陳四平，樊薇，劉夢(mèng)云（河北師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，河北石家莊050024）

超聲波法制備牛肝菌提取物的β-環(huán)糊精包合物

陳四平，樊薇，劉夢(mèng)云
（河北師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，河北石家莊050024）

摘要：對(duì)牛肝菌乙醇提取物的β-環(huán)糊精包合物的制備工藝進(jìn)行研究，通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)選超聲波法制備牛肝菌素乙醇提取物的β-環(huán)糊精包合物的最佳工藝條件。結(jié)果表明，包合溫度60℃，超聲時(shí)間為2.5 h，投料比為1∶6（g/g），超聲波法操作簡(jiǎn)便迅速，條件易于控制。

關(guān)鍵詞：牛肝菌；超聲波法；β-環(huán)糊精；包合物；包合率

牛肝菌（Boletus），是深受大家喜愛(ài)的菌類食品，富含蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素及鈣、磷、鐵等礦物質(zhì)，不僅營(yíng)養(yǎng)豐富，而且具有養(yǎng)心安神、除煩清熱、補(bǔ)氣養(yǎng)血的作用，另外還是疏通經(jīng)絡(luò)、活血散瘀、辛熱溫中、補(bǔ)虛提神的良藥，還可以用于治女性白帶異常及不孕不育癥，是一味婦科良藥[1]。

β-環(huán)糊精是一種超微型載體，它具有環(huán)狀空洞的結(jié)構(gòu)，其他分子能部分或全部包嵌在結(jié)構(gòu)中形成絡(luò)合物，即包合物[2]，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化妝品中，環(huán)糊精做成的包合物能改善藥物理化性質(zhì)，增加藥物的溶解度和穩(wěn)定性。

牛肝菌素乙醇提取物為我校生命科學(xué)學(xué)院研制的新產(chǎn)品，為食品深加工產(chǎn)品，呈油狀，不利于分裝和包裝，本試驗(yàn)采用超聲輔助法制備牛肝菌乙醇提取物-β-環(huán)糊精包合物，可以使油狀液體粉末化，既有利于包裝又增加了該產(chǎn)品的穩(wěn)定性。超聲法簡(jiǎn)便、快捷，易于控制試驗(yàn)條件，工藝流程較短，適合于工業(yè)化大生產(chǎn)[3-5]。

1　試劑與儀器

1.1試劑

牛肝菌素乙醇提取物：生命科學(xué)學(xué)院提供；β-環(huán)狀糊精：孟州市華興生物化工有限責(zé)任公司；無(wú)水乙醇溶液、石油醚均為分析純：天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司；95%乙醇：滄州海岳化工有限公司。

1.2儀器

T6紫外分光光度計(jì)：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；BX8200H超聲波清洗器：上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司；FA/JA系列電子天平：上海方瑞儀器有限公司。

1.3方法

1.3.1牛肝菌乙醇提取物標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密稱取牛肝菌乙醇提取物1.000 3 g，用少量水乙醇溶解轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容搖勻；精密量取1mL于另一100mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容搖勻，得0.000 1 g/mL的牛肝菌乙醇提取物的標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)備液，放置于冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2牛肝菌乙醇提取物最佳吸收波長(zhǎng)的選擇

以無(wú)水乙醇溶液為對(duì)照用紫外分光光度計(jì)對(duì)牛肝菌乙醇提取物標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液進(jìn)行光譜分析，可以觀察到牛肝菌乙醇提取物標(biāo)準(zhǔn)有兩處峰，分別在228 nm和280 nm處。由于β-環(huán)糊精在280 nm處無(wú)吸收，經(jīng)查閱相關(guān)資料[6-7]確定牛肝菌乙醇提取物的最佳吸收波長(zhǎng)為280 nm。

1.3.3正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

為確定牛肝菌乙醇提取物最佳包合條件，通過(guò)單因素考察，并分析相關(guān)資料，篩選出對(duì)牛桿菌乙醇提取物包合過(guò)程有顯著影響的3個(gè)因素：包合溫度（A）；包合時(shí)間（B）；牛肝菌乙醇提取物與β-環(huán)糊精的質(zhì)量比（C），每個(gè)因素選取3個(gè)水平，見(jiàn)表1。

