鄭曉麗,靳春榮,陳 武,白 濤,呂吉元,梁建芳

脂餐負(fù)荷前后IL 8、IL 10動態(tài)變化與動脈硬化關(guān)系的研究

鄭曉麗1,靳春榮2,陳 武2,白 濤2,呂吉元2,梁建芳2

目的研究動脈硬化過程中脂餐負(fù)荷前后IL-8、IL-10變化規(guī)律及其與動脈硬化的關(guān)系。方法高脂飼養(yǎng)健康雄性新西蘭大白兔12周,于實(shí)驗(yàn)初始及4周、8周、12周脂餐負(fù)荷前及負(fù)荷后2 h、4 h、6 h、8 h耳緣靜脈采血測定血漿IL-8、IL-10水平,同期超聲觀察腹主動脈硬化情況。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)初始及4周時,脂餐負(fù)荷后IL-8、IL-10水平先升高后降低,以餐后4 h、6 h明顯升高(P<0.05);實(shí)驗(yàn)8周時IL-8餐后2 h、4 h、6 h IL-8水平較空腹略高(P<0.05),IL-10水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);實(shí)驗(yàn)12周時IL 8水平在脂餐負(fù)荷前后無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),IL-10水平先升高后逐漸下降,餐后8 h略低于負(fù)荷前水平(P<0.05)。結(jié)論 動脈硬化早期存在促炎因子與抗炎因子的失衡,且在動脈硬化過程中,脂餐負(fù)荷對動脈硬化早期炎癥反應(yīng)影響較大。

動脈硬化;脂餐負(fù)荷;白細(xì)胞介素-8;白細(xì)胞介素-10;新西蘭大白兔

動脈粥樣硬化(AS)是血管內(nèi)皮受損后的慢性炎癥反應(yīng)過程,炎癥參與了動脈粥樣硬化的啟動及動脈粥樣硬化的全過程。炎癥因子是AS的危險(xiǎn)因子,根據(jù)不同的調(diào)節(jié)作用分為促炎細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子,其中白細(xì)胞介素-8(IL-8)被認(rèn)為是關(guān)鍵的慢性血管促炎因子,通過趨化和激活中性粒細(xì)胞、分泌黏附分子,參與AS的形成;而IL-10是抗炎細(xì)胞因子,具有抗動脈硬化作用及心肌細(xì)胞保護(hù)作用。脂質(zhì)代謝異常是AS最重要的危險(xiǎn)因素,高膽固醇飲食能引起高血脂和誘發(fā)動脈粥樣硬化,且“餐后階段是致動脈粥樣硬化的關(guān)鍵時期”,餐后存在高炎癥反應(yīng)狀態(tài)。本研究觀察動脈硬化中脂餐負(fù)荷前后兔血漿IL-8、IL-10水平變化,探討脂餐負(fù)荷對動脈硬化及炎癥因子的影響。

1 材料與方法

1.1 研究對象 健康雄性新西蘭大白兔10只,3月齡,體重2.5 kg~3.0 kg,由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供,飼料由山西省畜研所提供,飼養(yǎng)于山西醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)實(shí)驗(yàn)中心。

1.2 AS模型建立 所有動物單籠,自由飲水,在室溫(18~20)℃、基礎(chǔ)飼料相同(100~120)g/d條件下適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。然后給予高脂飲食(含1%膽固醇, 8%蛋黃,91%基礎(chǔ)飼料)飼養(yǎng)12周。

1.3 血漿IL-8、IL-10測定 實(shí)驗(yàn)初始及4周、8周、12周空腹12 h后予脂餐負(fù)荷(含2%膽固醇,8%蛋黃,90%基礎(chǔ)飼料),負(fù)荷前及負(fù)荷后2 h、4 h、6 h、8 h耳緣靜脈采血2 mL置于EDTA抗凝管,離心15 min (1 000 xg),取上層血漿凍存于-80℃低溫冰箱。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時,采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血漿IL-8、IL-10水平。

1.4 超聲檢查 實(shí)驗(yàn)初始及4周、8周、12周肌注速眠新Ⅱ(0.1 mL/kg)麻醉后,采用(7~10)MHz高頻血管探頭檢測腹主動脈,觀察管壁是否光滑、管腔是否狹窄,內(nèi)-中膜厚度(IMT)及斑塊的大小,并記錄。

1.5 病理檢查 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時,用25%烏拉坦(5 mL/ kg)靜脈麻醉動物后,取仰臥位固定于解剖臺,分離、截?cái)喔怪鲃用},10%多聚甲醛固定,常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片、HE染色,電鏡觀察血管硬化情況。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用雙時間因素重復(fù)測量法分析。P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

