李青 夏明萬 雷源標(biāo)

腦脊液單核細胞內(nèi)結(jié)核抗原檢測對結(jié)核性腦膜炎早期診斷的意義

李青 夏明萬 雷源標(biāo)

目的 研究腦脊液單核細胞內(nèi)結(jié)核抗原檢測對于結(jié)核性腦膜炎的早期診斷價值。方法 選擇58例結(jié)核性腦膜炎患者作為觀察組，選擇本院同期非結(jié)核性腦膜炎患者58例作為對照組，取2組的腦脊液標(biāo)本進行腦脊液細胞學(xué)檢查，比較2組的檢查結(jié)果。結(jié)果 觀察組的中性粒細胞、激活單核細胞以及淋巴樣細胞均較對照組顯著升高（P＜0.05）；觀察組的腦脊液單核細胞中具有結(jié)核菌素抗原，檢查陽性率為82.8%（48/58），顯著高于對照組的1.7%（1/58）（P＜0.05）。結(jié)論 腦脊液單核細胞中結(jié)核抗原的檢測有利于早期診斷結(jié)核性腦膜炎。

腦脊液；結(jié)核性腦膜炎；結(jié)核菌素抗原；診斷

結(jié)核性腦膜炎是一種常見結(jié)核病，占所有結(jié)核病的7%～10%。結(jié)核性腦膜炎主要是由于結(jié)核桿菌所致中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病，以腦膜感染最為常見[1]。本病具有較高的致殘率以及致死率，早期診斷和治療直接影響患者臨床預(yù)后。但由于結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液（CSF）中的結(jié)核桿菌數(shù)量比較少，應(yīng)用腦脊液涂片抗酸染色檢查的陽性率僅為10%左右[2]，且培養(yǎng)結(jié)核菌的時間較長，陽性率僅為20%～30%，臨床診斷尤其是早期診斷難度較大。因此，尋找一種準(zhǔn)確可靠的早期診斷方法至關(guān)重要。本研究分析了腦脊液單核細胞中結(jié)核抗原檢測對于早期診斷結(jié)核性腦膜炎的價值，旨在為臨床診斷提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年1月～2014年5月郴州市第一人民醫(yī)院收治的結(jié)核性腦膜炎患者58例作為觀察組，均符合Ahuja等[3]的診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中，男34例，女24例，年齡3～80歲，平均（33.5±15.6）歲；48例單純結(jié)核性腦膜炎，10例結(jié)核性腦膜炎合并顱外結(jié)核，細胞數(shù)在（30～1200）×106/L。經(jīng)腦部CT檢查顯示，9例CT異常，其中，3例為腦積水，2例為腦梗死，3例腦膜增厚強化，1例基底池滲出；經(jīng)MRI平掃顯示，20例異常。經(jīng)革蘭染色以及墨汁染色均呈陰性。選擇本院同期住院的非結(jié)核性腦膜炎患者58例作為對照組，其中，男32例，女26例，年齡5～82歲，平均（33.7±15.9）歲。其中，15例為化膿性腦膜炎，33例為病毒性腦膜炎，6例為新型隱球菌性腦膜炎，4例為單純皰疹病毒性腦炎。經(jīng)MRI平掃顯示8例異常，其中，5例為炎癥改變，3例為腦膜增厚強化。2組的年齡、性別比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法 留取腦脊液標(biāo)本進行常規(guī)腦脊液檢查、生化檢查以及細胞學(xué)檢查，同時進行墨汁染色以及革蘭染色。取腦脊液3mL，常規(guī)沉淀后，向每個腦脊液沉淀器中滴入腦脊液0.5mL，待水分完全吸干以后，取出其中一玻片作瑞氏染色，在顯微鏡下作有核細胞技術(shù)以及分類。對2張玻片作熒光染色，另1張作為陰性對照。取存在沉淀細胞的玻片放置到含有4℃冷丙酮中進行固定處理10min，然后采用0.05mol/L TBS-T緩沖液進行沖洗，5min/次，連續(xù)沖洗3次。然后將其轉(zhuǎn)移至含有3%羊血清的TBS中進行孵育處理30min，然后再次采用TBS-T緩沖液進行沖洗3次。完成沖洗后將其沖洗，然后滴加1∶200稀釋的抗兔結(jié)核抗體IgG，在4℃冰箱中進行孵育過夜。然后以濾紙將多余一抗體吸干，予以滴加經(jīng)熒光素標(biāo)記以后的1∶200稀釋羊抗兔IgG，在37℃條件下孵育30min。將玻片取出，然后以TBS-T緩沖液進行沖洗3次，5min/次，將水分吸干以后，以50%的緩沖甘油進行封片，在熒光顯微鏡下進行觀察。采用TBS緩沖液代替一抗作為陰性對照，以單核細胞胞漿染色表示陽性。

1.3 觀察指標(biāo) 腦脊液細胞學(xué)檢查指標(biāo)主要包括中性粒細胞、激活單核細胞、淋巴樣細胞、單核細胞以及嗜酸性粒細胞等；動態(tài)檢測腦脊液單核細胞內(nèi)結(jié)核抗原。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS18.0分析數(shù)據(jù)。正態(tài)計量資料以“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)（n）表示，組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組腦脊液異常檢出率比較 觀察組的中性粒細胞、轉(zhuǎn)移淋細胞、淋巴樣細胞以及激活單細胞檢出率均顯著高于對照組（P＜0.05），2組的單核細胞以及嗜酸細胞檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)應(yīng)用。見表1。

