陳 靜，李 威，王寬宇，孔祥定

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱150040)

腹部手術(shù)后病人由于受到麻醉、手術(shù)刺激等因素的影響，常導(dǎo)致胃腸道失去正常蠕動(dòng)功能，繼而產(chǎn)生腹脹、惡心嘔吐、不排氣等并發(fā)癥。因此，腹部術(shù)后胃腸功能的盡早恢復(fù)在普外科臨床中具有重要意義。近些年針刺治療在此方面的應(yīng)用較多，多數(shù)從患者排氣、排便及腸鳴音恢復(fù)情況來判定療效，缺少更為客觀的數(shù)據(jù)支持。本研究通過建立大鼠腹部手術(shù)后的模型，研究胃腸道內(nèi)容物的推進(jìn)情況及胃泌素(GAS)的分泌情況，初步探討針刺治療的療效及可能的作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 主要試劑

精確配制1.0%的酚紅溶液，以1 ml 的梯度從0 ～9 ml 各分置10 管，然后依次加入0.1%NaOH 溶液使各管容量都達(dá)到10 ml，充分混勻后。用752 分光光度計(jì)于560 nm 波長處測光密度，繪制成酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線備用。大鼠胃泌素定量檢測試劑盒(由北京方程生物提供)。

1.2 酚紅糊劑的制備

用1.0%酚紅溶液按每15 ml 加1 g 面粉的比例加熱，調(diào)成糊劑，另備10% NaOH，0.15 mmol/LBa(OH)，5%硫酸鋅。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康成年SD 大鼠(由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)60 只，雌雄各半，體重為220 ～250 g。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物造模

將60 只健康成年SD 大鼠按完全隨機(jī)法將其分為3 組，每組20 只，即空白組、模型組、實(shí)驗(yàn)組。模型組與實(shí)驗(yàn)組術(shù)前12 h 禁食水，常規(guī)脫毛，10%水合氯醛按0.33 ml/100 g 行腹腔注射麻醉［1］。行無菌開腹手術(shù)，觀察兩組大鼠胃腸解剖結(jié)構(gòu)、選取解剖后腸管顏色、張力均正常、無腹水及占位的實(shí)驗(yàn)大鼠作為實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物，行盲腸切除術(shù)后常規(guī)間斷縫合關(guān)腹，形成大鼠盲腸術(shù)后動(dòng)物模型。

2.2 實(shí)驗(yàn)步驟及指標(biāo)檢測

2.2.1 酚紅濃度的比較 大鼠造膜成功1 h 后麻醉清醒，3 組均在清醒狀態(tài)下給予酚紅糊劑灌胃，按1 ml/100 g體重灌胃。實(shí)驗(yàn)組灌胃后立即捆綁固定，行針刺治療，取穴根據(jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》［2］大鼠穴位定位方法，取雙側(cè)“足三里”、“上巨虛”兩穴進(jìn)行針刺。

將擬針刺部位進(jìn)行常規(guī)消毒，用0.5 寸毫針直刺，采用平補(bǔ)平瀉手法，留針30 min，6 h 重復(fù)治療1 次。術(shù)后12 h 3 組大鼠均斷頭處死，立即剖腹，分別結(jié)扎幽門、回盲部，然后取出胃及小腸，平鋪于玻璃板上，按六等分結(jié)扎小腸，依次截?cái)?，將截?cái)嗟男∧c組織分別放在刻度離心管內(nèi)，用6 ml 蒸餾水多次沖洗腸內(nèi)容物，然后在各管內(nèi)分別加入0.15 mmol/L 的氫氧化鋇2 ml，充分混勻后靜置3 ～5 min，再各加5%硫酸鋅2 ml，用力搖勻后3000 rpm 離心10 min，各取上清液4 ml，加10%氫氧化鈉0.5 ml 混勻后檢測560 nm 光密度值，對照酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線，查得各段小腸內(nèi)的酚紅濃度。

2.2.2 胃粘膜組織的制備 在胃竇部分離出胃粘膜組織約1.0 g，取材后立即用0.9%氯化鈉清洗血液及殘留物，清洗后將備檢組織置于1 ml 0.9%氯化鈉溶液中煮沸3 min，冷卻，加入1 mmol/L 的冰醋酸0.5 ml，于勻漿器中勻漿，再用1 mmol/L 的碳酸氫鈉0.5 ml中和。3500 rpm 低溫離心30 min。取上清液1 ml置于-80℃冰箱保存。

2.2.3 大鼠胃粘膜組織中胃泌素的檢測 采用Elisa法檢測大鼠胃黏膜組織中胃泌素(GAS)的水平，操作步驟按照大鼠胃泌素ELISA kit 試劑盒(北京方程生物)說明操作。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS16.0 軟件分析，數(shù)據(jù)比較采用t 檢驗(yàn)，以±s 表示。

3 結(jié)果

3.1 不同處理組大鼠各小腸分段酚紅濃度比較

空白組大鼠小腸酚紅濃度峰值主要集中在末段(5 ～6 段)小腸，模型組在近段(1 ～2)小腸就出現(xiàn)峰值，實(shí)驗(yàn)組的峰值主要出現(xiàn)在中末段(4 ～6 段)小腸。實(shí)驗(yàn)組較模型組同段腸管內(nèi)酚紅濃度比較具有顯著性差異(P ＜0.05)，而實(shí)驗(yàn)組與空白組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。表明了針刺足三里、上巨虛對大鼠腹部術(shù)后腸蠕動(dòng)有明顯的促進(jìn)作用。見表1。

表1 各組大鼠各分段小腸酚紅濃度的比較(±s)

表1 各組大鼠各分段小腸酚紅濃度的比較(±s)

