王書玉 竇佳 欒爽 董莉 董煜 錢小平

復方氨酚烷胺制劑中人工牛黃的薄層鑒別

王書玉 竇佳 欒爽 董莉 董煜 錢小平

目的探討復方氨酚烷胺制劑人工牛黃中的膽紅素薄層鑒別方法。方法將供試液點于硅膠 G 薄層板上, 以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶1∶0.5)為展開劑展開, 晾干, 置日光下檢視。結果供試品色譜中, 在與對照品相應的位置上均顯示相同顏色的斑點。253批復方氨酚烷胺制劑中, 有1批在與對照品及對照藥材色譜相應的位置上, 無黃色斑點, 未檢出膽紅素；若采用原標準中人工牛黃鑒別方法對該批樣品進行鑒別, 呈正反應。結論薄層鑒別法鑒別復方氨酚烷胺制劑人工牛黃中的膽紅素重復性好、專屬性強, 可作為復方氨酚烷胺制劑中人工牛黃的鑒別方法。

復方氨酚烷胺制劑; 膽紅素; 薄層鑒別

復方氨酚烷胺制劑包括復方氨酚烷胺片、復方氨酚烷胺膠囊、小兒復方氨酚烷胺片及復方氨酚烷胺顆粒, 其主成分種類(對乙酰氨基酚、鹽酸金剛烷胺、馬來酸氯苯那敏、咖啡因、人工牛黃)、配比(125∶50∶1∶7.5∶5)均一致。其中對乙酰氨基酚能抑制前列腺素合成, 有解熱鎮(zhèn)痛的作用；金剛烷胺可抗“亞-甲型”流感病毒, 抑制病毒繁殖；咖啡因為中樞興奮藥, 能增強對乙酰氨基酚的解熱鎮(zhèn)痛效果, 并能減輕其他藥物所致的嗜睡、頭暈等中樞抑制作用；馬來酸氯苯那敏為抗過敏藥, 能減輕流涕、鼻塞、打噴嚏等癥狀；人工牛黃具有解熱、鎮(zhèn)驚作用。上述諸藥配伍制成復方, 可增強解熱、鎮(zhèn)痛效果, 解除或改善感冒所致之各種癥狀, 主要用于緩解普通感冒及流行性感冒引起的發(fā)熱、頭痛、鼻塞、咽痛等癥狀, 也可用于流行性感冒的預防和治療。國內共有132家藥廠生產該品種的各種制劑, 為國內應用范圍最廣的抗感冒藥之一。

為更好地控制產品質量, 作者采用薄層鑒別法鑒別人工牛黃中的膽紅素, 該方法重復性好、專屬性強, 簡便高效,結果準確可靠。

1 材料與方法

1.1 材料 儀器：薄層數(shù)碼成像系統(tǒng)(visualizer, 瑞士CAMAG公司), BP211D 電子天平(Sartorius 公司)。試劑：所用試劑石油醚(30～60℃)、環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲醇、冰醋酸、甲苯、三氯甲烷、甲酸乙酯、甲酸等(均購自安徽安特生物化學股份有限公司)均為分析純。柱層析硅膠 G、國產硅膠G 預制板(均購自青島海洋化學有限公司)及進口硅膠G 預制板(購自美國Merck 公司)。人工牛黃對照藥材(121197-200903)、膽紅素對照品(100077-200805)(均購自中國藥品生物制品檢定研究院)；復方氨酚烷胺片樣品128 批, 復方氨酚烷胺膠囊樣品110 批, 小兒復方氨酚烷胺片樣品7批及復方氨酚烷胺顆粒樣品8批, 共計253批供試品。

1.2 供試品溶液的制備 分別取復方氨酚烷胺片10片、復方氨酚烷胺膠囊10粒、小兒復方氨酚烷胺片10片及復方氨酚烷胺顆粒10袋, 混勻, 研細, 稱取細粉(相當于人工牛黃30 mg), 加氯仿20 ml超聲提取, 過濾, 濾紙和濾渣用少量氯仿洗滌, 合并濾液和洗液, 室溫揮干, 殘渣用氯仿2 ml攪拌使膽紅素溶解并迅速過濾, 濾紙和濾渣用1 ml氯仿洗滌仍迅速過濾, 合并濾液和洗液作為供試品溶液(避光, 臨用新制)。

