史憲海，楊 艷，杜 娟

(山西省食品藥品檢驗(yàn)所，山西太原 030001)

少腹逐瘀湯劑處方始收載于清朝老中醫(yī)王清任的《醫(yī)林改錯(cuò)》下卷，可治療多種婦科疾病且療效顯著，素有“婦科第一方”之稱［1，2］，由當(dāng)歸、蒲黃、五靈脂(醋炒)、赤芍、延胡索(醋制)、沒藥(炒)、川芎、肉桂、炮姜、小茴香(鹽炒)等十味中藥材，加入一定比例煉蜜制成大蜜丸，用于寒凝血瘀所致的月經(jīng)后期痛經(jīng)，產(chǎn)后腹痛，癥見行經(jīng)后錯(cuò)、行經(jīng)小腹冷痛、經(jīng)血紫暗、有血塊、產(chǎn)后小腹疼痛喜熱、拒按?，F(xiàn)收載于《中國藥典》2010年版一部［3］，標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定項(xiàng)目。目前文獻(xiàn)報(bào)道［4-6］的關(guān)于處方藥味控制均為單一成分的含量測定方法，而多指標(biāo)多成分共同控制中成藥質(zhì)量已經(jīng)是現(xiàn)代中藥質(zhì)量控制的發(fā)展趨勢。本實(shí)驗(yàn)選擇4個(gè)化學(xué)成分作為檢測指標(biāo)，采用HPLC法同時(shí)測定其含量，分別控制處方中4種主要藥味的質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)方法簡便、靈敏、準(zhǔn)確，分離效果好，可作為少腹逐瘀丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高的參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

儀器:WATERS 2695-2998高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器;對(duì)照品:芍藥苷、阿魏酸、異鼠李素-3-0-新橙皮苷、桂皮醛(批號(hào)分別為:110736-201136、110773-201012、111571-200537、110710-201016)，均購于中國食品藥品檢定研究院;試藥:乙腈為色譜純;水為純化水;甲醇、磷酸為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:自裝柱富士填料 C18(5 μm，4.6 mm×250 mm);流動(dòng)相采用梯度洗脫(A為乙腈，B為0.1%磷酸溶液)，A∶B為0 min10∶90，50 min35∶65，流速:1.0 mL·min－1;柱溫:室溫;檢測波長280 nm，進(jìn)樣量10 μL。

2.2 供試品提取方法的考察

2.2.1 提取溶劑的考察分別采用甲醇、70%甲醇超聲提取法，通過比較，為了能使大蜜丸充分溶散，采用70%甲醇超聲提取法效果最佳。

2.2.2 提取時(shí)間的考察采用超聲提取法，分別超聲30、40、50、60 min，結(jié)果超聲處理30 min與60 min結(jié)果基本一致，故將超聲時(shí)間定為30 min。

2.3 專屬性實(shí)驗(yàn)

分別取處方中除赤芍、當(dāng)歸、川芎、蒲黃及肉桂外的全部藥味，按本品工藝及供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液，注入液相色譜儀進(jìn)行測定，結(jié)果表明:芍藥苷、阿魏酸、異鼠李素-3-0-新橙皮苷、桂皮醛保留時(shí)間處無干擾(見圖1)。

圖1 專屬性試驗(yàn)對(duì)照、樣品和陰性樣品色譜圖Fig.1 Chromatogram of the Test Control，Sample and Negative Sample Chromatogram of the Special Properties

2.4 耐用性實(shí)驗(yàn)

采用不同儀器:a)日本島津LC-20AHT型高效液相色譜儀;b)WATERS 2695-2998高效液相色譜儀;自裝柱，富士填料，C18(5 μm，4.6 mm × 250 mm)，均能達(dá)到良好的分離效果。

2.5 線性關(guān)系的考察

分別取對(duì)照品溶液，按照“2.1色譜條件”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)，以峰面積值和進(jìn)樣量進(jìn)行線性回歸(mg·mL－1)，結(jié)果表明，芍藥苷在0.808 ～6.066 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(回歸方程為 Y=80 424X －7 156，r2=0.999);阿魏酸在0.062 5 ～0.625 2 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(回歸方程為 Y=30 676X+723，r2=0.999);異鼠李素-3-0-新橙皮苷在0.11 ～1.68 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(回歸方程為Y=64 401X+2 833，r2=0.999);桂皮醛在0.05 ～0.96 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(回歸方程為Y=8 ×106X+9 349，r2=0.999)。

2.6 樣品的測定

按擬定含量測定方法制備樣品，按照“2.1色譜條件”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)，依法對(duì)收集到的26批次樣品進(jìn)行含量測定，測得結(jié)果見表1。

