歐陽水長

炎性因子對兒童原發(fā)性腎病綜合征激素抵抗中的意義

歐陽水長

目的 分析炎性因子白細(xì)胞介素2（IL-2）、IL-12、IL-13在兒童原發(fā)性腎病綜合征激素抵抗中的表達(dá)意義。方法 選取原發(fā)性腎病綜合征患兒60例，根據(jù)糖皮質(zhì)激素治療情況分為激素耐藥性腎病綜合征(SRNS)組和激素敏感性腎病綜合征(SSNS)組，選取同期體檢的健康兒童40例，對3組兒童IL-2、IL-12、IL-13水平及其表達(dá)進(jìn)行檢測。結(jié)果 3組兒童血清中IL-2、IL-12、IL-13水平分別為：正常兒童（98.30±15.60）pg/mL、（6.45±3.08）pg/mL、（47.24±2.85）pg/mL，SSNS組（68.54±6.38）pg/mL、（16.74±3.87）pg/mL、（49.31±3.21）pg/mL，SRNS組（68.32±5.69）pg/mL、（23.45±4.01）pg/mL、（52.29±3.36）pg/mL。SSNS組與SRNS組血清中IL-2均顯著低于正常兒童，且2組間對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，2組IL-12、IL-13均顯著高于正常兒童（P＜0.05），且SRNS組血清中IL-12、IL-13均顯著高于SSNS組（P＜0.05）。3組兒童PBMC IL-2mRNA、PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA表達(dá)情況：正常兒童（0.32±0.03）、（0.76±0.18）、（0.35±0.06），SSNS組（0.28±0.04）、（0.85±0.13）、（0.47±0.03），SRNS組（0.27±0.02）、（0.93±0.17）、（0.51±0.05）。SRNS組、SSNS組PBMC IL-2mRNA顯著低于對照組且2組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，2組PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA表達(dá)表達(dá)均顯著高于正常兒童（P＜0.05），且SRNS組各指標(biāo)顯著高于SSNS組（P＜0.05）。結(jié)論 原發(fā)性腎病綜合征患兒均有炎性因子IL-2降低、IL-12、IL-13水平及其表達(dá)升高表現(xiàn)，且IL-12、IL-13水平及其表達(dá)升高和原發(fā)性腎病綜合征激素抵抗的發(fā)生有密切關(guān)系。

原發(fā)性腎病綜合征；激素抵抗；炎性因子；表達(dá)

兒童原發(fā)性腎病綜合征(PNS)是較為常見的一種泌尿系統(tǒng)疾病，通常需采用糖皮質(zhì)激素(GC)加以治療，而部分患兒在GC質(zhì)量時(shí)表現(xiàn)為激素抵抗[1-2]，也即激素耐藥性腎病綜合征(SRNS)，這不僅會(huì)影響到疾病治療效果，同時(shí)也可導(dǎo)致患兒病情逐步進(jìn)展，因此近年來PNS激素抵抗已引起了高度重視[3]。已有研究表明，白細(xì)胞介素等炎性因子再腎小球疾病發(fā)病急進(jìn)展中有重要作用[4]，然而其與腎病綜合征患兒激素抵抗之間是否存在相關(guān)性并不清楚。本研究通過對60例PNS患兒經(jīng)GC治療后是否出現(xiàn)激素抵抗進(jìn)行分組，同時(shí)與健康兒童對比白細(xì)胞介素2（IL-2）、IL-12、IL-13水平，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年6～2013年10月瑞金市人民醫(yī)院收治PNS患兒共60例作為研究對象，患兒均為初發(fā)或之前未用過激素及其他免疫抑制劑，排除繼發(fā)性因素,且無任何并發(fā)癥，且均經(jīng)腎臟穿刺活檢確診為PNS。PNS患兒均采用正規(guī)GC治療8周后,根據(jù)治療效果分別分為激素敏感性腎病綜合征(SSNS)組及SRNS組。SSNS組36例患兒男20例，女16例，年齡2～11歲，平均（6.9±1.8）歲；病程12d～7年，平均（1.8±1.2）年；SRNS組24例患兒男15例，女9例，年齡1.8～12歲，平均（6.7±1.6）歲；病程13d～6年，平均（1.9±1.4）年；另選擇40例健康體檢兒童作為健康對照組，男22例，女18例，年齡1.6～12歲，平均（6.6±1.6）歲。各組患者臨床資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法 采集3組兒童清晨空腹?fàn)顟B(tài)下的靜脈血液3mL與外周血3mL，分裝在2個(gè)試管中，均在3000r/min速度下進(jìn)行5min離心，采集上清液并在-70℃冰箱中保存?zhèn)溆?。利用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)試劑盒（上海森雄試劑盒公司制造）對患兒靜脈血血清中IL-2、IL-12、IL-13進(jìn)行檢測。采用泛影葡胺-聚蔗糖法分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）并進(jìn)行培養(yǎng)，利用半定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測PBMC IL-2mRNA、IL-12mRNA、IL-13mRNA表達(dá)情況。RT應(yīng)用Promega公司所制逆轉(zhuǎn)錄試劑盒及Poly A引物，PCR采用上海生工公司試劑盒，自主設(shè)計(jì)引物序列病采用PE480型擴(kuò)增儀展開檢測。