表1　正交試驗(yàn)因素與水平表Table1　Experim ent scheme of theor thogonal design

1.3.4牛肝菌乙醇提取物-β-環(huán)糊精包合物的制備

采用超聲波法制備包合物，按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)安排，見(jiàn)表1。精密稱取1 g牛肝菌乙醇提取物于小燒杯中，按1∶3（g/mL）比例用無(wú)水乙醇溶解稀釋備用。取每次所需的β-環(huán)糊精用量至于500mL錐形瓶中加入適量的蒸餾水，水浴加熱至所控溫度使其溶解制成飽和溶液。將錐形瓶置于超聲波清洗儀中，設(shè)置超聲頻率為100Hz，將β-環(huán)糊精飽和水溶液恒溫于規(guī)定溫度后，加入牛肝菌乙醇提取物的稀釋液，并開(kāi)始超聲震蕩。至規(guī)定時(shí)間后將錐形瓶取出放至室溫，然后置冰箱中7℃冷藏24h，抽濾至干，用少量蒸餾水洗滌濾餅，50℃干燥12 h。將干燥后的濾餅過(guò)180目篩網(wǎng)，用少量石油醚洗滌兩次，每次25mL并抽濾，濾液留用測(cè)其包合率，濾餅50℃干燥即得白色疏松狀包合物粉末[9-12]。

1.3.5牛肝菌乙醇提取物包合物包合率及包合物收率的計(jì)算

取留用的1號(hào)～9號(hào)石油醚洗滌液于水浴鍋中加熱，石油醚揮發(fā)完全后置于室溫下用少量95%乙醇洗滌，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用95%乙醇定容搖勻，用微孔濾膜過(guò)濾器過(guò)濾得未包合牛肝菌乙醇提取液濾液備用。設(shè)置T6紫外分光光度計(jì)最大吸收波長(zhǎng)為280 nm，測(cè)定1號(hào)～9號(hào)未包合牛肝菌乙醇提取物液濾液的吸光度。

確定評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)，由于牛肝菌乙醇提取物-β-環(huán)糊精包合物的包合率、包合物產(chǎn)率均為重要指標(biāo)，但起主要作用的是包合率，所以采用綜合評(píng)分法評(píng)定。

綜合評(píng)價(jià)=60%×包合率+40%×包合物產(chǎn)率

2　結(jié)果與分析

2.1結(jié)果分析

正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　正交試驗(yàn)結(jié)果Table 2　Experiment resultsof the orthogonaldesign

對(duì)表2的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析和F檢驗(yàn)，見(jiàn)表3。

表3　方差分析表Table3　Anova analyse

結(jié)果表明包合溫度（A）對(duì)包合綜合評(píng)價(jià)影響顯著，而包合時(shí)間（B）、投料比（C）對(duì)包合綜合評(píng)價(jià)影響均不顯著。由此可以得出最佳的制備條件為A3B3C1，即包合溫度為60℃，包合時(shí)間為2.5h，投料比為1∶6（g/g）。

2.2包合物的驗(yàn)證

采用采用紫外分光光度法和薄層色譜法對(duì)包合前后的牛肝菌乙醇提取物質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，牛肝菌乙醇提取物與β-環(huán)糊精形成了包合物，且牛肝菌乙醇提取物在包合前后成分無(wú)變化[6-7]。

3　討論

牛肝菌乙醇提取物與β-環(huán)糊精通過(guò)范德華力形成包合物后可使牛肝菌乙醇提取物溶解度增大，藥物的穩(wěn)定性、生物利用度得到有效提高，掩蓋了其不良?xì)馕?，使油狀液體的牛肝菌乙醇提取物粉末化，便于制成散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑等劑型。

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DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.22.028

收稿日期：2015-08-17

作者簡(jiǎn)介：陳四平（1963—），男（漢），研究員，碩士，研究方向：天然產(chǎn)物活性成分研究及開(kāi)發(fā)。

Ultrasonic M ethod Preparation Boletus Ethanol Extractβ-cyclodextrin Inclusion Complex

CHEN Si-ping，F(xiàn)ANWei，LIUMeng-yun
（CollegeofChemistry and MaterialsScience，HebeiNormalUniversity，Shijiazhuang050024，Hebei，China）

Abstract：To boletus ethanol extracts ofβ-cyclodextrin complex to study the preparation technology，by orthogonal test optimization ultrasonic prepared Boletus ethanol extract ofβ-cyclodextrin complex optimum technological conditions.Inclusion temperature 60℃，ultrasonic timewas2.5 h，weight ratioof1∶6（g/g）.The ultrasonicmethod issimple rapid，the condition iseasy to control.

Keywords：Boletus；ultrasonicmethod；β-cyclodextrin；inclusion complex；the inclusion rate