相對較慢的菌株是杏鮑菇P13和P4，其菌絲生長速度分別為0.405、0.431 cm/d，長勢較差。

2.2 杏鮑菇不同菌株的出菇情況

由表2可見，各菌株間的產(chǎn)量有明顯差別，其中，產(chǎn)量最高的菌株為杏鮑菇P14，產(chǎn)量為0.32 kg/棒，按照每棒原料（干料）0.5 kg計算，生物學(xué)轉(zhuǎn)化率達(dá)到65%；其次為杏鮑菇P3、P12，產(chǎn)量分別為0.31、0.29 kg/棒，產(chǎn)量最低的為杏鮑菇P13，產(chǎn)量為0.18 kg/棒。通過觀察，杏鮑菇P13、P1和P2菇型不整齊，有畸形菇出現(xiàn)。從產(chǎn)量來看，P3、P14、P12為優(yōu)良菌株，可以運用到桑枝栽培杏鮑菇生產(chǎn)中去。

2.3 杏鮑菇不同菌株的農(nóng)藝性狀比較endprint

由表3可見，14個杏鮑菇菌株子實體形狀大致分為圓柱狀（棍棒形）、近圓柱狀（圓錐形）、保齡球狀、近保齡球狀（鼓形）4類；菌株P(guān)9的菌蓋直徑最小，為3.95 cm，其次是P6、P3，菌株P(guān)11菌蓋直徑最大，為7.88 cm；菌株P(guān)9的菌柄最小，為2.86 cm，其次是P1、P10，菌株P(guān)7的菌柄最大，為 6.52 cm；菌株P(guān)10的菌柄長度最小，為5.08 cm，其次P9、P12，菌株P(guān)5的菌柄最長，為10.20 cm。

2.4 杏鮑菇不同菌株間的拮抗試驗

由表4、圖1可見，在91個試驗組中，有拮抗現(xiàn)象的為66組，拮抗現(xiàn)象不明顯或無拮抗現(xiàn)象的為25組。

2.5 杏鮑菇不同菌株酯酶同工酶比較

由圖2可見，14個菌株具有恒定的譜帶數(shù)，共檢測出18條譜帶，Rf 5.5與Rf 5.8是多數(shù)菌株共同擁有、活性很強的酶帶，可認(rèn)為其是表達(dá)杏鮑菇基本特征的基礎(chǔ)酶帶；菌株間在酶帶活性、數(shù)量和Rf值上存在不同程度的差異； 菌株P(guān)1、P2和P14的酶帶位置相同，只是在著色強度上略有差異；菌株P(guān)6、P7、P4與P1等酶帶數(shù)相同，但是多了Rf 5.0和Rf 1.0特征帶；菌株P(guān)12比 P3多Rf 2.8酶帶；菌株P(guān)5、P10和P13酶帶位置基本一樣，但在Rf 2.7、Rf 3.3、 Rf 3.6這3條酶帶上稍有不同；菌株P(guān)9和P11相對其他品種而言，酶帶明顯較少，其中，Rf 0.2是P11的特征酶帶。

由圖3可見，14個菌株在74%相似水平上可以分為五大類，第1類群為菌株P(guān)14、P2、P1、P6、P7、P8和P4，第2類群為菌株P(guān)11，第3類群為P13、P10、P5，第4類群為P12和P3，第5類群為P9，其中第1類群所占比例較大，占50%；菌株P(guān)14、P2、P1、P6、P7和P8的相似系數(shù)為1，結(jié)合拮抗反應(yīng)，說明P14、P2、P1、P6、P7與P8極有可能為同一菌株。

3 結(jié)論

試驗結(jié)果表明，杏鮑菇菌株P(guān)5的菌絲生長速度最快，與其他菌株菌絲的生長速度之間存在差異， 其次是杏鮑菇菌株P(guān)12、P9、P11， 生長相對最慢的是菌株P(guān)13和P4； 各菌株間產(chǎn)量有著明顯的差別，其中，產(chǎn)量最高的菌株P(guān)14，其次為菌株P(guān)3、P12和P11，產(chǎn)量最低的是菌株P(guān)13，菌株P(guān)13、P1和P2菇型不整齊，出現(xiàn)畸形菇；從產(chǎn)量來看，菌株P(guān)3、P14、P12為優(yōu)良菌株，可以推薦應(yīng)用到桑枝栽培杏鮑菇生產(chǎn)中去。

拮抗試驗是鑒定菌株間遺傳差異的傳統(tǒng)方法，菌絲之間的拮抗反應(yīng)是菌株間不同遺傳特性的重要表現(xiàn)，可表明不同菌株分屬于不同親和群。從測定結(jié)果看，14個杏鮑菇菌株生物學(xué)特性表現(xiàn)出一定差異，拮抗現(xiàn)象比較明顯。同工酶酶譜可作為鑒定物種，研究分類、進(jìn)化與變異的重要指標(biāo)。試驗結(jié)果表明，杏鮑菇菌株酯酶同工酶酶譜豐富、酶帶活性強、帶型各異，這說明編碼同工酶的基因數(shù)量多，有極豐富的遺傳多態(tài)性。

綜合杏鮑菇菌株生物學(xué)特性、出菇試驗、拮抗試驗、同工酶試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，拮抗試驗和同工酶試驗結(jié)果基本吻合，14個杏鮑菇菌株大致可以分為五大類群。菌株的菌絲生長速度和產(chǎn)量沒有表現(xiàn)出各類群特點，這是由于菌絲生長速度和產(chǎn)量易受環(huán)境條件和基因顯隱性的影響。

參考文獻(xiàn)：

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[2]黃志龍，肖淑霞，上官舟建. 杏鮑菇優(yōu)良菌株篩選及配套標(biāo)準(zhǔn)化栽培技術(shù)[J]. 食用菌，2008，30（2）：25-27.

[3]黃晨陽，張金霞，陳 強，等. NY/T 1097—2006 食用菌菌種真實性鑒定酯酶同工酶電泳法[S]. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.endprint