聶　弘，高從榮，趙　敏，王　瑾，鄒　強(qiáng)，萬(wàn)　軍

HIF-1α、Survivin在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)

聶弘1，高從榮1，趙敏2，王瑾2，鄒強(qiáng)2，萬(wàn)軍3

摘要目的探討缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）、凋亡相關(guān)蛋白Survivin在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系，以及兩種蛋白的相關(guān)性。方法采用免疫組化法檢測(cè)52例NSCLC組織及20例癌旁組織中HIF-1α和Survivin的表達(dá)。結(jié)果NSCLC組織中Survivin、HIF-1α的陽(yáng)性表達(dá)率分別為69%（36／52）和59%（31／52）均高于癌旁組織。HIF-1α、Survivin的表達(dá)與腫瘤臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病理分級(jí)相關(guān)（P＜0．05）。HIF-1α的表達(dá)與Survivin表達(dá)（r＝0．406，P＜0．05）呈正相關(guān)。結(jié)論在非小細(xì)胞肺癌癌組織中HIF-1α、生存素表達(dá)明顯高于癌旁組織；HIF-1α和Survivin在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中存在相互作用并與非小細(xì)胞肺癌發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞缺氧誘導(dǎo)因子-1α；生存素；非小細(xì)胞肺癌

2015-08-01接收

非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是肺癌最常見(jiàn)類型，約占肺癌的80%，其5年生存率僅15%左右［1］，國(guó)內(nèi)有研究者報(bào)道缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）、Survivin在多種惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著重要作用，并且HIF-1α和Survivin的過(guò)表達(dá)與多種惡性腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)［2-3］。該研究采用免疫組化法檢測(cè)52例NSCLC組織及20例癌旁正常組織中HIF-1α和Survivin的表達(dá)情況，探討兩者與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系，并對(duì)HIF-1α與Survivin之間有無(wú)相關(guān)性進(jìn)行分析，探討兩者與NSCLC發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系，以期為NSCLC治療提供依據(jù)。

1　材料與方法

1．1病例資料選取2012年11月～2015年4月安徽省合肥市第二人民醫(yī)院胸心外科收治確診為NSCLC的52例術(shù)后石蠟包埋標(biāo)本，其中男30例，女22例；年齡44～76（54．8±10．9）歲。其中鱗癌34例，腺癌18例，按2009年（UICC）肺癌的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期：Ⅰ期患者8例，Ⅱ期患者23例，Ⅲ期患者21例；52例患者中伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者16例。術(shù)前均未接受過(guò)化療、放療或免疫治療，所有病例均有完整的臨床資料及隨訪資料。對(duì)照組取20例手術(shù)癌旁5 cm以外肺組織。

1．2免疫組化法檢測(cè)步驟采取SP兩步法，按照試劑盒說(shuō)明書嚴(yán)格執(zhí)行。兔抗人Survivin多克隆抗體及兔抗人HIF-1α多克隆抗體、DBA試劑盒均由安科生物技術(shù)公司提供。應(yīng)用德國(guó)病理圖像分析儀進(jìn)行觀察和顯微照相。Survivin的陽(yáng)性產(chǎn)物主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，少數(shù)在細(xì)胞核表達(dá)。HIF-1α陽(yáng)性細(xì)胞全部為細(xì)胞質(zhì)染色，根據(jù)陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的比例分為：Survivin陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性 （-），10%～25%為弱陽(yáng)性 （＋），26%～50%為中度陽(yáng)性（＋＋），＞50%為強(qiáng)陽(yáng)性（＋＋＋），（＋～＋＋＋）均視為陽(yáng)性表達(dá)。HIF-1α陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜1%為陰性（-），1%～10%為弱陽(yáng)性（＋），11%～50%為中度陽(yáng)性（＋＋），＞50%為強(qiáng)陽(yáng)性（＋＋＋）。所有結(jié)果判斷均有兩名病理科醫(yī)師采取盲法分別判斷。