1.3 對照藥材及對照品溶液制備 取人工牛黃對照藥材10.12 mg, 加氯仿1 ml, 超聲處理 10 min, 靜置, 取上清液作為人工牛黃對照藥材溶液；另取膽紅素對照品21.33 mg, 加氯仿10 ml溶解, 作為膽紅素對照品溶液(避光, 臨用新制)。

1.4 空白輔料溶液的制備 選取處方中幾種最常用輔料：滑石粉、硫脲、淀粉、糊精、羧甲淀粉鈉、十二烷基磺酸鈉、吐溫-80、硬脂酸鎂、蔗糖、微晶纖維素、二氧化硅, 稱取適量(約相當于3片量), 研細, 按“1.2”項下的處理方法制備,作為空白輔料溶液。

1.5 陰性對照溶液的制備 依照處方配比, 稱取對乙酰氨基酚、鹽酸金剛烷胺、馬來酸氯苯那敏、咖啡因配制成缺少人工牛黃的陰性樣品, 研細, 按“1.2”項下的處理方法制備,作為陰性對照溶液。

1.6 試驗方法 照薄層色譜法(中國藥典2010版二部附錄ⅤB)試驗, 吸取四種制劑的供試品溶液、空白輔料溶液、陰性對照溶液及人工牛黃對照藥材、對照品溶液各10 μl, 分別點于同一硅膠 G 薄層板上, 以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶1∶0.5)為展開劑, 展開, 取出, 晾干, 立即檢視。

2 結果

置日光下檢視, 供試品色譜中, 在與對照品及對照藥材色譜相應的位置上, 顯相同的黃色斑點；空白輔料無干擾；陰性對照無干擾, 見圖1。4種制劑應用本方法主斑點均獲得理想Rf值。253批復方氨酚烷胺制劑中, 有1批在與對照品及對照藥材色譜相應的位置上, 無黃色斑點, 未檢出膽紅素；若采用原標準中人工牛黃鑒別方法對該批樣品進行鑒別,呈正反應。

圖1 4種制劑TLC色譜圖(立即檢視)

3 討論

目前復方氨酚烷胺制劑中對乙酰氨基酚、鹽酸金剛烷胺、馬來酸氯苯那敏、咖啡因質量基本穩(wěn)定, 只是人工牛黃存在問題較大, 因為人工牛黃價格昂貴, 且為動物藥, 成分繁多,質量控制復雜；而現(xiàn)行標準中, 復方氨酚烷胺片［1］、復方氨酚烷胺膠囊［2］僅對人工牛黃中的膽酸進行化學鑒別, 小兒復方氨酚烷胺片［3］、復方氨酚烷胺顆粒［4］僅對膽酸、豬去氧膽酸進行薄層鑒別, 未對人工牛黃中價格較貴、治療效果明顯的膽紅素進行控制, 給企業(yè)在生產中弄虛作假提供可乘之機, 其手法十分巧妙, 用膽酸代替人工牛黃, 鑒別實驗卻仍可成正反應, 采用現(xiàn)行藥品標準檢驗很難發(fā)現(xiàn)。以此不僅蒙騙消費者, 尚且能逃過監(jiān)管機構的監(jiān)督。因此, 制定檢驗方法,修訂藥品質量標準, 對于確保人民群眾的用藥安全有效非常必要。

3.1 樣品前處理 復方氨酚烷胺制劑處方中對乙酰氨基酚占比最大, 人工牛黃占比較小, 前者是后者的25倍, 兼之其他幾種組分的干擾, 使直接點樣時展開斑點拖尾嚴重且膽紅素濃度太低斑點不清晰；膽紅素見光受熱均易氧化, 在酸液中亦容易降解, 不溶于水, 溶于苯、氯仿、氯苯、二硫化碳及堿液中, 微溶于乙醇、乙醚, 作者嘗試幾種不同前處理［5,6］方法對樣品進行前處理, 以期起到既使膽紅素穩(wěn)定又利于濃縮點樣的目的。最終采取靜置揮干氯仿進行濃縮, 加少量氯仿溶解并過濾以除去干擾, 展開效果較好。同時整個操作過程注意避光。