表1 26批次含量測定結(jié)果Table 1 Results of 26 Batch Content Determination

2.7 精密度考察

取同一供試品(批號(hào)7280003)溶液，同一進(jìn)樣量，連續(xù)進(jìn)樣6次，按照“2.1色譜條件”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)，結(jié)果測定峰面積值的 RSD分別為芍藥苷1.5%、阿魏酸2.0%、異鼠李素-3-0-新橙皮苷1.7%、桂皮醛1.9%，表明儀器精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性考察

取同一供試品(批號(hào)7280003)溶液，24 h內(nèi)每隔4 h按同一進(jìn)樣量進(jìn)樣，按照“2.1色譜條件”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)，結(jié)果不同時(shí)間測定峰面積值的RSD分別為芍藥苷1.6%、阿魏酸2.2%、異鼠李素-3-0-新橙皮苷1.4%、桂皮醛1.9%，表明24 h內(nèi)樣品溶液穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性考察

對(duì)同一批號(hào)(批號(hào)7280003)的6份樣品按擬訂的含量測定方法進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)，按照“2.1色譜條件”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)，結(jié)果不同時(shí)間測定峰面積值的RSD分別為芍藥苷1.4%、阿魏酸0.7%、異鼠李素-3-0-新橙皮苷2.0%、桂皮醛0.9%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.10 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)

采用加樣回收法，取上述重復(fù)性實(shí)驗(yàn)所用的樣品(7280003批)，取1 g(9份)，精密稱定，分別精密加入芍藥苷、阿魏酸、異鼠李素-3-0-新橙皮苷、桂皮醛對(duì)照品一定量，按擬定含量測定方法制備樣品，按照“2.1色譜條件”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)，計(jì)算平均回收率和RSD分別為97.9%、2.5%，99.5%、2.5%，99.5%、1.3%，99.2%、1.9%，結(jié)果表明回收率符合含量測定要求。

3 討論

3.1 檢測波長確定

實(shí)驗(yàn)中選擇PDA檢測器，波長范圍190～400 nm進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采集280 nm附近波長的色譜圖，各成分均有良好的響應(yīng)，基線平穩(wěn)，色譜峰分離良好，故選擇280 nm作為檢測波長。4種成分的最大吸收波長分別為:芍藥苷238 nm、阿魏酸315 nm、桂皮醛285 nm、異鼠李素-3-0-新橙皮苷254 nm。

3.2 樣品檢測結(jié)果分析

6家企業(yè)26批次樣品檢測結(jié)果，芍藥苷含量介于9.7 ～82.5 mg/丸，阿魏酸含量介于0.09 ～0.26 mg/丸，桂皮醛含量介于0.08 ～5.37 mg/丸，異鼠李素-3-0-新橙皮苷含量介于0～5.36 mg/丸，各成分含量差異很大，甚至有1批次未檢測到異鼠李素-3-0-新橙皮苷，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中有控制項(xiàng)目的赤芍含量全部較高合格，未控制的當(dāng)歸、川芎、肉桂及蒲黃含量普遍偏低，尤其是當(dāng)歸和川芎，提示本品現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量控制水平亟待提高。

3.3 實(shí)現(xiàn)質(zhì)量控制水平的提升

目前文獻(xiàn)報(bào)道的關(guān)于處方藥味控制均為單一成分的含量測定方法，而多指標(biāo)多成分共同控制中成藥質(zhì)量已經(jīng)是現(xiàn)代中藥質(zhì)量控制的發(fā)展趨勢。少腹逐瘀丸現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)僅有赤芍、當(dāng)歸、川芎、肉桂、蒲黃的顯微鑒別，而無含量測定控制項(xiàng)目，本實(shí)驗(yàn)選擇芍藥苷、阿魏酸、桂皮醛和異鼠李素-3-0-新橙皮苷4個(gè)化學(xué)成分作為檢測指標(biāo)，實(shí)現(xiàn)了同一條件控制多味藥材的質(zhì)量。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，本方法簡便、靈敏、準(zhǔn)確、可靠，分離效果好，可作為少腹逐瘀丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高的參考依據(jù)，對(duì)處方含有類似藥味制劑的質(zhì)量控制也有一定的借鑒作用。

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典臨床用藥須知——中藥成方制劑卷［S］.2010年版，北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2011.

［2］肖培根，主編.新編中藥志［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2006.

［3］國家藥典委員會(huì).中國藥典［S］.2010年版一部，北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［4］李 曦，張麗宏.不同產(chǎn)地“當(dāng)歸類”藥材中藁本內(nèi)酯含量比較［J］.中國中藥雜志，2013，17(2):133-136.

［5］王 婕，趙建邦，宋平順.30批當(dāng)歸中阿魏酸、藁本內(nèi)酯含量測定［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，16(2):133-136.

［6］劉 斌，陸蘊(yùn)如.高效液相色譜法測定蒲黃中2種黃酮苷的含量［J］.藥物分析雜志，1998，18(2):80-83.