金 平，顧 燕

（1.江蘇省中醫(yī)院，南京210029；2.江蘇睿博醫(yī)藥有限公司，江蘇南京211112）

HPLC-ELSD 法測(cè)定黃芪泡騰片中黃芪甲苷的含量

金 平1，顧 燕2

（1.江蘇省中醫(yī)院，南京210029；2.江蘇睿博醫(yī)藥有限公司，江蘇南京211112）

目的 建立黃芪泡騰片中黃芪甲苷含量測(cè)定方法。方法 采用高效液相色譜和蒸發(fā)光檢測(cè)器（HPLCELSD）方法，十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（5 μm，250.0 mm×4.6 mm），流動(dòng)相水∶乙腈（68∶32），流速1 mL/min；柱溫30℃，載氣流量為2.7 L/min。結(jié)果 黃芪甲苷為1.112～6.672 μg時(shí)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.56%（RSD=1.67%），3批樣品每片含黃芪甲苷均在2.00 mg以上。結(jié)論 該方法準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好，可用于黃芪泡騰片中黃芪甲苷的含量測(cè)定。

黃芪甙/分析； 色譜法，高壓液相； 含量測(cè)定

黃芪泡騰片是黃芪經(jīng)提取、濃縮、干燥后加輔料制備而成的。功能主治：固本止汗。用于氣虛血虧，表虛自汗，四肢乏力，精神不足或久病衰弱。同類品種黃芪精口服液在臨床上廣泛應(yīng)用于呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)等疾病[1-2]。現(xiàn)代研究表明，黃芪中主要活性成分黃芪甲苷具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、保護(hù)腎上腺皮質(zhì)和骨髓功能的效應(yīng)。本文用高效液相色譜和蒸發(fā)光檢測(cè)器（HPLC-ELSD）法建立了黃芪泡騰片中黃芪甲苷的含量測(cè)定方法，為產(chǎn)品質(zhì)量的提高提供參考[3-4]。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 Agilent1100 HPLC儀，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；黃芪購自江蘇省藥材公司，經(jīng)鑒定符合《中華人民共和國藥典》一部2010年版黃芪項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定。黃芪甲苷對(duì)照品（供含量測(cè)定用，批號(hào)：0781-2003113）購自中國藥品生物制品檢定所。黃芪泡騰片，自制。乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

1.2.1 色譜條件 十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（5 μm，250.0 mm×4.6 mm）；流動(dòng)相：水∶乙腈（68∶32），流速1 mL/min；柱溫30℃；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。理論塔板數(shù)按黃芪甲苷計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

1.2.2 對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液的制備

1.2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成0.5 mg/mL的對(duì)照品溶液。

1.2.2.2 供試品溶液 取黃芪泡騰片10片，研細(xì)，取細(xì)粉2 g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量提取3 h，蒸干甲醇，殘?jiān)铀?0 mL溶解，水飽和正丁醇提取3次，每次40 mL，合并正丁醇液，氨試液洗滌2次，每次40 mL，氨試液棄去，正丁醇液蒸干，殘?jiān)陨倭考状嫁D(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，即得。

1.2.2.3 陰性對(duì)照液 按處方比例稱取除去黃芪的輔料1.4 g，精密稱定，按1.2.2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照液。

1.2.3 測(cè)定法 取對(duì)照品溶液5、10 μL及供試品溶液10 μL，注入HPLC儀，測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。

1.3 方法學(xué)驗(yàn)證

1.3.1 專屬性試驗(yàn) 按1.2.2項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照液、對(duì)照品溶液及供試品溶液，按測(cè)定方法進(jìn)行檢測(cè)，取陰性對(duì)照液、黃芪甲苷對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μL，注入HPLC儀，考察陰性制劑是否對(duì)檢測(cè)存在干擾。

（5）獲取貸款的回收款后，按照約定，貸款服務(wù)機(jī)構(gòu)嚴(yán)格履行約定。一方面，履行時(shí)限約定，對(duì)保管部門完成資金劃撥。另一方面，履行信息披露約定，向信托公司提交數(shù)據(jù)分析及管理報(bào)告。

1.3.2 線性關(guān)系考察 精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品11.12mg于10 mL的容量瓶中，用甲醇溶解定容，作為儲(chǔ)備液。分別精密吸取儲(chǔ)備液 1、2、3、4、5、6 mL于 10mL容量瓶中，用甲醇定容至10 mL。精密吸取6個(gè)不同濃度的對(duì)照液10 μL，注入HPLC儀，各進(jìn)2針，用HPLC儀測(cè)定，計(jì)算回歸方程與相關(guān)系數(shù)。