1.3 觀察指標(biāo) 記錄3組兒童血清中IL-2、IL-12、IL-13表達(dá)水平及其PBMC IL-2mRNA、PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 17.0分析數(shù)據(jù)，以“x±s”表示計(jì)量資料，計(jì)量數(shù)據(jù)對比采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)對比采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組兒童血清中 IL-2、IL-12、IL-13表達(dá)情況SSNS組與SRNS組血清中IL-2均顯著低于正常兒童（SSNS組與正常兒童對比，t=3.5410，P=0.0205；SRNS組與正常兒童對比，t=3.8842，P=0.0200），且2組間對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，血清中IL-12、IL-13均顯著高于正常兒童（IL-12：SSNS組與正常兒童對比，t=2.6638，P=0.0362；SRNS組與正常兒童對比，t=6.7451，P=0.0008；IL-13：SSNS組與正常兒童對比，t=1.9325，P=0.0387；SRNS組與正常兒童對比，t=3.8021，P=0.0224），且SRNS組血清中IL-12、IL-13均顯著高于SSNS組（P＜0.05）。見表1。

表1 3組兒童血清中IL-2、IL-12、IL-13水平比較（x±s，pg/mL）

2.2 3組兒童 PBMC IL-2mRNA、PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA表達(dá)情況 SSNS組與SRNS組患兒PBMC IL-2mRNA顯著低于正常兒童（SSNS組與正常兒童對比，t=2.8850，P=0.0.308；SRNS組與正常兒童對比，t=2.3302，P=0.0395），PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA表達(dá)水平均顯著高于對照組（IL-12mRNA：SSNS組與正常兒童對比，t=3.6620，P=0.0361；SRNS組與正常兒童對比，t=5.2684，P=0.0060；IL-13mRNA：SSNS組與正常兒童對比，t=4.0087，P=0.0105；SRNS組與正常兒童對比，t=3.2208，P=0.0387），2組PBMC IL-2mRNA差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，SRNS組患兒PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA表達(dá)水平顯著高于SSNS組（P＜0.05）。見表2。

表2 3組兒童PBMC IL-2mRNA、PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA表達(dá)情況（x±s）

3 討論

GC作為PNS最重要和首選的治療藥物在臨床上使用已逾半個(gè)多世紀(jì)。根據(jù)對GC的反應(yīng),PNS臨床上分為SSNS和SRNS[5]。盡管大多數(shù)PNS對GC敏感而預(yù)后較好;但仍有約20%表現(xiàn)為SRNS預(yù)后較差[6]。PNS發(fā)展與轉(zhuǎn)歸在很大程度上取決于患者對GC治療敏感或耐藥程度,SRNS是引起患者終末期腎臟疾病ESRD的主要原因之一。因此對于腎病綜合征耐藥機(jī)制的研究一直是腎臟病領(lǐng)域的熱點(diǎn)問題。

近年來研究顯示，SRNS患兒存在IL及其受體等一些免疫指標(biāo)的改變[7]。為探討炎性因子在INS激素抵抗中的意義，筆者對60例PNS患兒與40例正常兒童血清IL-2、IL-12、IL-13水平與PBMC IL-2mRNA、PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA表達(dá)情況展開分析。IL-2是Th1類細(xì)胞因子，為免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中主要細(xì)胞因子，可對諸多免疫細(xì)胞加以激活，有較高的免疫效應(yīng)及應(yīng)答，同時(shí)可誘導(dǎo)細(xì)胞因子等諸多免疫活性物質(zhì)的生成，經(jīng)復(fù)雜免疫調(diào)節(jié)作用，可促使人體免疫狀態(tài)得到改善。在本研究中SSNS組與SRNS組血清中IL-2、PBMC IL-2mRNA均顯著低于正常兒童，說明IL-2表達(dá)減少和PNS發(fā)病之間有一定聯(lián)系。同時(shí)SRNS組、SSNS組IL-2及其表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，從中無法推斷IL-2是否和PNS激素抵抗之間是否有關(guān)。IL-13是由活化Th2細(xì)胞生成，有免疫調(diào)節(jié)與免疫抑制作用，已有研究發(fā)現(xiàn)腎病患兒B細(xì)胞表達(dá)IL-13R升高，最終發(fā)現(xiàn)腎病患兒IgE、IgG4過度增生和IL-13之間有密切聯(lián)系[8]。IL-12屬于另一種重要細(xì)胞因子，對于Th1/Th2分化有重要調(diào)控作用，有研究顯示活動(dòng)性狼瘡腎炎患者有IL-12mRNA過度表達(dá)現(xiàn)象[9]。本研究結(jié)果顯示，SRNS組、SSNS組IL-12、IL-13及PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA均顯著高于正常兒童，且SRNS組血清中IL-12、IL-13及SRNS組、SSNS組均顯著高于SSNS組。從中可以看出，IL-12、IL-13及其表達(dá)與PNS的發(fā)病密切相關(guān)，同時(shí)二者表達(dá)水平升高是造成PNS激素抵抗的重要原因。

綜上所述，PNS患兒均有炎性因子IL-2降低、IL-12、IL-13水平及其表達(dá)升高表現(xiàn)，且IL-12、IL-13水平及其表達(dá)升高與PNS激素抵抗的發(fā)生有密切關(guān)系。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2015.26.035

江西 342500 瑞金市人民醫(yī)院兒科 （歐陽水長）