注:與模型組比較，aP ＜0.05;與空白組比較，bP ＞0.05。

組別 n 123456空白組 20 0.045 ±0.010 0.122 ±0.027 0.289 ±0.059 0.986 ±0.021 2.985 ±0.602 3.310 ±0.686模型組 20 3.191 ±0.632 2.441 ±0.507 1.697 ±0.034 0.599 ±0.123 0.110 ±0.025 0.054 ±0.012實(shí)驗(yàn)組 20 0.051 ±0.011ab 0.136 ±0.288ab 0.301 ±0.063ab 2.745 ±0.551ab 3.401 ±0.687ab 2.150 ±0.438ab

3 組大鼠胃粘膜組織GAS 含量見表2，由表2 可看出，實(shí)驗(yàn)組與空白組胃粘膜組織中GAS 含量無顯著性差異(P ＞0.05)，而實(shí)驗(yàn)組較模型組GAS 含量顯著增高(P ＜0.05)。

表2 各組大鼠胃粘膜組織GAS 含量的比較 (±s)

表2 各組大鼠胃粘膜組織GAS 含量的比較 (±s)

注:與模型組比較，aP ＜0.05;與空白組比較，bP ＞0.05。

組別 n GAS 含量(pg/ml)20 28.05 ±5.62模型組 20 19.14 ±3.86實(shí)驗(yàn)組 20 27.65 ±5.64空白組ab

3.2 不同組大鼠胃黏膜組織中胃泌素水平比較

4 討論

腹部術(shù)后胃腸功能的盡早恢復(fù)能顯著降低術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生率，是腹部術(shù)后患者康復(fù)的關(guān)鍵所在。然而導(dǎo)致術(shù)后胃腸功能紊亂的原因是復(fù)雜的，解剖關(guān)系的改變、部分神經(jīng)支配被阻斷、麻醉刺激、胃腸神經(jīng)激素調(diào)節(jié)紊亂等是造成持續(xù)性功能紊亂的主要原因。

本實(shí)驗(yàn)通過對比各組大鼠腸內(nèi)容物的推進(jìn)速度及胃粘膜組織中GAS 含量來驗(yàn)證針刺足三里、上巨虛的療效。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可以明顯看出，實(shí)驗(yàn)組較模型組同段腸管內(nèi)酚紅濃度比較具有顯著性差異(P ＜0.05)，而實(shí)驗(yàn)組與空白組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。進(jìn)一步驗(yàn)證了針刺足陽明胃經(jīng)的足三里、上巨虛兩穴位能夠促進(jìn)腹部術(shù)后胃腸功能的恢復(fù)，并能調(diào)節(jié)胃泌素的分泌，這可能是其作用機(jī)制所在。通過本實(shí)驗(yàn)，筆者認(rèn)為針刺可作為腹部術(shù)后胃腸功能紊亂的預(yù)防手段，即符合中醫(yī)治未病的思想，又與其他文獻(xiàn)研究結(jié)果相一致［3］。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為:“六腑以通為用，以降為順?！毙g(shù)后促進(jìn)胃腸功能的恢復(fù)，要使機(jī)體六腑通暢。而外科手術(shù)擾動(dòng)腸曲，腸曲蠕動(dòng)緩弱，導(dǎo)致濁氣不降、清氣不升、胃失和降［4］。汪中舉［5］認(rèn)為，由于手術(shù)創(chuàng)傷，損傷血絡(luò)，淤血?dú)鉁瓪獠煌?，以致脾胃升降功能失調(diào)、清氣不升、濁氣不降。使脾胃運(yùn)化不利，傳化通降失司。故中醫(yī)治療著重升清降濁、調(diào)理脾胃，使六腑通和?！鹅`樞》曰:“胃合于三里，大腸合于巨虛上廉?！弊闳餅樽汴柮魑附?jīng)的合穴、胃下合穴，為肚腹疾病常用腧穴;上巨虛為大腸經(jīng)下合穴，均是消化系統(tǒng)功能調(diào)節(jié)必不可少的重要穴位。本研究從“合治內(nèi)腑”的原則出發(fā)，針刺此兩穴，調(diào)節(jié)胃腸經(jīng)氣，疏通經(jīng)絡(luò)、調(diào)和臟腑、升清降濁。

近年來“胃腸學(xué)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)控”學(xué)說逐漸受到關(guān)注，也成為學(xué)者們研究針刺調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力作用機(jī)制的新熱點(diǎn)。針刺可調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸激素的分泌，抑制胃酸的分泌［6］，促進(jìn)胃泌素和胃動(dòng)素的分泌［7］。有研究表明，針刺足三里對胃腸功能正常及功能低下的大鼠均有明顯的促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)的作用［8］。而本研究結(jié)果顯示針刺足三里、上巨虛可調(diào)節(jié)腹部術(shù)后大鼠GAS 的分泌。

根據(jù)以上的研究結(jié)果，本研究顯示針刺足三里、上巨虛對大鼠腹部術(shù)后胃腸功能的恢復(fù)具有明顯的促進(jìn)作用，如在臨床應(yīng)用可預(yù)防術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生，促進(jìn)病人恢復(fù)，且不受腹部術(shù)后禁食水的限制，應(yīng)用前景廣泛，但其詳細(xì)的作用機(jī)制有待于進(jìn)一步的研究。

［1］ 鄧晶晶，袁青.針刺對術(shù)后胃腸Cajal 間質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響及機(jī)制研究［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012，30(5):1162

［2］ 李忠仁.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)［M］.北京:中國中醫(yī)藥出版社，2003:327

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［6］ 李宏軍，李國萍.針刺治療功能性消化不良的療效觀察［J］.中國針灸，2004，24(2):88-90

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