表1 2組腦膜炎患者腦脊液異常檢出率比較[n(%)]

2.2 2組腦脊液單核細胞中結(jié)核抗原的檢測結(jié)果比較 2組58例患者首次均接受檢查，觀察組第1次檢查有48例陽性，對照組僅1例陽性；觀察組56例接受第2次檢查，對照組43例陰性，第2次檢查后觀察組47例陽性，對照組無陽性病例；觀察組29例接受第3次檢查，對照組24例陰性，第3次檢查觀察組23例陽性。2組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表2。以及特異性并不高[7]。本研究以免疫熒光法進行腦脊液單核細胞中結(jié)核抗原的檢測，結(jié)果顯示，在結(jié)核性腦膜炎患者中，早期檢查腦脊液即可檢出單核細胞中的結(jié)核抗原，且單核細胞多表現(xiàn)出較強的胞質(zhì)染色，經(jīng)多次檢測后仍然持續(xù)陽性，表明結(jié)核菌能夠進入到單核細胞內(nèi)并且存活[8]。當(dāng)結(jié)核菌進入到細胞中后，在發(fā)生抗原呈遞以及體液、細胞免疫之前可完成早期診斷[9]。本研究結(jié)果顯示，結(jié)核性腦膜炎病患者的中性粒細胞、轉(zhuǎn)移淋細胞、淋巴樣細胞以及激活單細胞檢出率均較對照組顯著提高（P＜0.05）。腦脊液單核細胞中結(jié)核抗原檢測結(jié)果顯示，觀察組首次檢測陽性率為82.8%，較對照組的1.7%顯著提高（P＜0.05）。隨著時間的推移，對照組無陽性病例，而觀察組仍持續(xù)表現(xiàn)為較高的陽性率。認為腦脊液單核細胞中的結(jié)核抗原檢測對于結(jié)核性腦膜炎的早期診斷具有重要意義，且可多作為結(jié)核性腦膜炎的動態(tài)監(jiān)測指標(biāo)。

表2 2組腦膜炎患者腦脊液單核細胞中結(jié)核抗原的檢測結(jié)果比較（n）

綜上所述，腦脊液單核細胞內(nèi)結(jié)核抗原檢測對于結(jié)核性腦膜炎的早期診斷與鑒別具有重要意義。

[1] 何俊瑛，劉士甫，朱艷霞，等.腦脊液單核細胞內(nèi)ESAT-6檢測對結(jié)核性腦膜炎的診斷意義[J].腦與神經(jīng)疾病雜志，2010，18(3):209-212.

[2] 楊笑，郭旻，謝鵬，等.腦脊液單核細胞內(nèi)ESAT-6對結(jié)核性腦膜炎的診斷價值[J].中國神經(jīng)精神疾病雜志，2012，38(6):330-333.

[3] Ahuja GK，Mohan KK，Prasad K，et al.Dexamethasone for the treatment of tuberculous meningitis in adolescent and adults[J].N Engl J Med，2004，35l（17）：1741-1751.

[4] 宋孚霞，孫旭文，王曉彤，等.結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液T淋巴細胞的動態(tài)變化[J].中國老年學(xué)雜志，2011，31(9):1516-1517.

[5] 鞏建華，薛秀榮，馬愛玲，等.腦脊液結(jié)核桿菌抗原及核酸聯(lián)合檢測對結(jié)核性腦膜炎早期診斷的評價[J].河北醫(yī)學(xué)，2012，18(9):1334-1336.

[6] 呼建民，黃慶生，何俊瑛，等.腦脊液檢測對結(jié)核性腦膜炎診斷的意義[J].武警醫(yī)學(xué)，2010，21(7):581-582，585.

[7] 張昆南，許自強，王朝東，等.腦脊液中檢測結(jié)核分枝桿菌特異性抗原對結(jié)核性腦膜炎的診斷意義[J].中華神經(jīng)科雜志，2011，44(2):86-90.

[8] 吳曉牧，劉麗娟，許志強，等.早期診斷結(jié)核性腦膜炎的新方法:檢測濃縮腦脊液中CFP-10和ESAT-6[J].中國免疫學(xué)雜志，2012，28(4):347-350.

[9] 鄒洪智.腦脊液檢測結(jié)核性腦膜炎190例診斷分析[J].按摩與康復(fù)醫(yī)學(xué)（下旬刊），2010，1(12):83.

3 討論

結(jié)核性腦膜炎是一種非化膿性慢性腦膜炎，臨床診斷鑒別難度較大，直接影響臨床治療決策與預(yù)后[4]。臨床對于結(jié)核性腦膜炎的診斷方法較多，其中，聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)被廣泛應(yīng)用于病原微生物的診斷。該技術(shù)診斷具有早期、快速和敏感等優(yōu)勢，但對于結(jié)核性腦膜炎的診斷目前尚缺乏較為完善的評價，且其假陽性率較高，對實驗室條件要求較高[5]。監(jiān)測抗體無法鑒別既往結(jié)核菌感染與急性結(jié)核感染，臨床應(yīng)用限制。

臨床研究發(fā)現(xiàn)，腦脊液結(jié)核桿菌抗原檢測與培養(yǎng)具有密切相關(guān)性，可作為結(jié)核菌診斷的直接證據(jù)[6]。既往研究多采用ELISA法進行腦脊液中循環(huán)抗原或者抗原抗體復(fù)合物的檢測，但敏感性

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.4.034

湖南 423000 郴州市第一人民醫(yī)院 （李青 夏明萬 雷源標(biāo)）