研究結(jié)束時,10只動物均出現(xiàn)了腹主動脈粥樣硬化。動脈硬化過程中,脂餐負(fù)荷前后血漿IL-8、IL-10變化情況。詳見表1、表2。

表1 動脈硬化過程中脂餐負(fù)荷前后IL-8變化(±s)ng/L

表1 動脈硬化過程中脂餐負(fù)荷前后IL-8變化(±s)ng/L

時間空腹餐后2 h餐后4 h餐后6 h餐后8 h初始 68.34±7.30 76.03±8.561)84.45±9.871)86.88±7.001)68.20±4.97第4周97.55±5.452)101.25±3.921)105.98±5.871)103.94±6.34 98.62±6.49第8周74.04±7.06 78.42±9.841)82.66±7.051)83.55±10.811)75.53±9.641)第12周70.12±7.29 69.79±10.90 75.29±10.29 74.83±10.27 69.30±9.58同周不同時點(diǎn)LSD多重比較,1)P<0.05;不同周空腹與初始空腹相比,2)P<0.01。

表2 動脈硬化過程中脂餐負(fù)荷前后IL-10變化(±s)ng/L

表2 動脈硬化過程中脂餐負(fù)荷前后IL-10變化(±s)ng/L

時間空腹餐后2 h餐后4 h餐后6 h餐后8 h初始 108.73±13.15 124.59±18.651)138.79±18.151)136.64±14.641)121.36±15.451)第4周125.11±16.362)133.21±26.67 143.74±19.211)139.92±20.741)137.03±18.611)第8周120.39±16.322)125.02±15.81 125.82±16.25 129.44±6.27 115.86±11.42第12周113.71±13.04 122.27±12.931)124.86±11.521)121.06±13.871)104.66±13.081)同周不同時點(diǎn)比較,1)P<0.05;不同周空腹與初始空腹相比,2)P<0.01。

3 討 論

動脈粥樣硬化早期病變受到動脈壁中多種炎癥因子、細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)。Peters等[1]研究證實(shí),IL-8等趨化因子及其特異性受體在AS中起重要作用。Moreau等[2]研究證實(shí),IL-8參與早期的動脈粥樣硬化形成。Mo lad等[3]證實(shí),IL-8具有促動脈粥樣硬化作用。本研究發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)初始(無動脈硬化時)脂餐負(fù)荷后2 h、4 h、6 h IL-8水平較負(fù)荷前升高,8 h恢復(fù)至負(fù)荷前水平;實(shí)驗(yàn)4周、8周時,脂餐負(fù)荷后IL-8水平略升高;實(shí)驗(yàn)12周時血漿IL-8水平略降低,脂餐負(fù)荷前后變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果表明在AS進(jìn)程中IL-8水平先升高后逐漸降低,AS早期脂餐負(fù)荷后IL-8水平升高明顯,提示促炎因子IL-8主要參與AS早期的炎癥反應(yīng),且脂餐負(fù)荷對AS早期炎癥反應(yīng)影響較大。

IL-10是由Th2細(xì)胞產(chǎn)生的一種單鏈糖蛋白,是目前公認(rèn)的炎癥及免疫抑制因子。IL-10能夠抑制炎癥因子的激活;抑制促炎轉(zhuǎn)錄因子核因子-κB(NK-κB)的活性,減少其他炎癥介質(zhì)的合成[4];抑制IL-1、IL-18的促動脈粥樣硬化作用;影響ox-LDL在血管壁沉積。Nishihira等[5]研究證實(shí),IL-10具有抗動脈硬化及穩(wěn)定粥樣斑塊的作用。Smith等[6]研究發(fā)現(xiàn),穩(wěn)定型心絞痛患者血漿IL-10水平明顯高于不穩(wěn)定性心絞痛患者。Ma llat等[7]動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),IL-10基因缺如的小鼠較野生型小鼠更易發(fā)生AS。Rubie等[8]研究證實(shí),IL-10能阻止膽固醇生成,增加膽固醇輸出,啟動逆向轉(zhuǎn)運(yùn),降低血清膽固醇水平,發(fā)揮其抗動脈硬化作用。本研究發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)初始及4周時,脂餐負(fù)荷后血漿IL-10水平較空腹時升高,以4 h升高明顯;實(shí)驗(yàn)12周時,IL-10水平先略升高后降低,餐后8 h低于空腹水平。在AS過程中,實(shí)驗(yàn)4周、8周時空腹IL-10水平較初始時升高,以4周時升高明顯。IL-8、IL-10與AS的慢性炎癥過程有著密切的關(guān)系,其主要參與動脈硬化早期炎癥反應(yīng),且脂餐負(fù)荷后二者的表達(dá)水平升高。

由于本研究受樣本量和時間所限,關(guān)于脂餐負(fù)荷對AS早期及進(jìn)展中促炎因子、抗炎因子的影響,尚需進(jìn)一步深入研究。

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R543 R255

:A

10.3969/j.issn.1672-1349.2015.07.010

1672-1349(2015)07-0891-02

2015-03-16)

(本文編輯王雅潔)

山西省自然科學(xué)基金支持(No.2014011040-6)

1.山西醫(yī)科大學(xué)(太原030001);2.山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院

靳春榮,E-mail:jinchunrong525@sina.com