3.2 展開劑的選擇 作者參考文獻［6-9］分別采用環(huán)己烷:乙酸乙酯∶甲醇∶冰醋酸(10∶3∶0.1∶0.1)、甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶1∶0.5)、石油醚(30～60℃)-甲苯-冰醋酸(15∶5∶0.5)、石油醚(30～60℃)-三氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸(20∶3∶5∶1)等展開系統(tǒng)展開。最終以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶1∶0.5)為展開劑, Rf值適中, 斑點清晰無干擾, 重現(xiàn)性好。

3.3 薄層板的選擇 分別采用自制硅膠 G 薄層板、國產硅膠G 預制板及進口硅膠G 預制板進行展開實驗, 自制硅膠 G薄層板及國產硅膠G 預制板均有拖尾現(xiàn)象, 且在同一塊板上進行多批檢樣時易出現(xiàn)“邊緣效應”；進口硅膠G 預制板斑點清晰無拖尾, 在同一塊板上進行多批檢樣時無“邊緣效應”, Rf值均勻, 穩(wěn)定性好, 能夠適應大批量檢驗工作需要。

［1］國家藥典委員會.化學藥品地方標準上升國家標準.第16冊.北京:化學工業(yè)出版社, 2002:278-279.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準(二部).第5冊. 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會, 1996:60-61.

［3］國家藥典委員會.化學藥品地方標準上升國家標準.第13冊.北京:化學工業(yè)出版社, 2002:128.

［4］國家藥典委員會.化學藥品地方標準上升國家標準.第3冊.北京:化學工業(yè)出版社, 2002:203-204.

［5］王文瓊, 劉穎, 高華宏, 等.牛黃解毒片等四種制劑中牛黃的薄層鑒別.湖北中醫(yī)雜志, 2004, 26(2):51.

［6］侯惠嬋, 汪杰, 顧利紅.猴棗牛黃散中牛黃的質量控制研究.中藥新藥與臨床藥理, 2007, 18(2):123-126.

［7］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部).北京:中國醫(yī)藥科技出版社, 2010:6.

［8］朱天明, 姚英.薄層色譜法鑒別感冒通片中人工牛黃.江蘇藥學與臨床研究, 2002, 10(2):11-13.

［9］蘭婉玲, 張羅紅, 徐燕.牛黃解毒片中人工牛黃的薄層鑒別.中藥與臨床, 2010, 1(3):26.

Thin-layer chromatography of artificial bezoar in compound acetaminophen alkyl amine preparations

WANG Shu-yu, DOU Jia, LUAN Shuang, et al.Dalian City Institute for Drug Control, Dalian 116000, China

ObjectiveTo investigate the bilirubin thin-layer chromatography of artificial bezoar in compound acetaminophen alkyl amine preparations.MethodsThe test liquid was dropped on a silica gel G thin layer plate with methylbenzene-ethyl acetate-glacial acetic acid (10∶1∶0.5) as the developing solvent.It was inspected under sunlight after dried in air.ResultsThe chromatogram of the test liquid contained the same color spots as the reference chromatogram.Among 253 batches of compound acetaminophen alkyl amine preparations, there was 1 batch without yellow spots and no bilirubin on corresponding location of reference substance and reference chromatogram.This sample could show positive reaction under chromatography by primary standard for identifying artificial bezoar.ConclusionThin-layer chromatography has good repeatability and high specificity for identifying bilirubin in artificial bezoar among compound acetaminophen alkyl amine preparations.It can be used as the identification method for artificial bezoar in compound acetaminophen alkyl amine preparations.

Compound acetaminophen alkyl amine preparations; Bilirubin; Thin-layer chromatography

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.04.181

2014-10-30］

116000 大連市藥品檢驗所