1．3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用 SPSS 16．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用X2檢驗(yàn)，其中兩組樣本間率的比較采用四格表資料的檢驗(yàn)；多組樣本間率的比較采用行×列表資料檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

2.1Survivin及H IF-1α在NSCLC中的表達(dá)情況免疫組化染色顯示Survivin、HIF-1α均表達(dá)于NSCLC組織的細(xì)胞質(zhì)中，陽(yáng)性表達(dá)率均為69．0% （36／52）。

2.2H IF-1α、Survivin在NSCLC與癌旁正常肺組織中表達(dá)的比較Survivin、HIF-1α總陽(yáng)性表達(dá)率分別為69．0%（36／52）、59．6%（31／52），二者表達(dá)率在NSCLC與癌旁正常肺組織間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。見(jiàn)表1。

表1　Survivin、HIF-1α在NSCLC、癌旁正常肺組織中的表達(dá)（n）

2.3H IF-1α、Survivin表達(dá)水平與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系HIF-1α表達(dá)陽(yáng)性率與組織的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0．05）、分化程度（P＜0．01）及TNM分期有關(guān)（P＜0．05）。NSCLC組織中Survivin表達(dá)陽(yáng)性率與患者的性別、年齡無(wú)關(guān)（P＞0．05），而與癌組織的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0．01）、分化程度（P＜0．05）及TNM分期有關(guān)（P＜0．01）。見(jiàn)表2。

表2　Survivin、HIF-1α的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.4H IF-1α與Survivin蛋白表達(dá)的相關(guān)性在36例Survivin蛋白表達(dá)陽(yáng)性的患者中，26例HIF-1α蛋白表達(dá)呈陽(yáng)性，22例HIF-1α蛋白表達(dá)陰性的患者中，Survivin蛋白表達(dá)呈陰性是12例。HIF-1α與Survivin在 NSCLC中的表達(dá)呈正相關(guān)（r＝0．406，P ＝0．030）。

3　討論

Survivin是哺乳類凋亡抑制蛋白的重要成員，廣泛表達(dá)于人類各種腫瘤組織中．具有促使細(xì)胞轉(zhuǎn)化，調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂和抑制細(xì)胞凋亡等作用。Survivin蛋白是一種位于細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)之間的穿梭蛋白，Survivin過(guò)表達(dá)可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞逃避生長(zhǎng)監(jiān)控，抑制了腫瘤細(xì)胞凋亡，使異常細(xì)胞的生存增殖能力增強(qiáng)，導(dǎo)致腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，對(duì)惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展起重要作用［4］。大量研究［2-3］顯示，Survivin在食管癌、乳腺癌及肝癌的表達(dá)情況與患者的年齡、性別、腫瘤位置等情況無(wú)關(guān)。而與臨床分期、腫瘤分級(jí)關(guān)系密切。Survivin能否作為肺癌患者預(yù)后的參考指標(biāo)，Yang et al［5］認(rèn)為Survivin在鱗癌中表達(dá)最高，其表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度、TNM分期及預(yù)后相關(guān)，并在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要的促進(jìn)作用［5-6］。鄒亞峰等［7］的免疫組化研究結(jié)果顯示：Survivin在I期和Ⅱ期的NSCLC患者的表達(dá)水平明顯低于Ⅲ期患者。本研究也表明，在NSCLC組織中，Survivin與組織學(xué)分級(jí)、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，提示Survivin在NSCLC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，特別是在NSCLC侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著非常重要的作用。