1.3.3 精密度試驗(yàn) 按照1.2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定6次，測(cè)定，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），考察精密度。

1.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按照1.2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每隔2 h按1.2.3項(xiàng)下測(cè)定方法進(jìn)行檢測(cè)，共考察12 h，考察溶液的穩(wěn)定性。

1.3.5 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取黃芪泡騰片10片，研細(xì)，取細(xì)粉2 g，精密稱定，平行6份，按1.2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按1.2.3項(xiàng)下測(cè)定方法進(jìn)行檢測(cè)，考察重現(xiàn)性。

1.3.6 加樣回收率試驗(yàn) 取黃芪泡騰片細(xì)粉1 g，精密稱定，平行9份，另取配制成一定濃度的黃芪甲苷對(duì)照品溶液，分別精密移取相當(dāng)于樣品中黃芪甲苷量的80%、100%、120%的黃芪甲苷對(duì)照品溶液各3份加入樣品中，制備加樣回收供試品液，按1.2.3項(xiàng)下測(cè)定方法進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算回收率。

1.3.7 樣品含量測(cè)定 分別取3個(gè)批號(hào)（120302、120909、120404）的黃芪精泡騰片細(xì)粉2 g，精密稱定，每個(gè)批號(hào)平行2份，按1.2.2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行制備，按1.2.3項(xiàng)下測(cè)定方法進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算黃芪甲苷的含量。

2 結(jié) 果

2.1 專屬性試驗(yàn)結(jié)果 陰性制劑在黃芪甲苷的保留時(shí)間處無干擾，見圖1、2、3。

圖1 黃芪甲苷對(duì)照品

圖2 黃芪泡騰片供試品

圖3 黃芪泡騰片陰性制劑

2.2 線性關(guān)系考察結(jié)果 黃芪甲苷為1.112～6.672 μg時(shí)呈良好的線性關(guān)系。見表1。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果

2.3 精密度試驗(yàn)結(jié)果 連續(xù)進(jìn)樣6針，RSD為0.54%，本方法精密度良好。見表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 12 h內(nèi)峰面積對(duì)數(shù) RSD為0.20%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果 平行測(cè)定6份，結(jié)果黃芪甲苷含量為0.0977%，RSD為1.42%，表明該方法重現(xiàn)性好。見表4。

表4 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

2.6 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 加樣回收率為 97%～103%，平均回收率為99.56%，RSD為1.67%，該含量測(cè)定方法的回收率較好。見表5。

表5 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.7 樣品含量測(cè)定結(jié)果 3批樣品的每片含黃芪甲苷的含量均在2.00 mg以上，可作為制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的參考。見表6。

表6 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討 論

黃芪甲苷紫外吸收弱，僅在末端有弱吸收，參照藥典中黃芪項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，采用HPLC-ELSD法選擇合適的流動(dòng)相及檢測(cè)器參數(shù)?！吨腥A人民共和國藥典》中黃芪藥材的含量測(cè)定方法，樣品處理復(fù)雜，而黃芪泡騰片中黃芪是經(jīng)過加工制成的，對(duì)有效成分進(jìn)行了富集，因而處理簡單。

黃芪單方或復(fù)方中黃芪甲苷的含量測(cè)定方法均有文獻(xiàn)報(bào)道，早期有薄層掃描法等，近幾年均采用HPLCELSD法。流動(dòng)相有甲醇與水或乙腈和水，經(jīng)比較本制劑采用乙腈與水作為流動(dòng)相。有研究報(bào)道各方法中柱溫有30、35、40℃，漂移管的溫度也從65～100℃不等[5-12]。經(jīng)過試驗(yàn)，本制劑柱溫采用30℃，漂移管溫度80℃，氮?dú)庾鳛檩d氣，流速2.7 L/mim，黃芪甲苷峰形好，與其他成分有良好的分離度。樣品處理方法中采用氨試液將其他皂苷轉(zhuǎn)化為黃芪甲苷，也在一定程度上去除了干擾。

黃芪泡騰片為8類新藥，國內(nèi)尚未見同品種劑型上市，經(jīng)試驗(yàn)優(yōu)選了樣品的處理方法及色譜條件的參數(shù)，為控制黃芪泡騰片中活性成分黃芪甲苷的含量提供了檢測(cè)依據(jù)。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.21.039

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1009-5519（2015）21-3302-03

2015-06-13）

金平（1985-），女，江蘇南京人，中藥師，主要從事中藥調(diào)配工作；E-mail：guoguo_091113@163.com。