NSCLC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中有許多轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的參與，HIF-1是近年發(fā)現(xiàn)的一種是由HIF-1α、HIF-1β組成的異源二聚體轉(zhuǎn)錄因子，其中HIF-1α決定HIF-1活性，在低氧環(huán)境中HIF-1發(fā)揮轉(zhuǎn)錄和基因調(diào)控作用，HIF-1α的下游基因有40多種［8］，其中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)發(fā)展起促進(jìn)作用，目前，已在多種惡性腫瘤組織及壞死的腫瘤組織中甚至癌前病變中檢測(cè)到HIF-1α蛋白的過(guò)度表達(dá)，而相應(yīng)良性病變中及正常的肺組織中HIF-1α表達(dá)很低，馮躍慶等［9］研究顯示，在乳腺癌中，腫瘤TNM分期越晚，惡性度越高及發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者HIF-1α表達(dá)越高，HIF-1α表達(dá)率與患者生存率相關(guān)。馮春來(lái)等［10］發(fā)現(xiàn)肺腫瘤組織及壞死的腫瘤組織中HIF-1α過(guò)度表達(dá)，而正常的肺組織中HIF-1α表達(dá)很低，推測(cè)HIF-1α表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期有密切關(guān)系。本研究也得出相同結(jié)論，推測(cè)HIF-1α可能是肺癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要因素。

有研究［11-12］顯示在缺氧環(huán)境中Survivin表達(dá)增加，在乳腺癌、結(jié)直腸癌中的HIF-1α和 Survivin表達(dá)呈正相關(guān)，可能HIF-1α直接誘導(dǎo)或間接影響Survivin，增強(qiáng)抑制細(xì)胞凋亡，沈圓兵等［13］研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α基因沉默可以使下游靶基因Survivin的表達(dá)下調(diào)，抑制肺腺癌的生長(zhǎng)。進(jìn)一步研究［14-15］顯示HIF-1α對(duì)胰島素樣生長(zhǎng)因子和Notch-1受體誘導(dǎo)的Survivin的表達(dá)有協(xié)調(diào)作用，上述實(shí)驗(yàn)都表明HIF-1α在Survivin的表達(dá)調(diào)控中起著重要的作用。本研究結(jié)果也表明，在NSCLC中，HIF-1α和Survivin的表達(dá)呈顯著正相關(guān)，提示兩者在NSCLC的發(fā)生及發(fā)展中有協(xié)同作用。

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The expression of H IF-1αand Survivin in hum an non-small cell lung cancer

Nie Hong1，Gao Congrong1，Zhao Min2，et al
（1Dept of Cardiothoracic Surgery，2Dept of Pathology，The Affiliated Hefei Hospital of AnhuiMedical University The Second People′s Hospital of Hefei），Hefei230011）

AbstractObjectiveTo study the expression of hypoxia-inducible factor-1α（HIF-1α）and Survivin in human non-small cell lung cancer（NSCLC），and the relationship between such expression and clinicopathological features of NSCLC．Methods52 cases of tissue specimen including NSCLC，neighboring noncancerous tissue were collected．These specimenswere detected by immunohistochemicalmethods．Resu ltsThe expression of HIF-1αand Survivin showed significant difference（P＜0．01）between NSCLC tissues and neighboring noncancerous tissues．The positive rates of expression of HIF-1α，Survivin were correlated with the tumor differentiation degree，lymphnode metastasis and tumor stage（P＜0．05），and significantand positive correlation was observed between the positiverate of expression of Survivin and HIF-1α（P＜0．05）．ConclusionThe overexpression of HIF-1αand Survivin is found in NSCLC．Survivin and HIF-1αmay play a synergistic role in the genesis and progression of themalignancy，and theremay be a certain synergy between Survivin in the process of tumor occurrence and development．

Key wordsHIF-1α；Survivin；non-small cell lung cancer

中圖分類號(hào)R 655．3

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號(hào)1000-1492（2015）11-1674-03

基金項(xiàng)目：安徽省自然科學(xué)基金（編號(hào)：1208085QH159）

作者單位：安徽醫(yī)科大學(xué)附屬合肥醫(yī)院（合肥市第二人民醫(yī)院）1胸心外科、2病理科，合肥2300113安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院胸外科，合肥230022

作者簡(jiǎn)介：聶弘，男，副主任醫(yī)師，責(zé)任作者，E-mail：hfzyywknh＠126．com