蘭濤，崔乃強

(1滄州市人民醫(yī)院，河北滄州061001；2天津市中西醫(yī)結合急腹癥研究所)

細胞因子誘導的殺傷細胞在腫瘤生物治療中的應用進展

蘭濤1，崔乃強2

(1滄州市人民醫(yī)院，河北滄州061001；2天津市中西醫(yī)結合急腹癥研究所)

以自體細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK細胞)為主體的腫瘤過繼免疫治療已逐漸成為一種重要的腫瘤生物治療方法其制備方便，效果可靠。本文就其生物學特性、制備及應用方法、作用機制及臨床應用效果作一綜述。

腫瘤；細胞治療；生物治療；細胞因子誘導的殺傷細胞

細胞免疫治療是一種新興的、具有顯著療效的腫瘤治療模式，它是運用生物技術和生物制劑分離、體外激活并回輸患者自身或者同種異體的腫瘤特異性或者非特異性殺傷細胞的一種治療方法。與傳統的腫瘤治療方法相比，其不僅直接發(fā)揮抗腫瘤作用，而且更加專注于糾正機體的細胞免疫功能低下，促進宿主抗腫瘤免疫功能。過繼免疫治療對于實體腫瘤和血液腫瘤都是很有希望的治療方法，它的目的是恢復及增強免疫系統對腫瘤細胞的識別功能。以自體細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK細胞)為主體的腫瘤過繼免疫治療已逐漸成為腫瘤生物治療中最活躍的應用與研究領域之一，近年來研究成果較多。現綜述如下。

1 CIK細胞的生物學特性

2 自體CIK 細胞的制備與輸注方法

3 CIK細胞的作用機制及特點

CIK細胞介導的腫瘤靶細胞溶解作用機制被認為是由胞質顆粒作為外源性的局部定向的細胞溶解毒素，通過細胞膜而滲透進靶細胞內從而引起靶細胞的溶解?？笴D3-Mab或腫瘤細胞可致CIK細胞脫顆粒，但是這種作用的前提是必須靠黏附分子LAF-l及其配體ICAM-1相互作用使CIK細胞與靶細胞黏附在一起。LAF-1與其配體ICAM-1的單克隆抗體可阻斷CIK細胞的殺瘤作用，而抗CD3-Mab不能阻斷。雖然CIK細胞表達TCR-α/B表面分子，但是TCR-α/B的單克隆抗體并不能阻斷CIK細胞的作用，其作用也不是抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用，因其不表達CD16表面分子。

生物免疫治療癌癥的主要困難是許多腫瘤細胞表達FasL，可誘導免疫效應細胞的凋亡，從而降低細胞免疫治療的成功率。此外，腫瘤周圍的微環(huán)境存在的免疫抑制。最后，腫瘤中央和周圍的免疫耐受共同協力作用滅活和(或)消滅對腫瘤有殺傷作用的免疫效應細胞。Vemeris等[5]研究發(fā)現CIK細胞對FasL所致的凋亡有對抗作用，因為其有抗凋亡基因的表達，當蛋白合成受抑時，CIK細胞的抗凋亡能力下降，容易被FasL誘導凋亡。CIK細胞是在體外培養(yǎng)時獲得這種能力的，這些結果提示CIK細胞免疫治療適合FasL陽性腫瘤[6]。

CIK細胞對多種腫瘤細胞包括急性髓系白血病、慢性骨髓性白血病、B-和T-細胞淋巴瘤具有明顯的細胞毒功能[7～10]。像CD3細胞一樣，CIK細胞同樣表達T細胞相關抗原，而且可以迅速地擴大培養(yǎng)。T細胞受體分子的表達對CIK細胞識別腫瘤細胞來說不是一個先決條件，此外，CIK細胞的細胞毒作用不會受到T細胞受體或MHC Ⅰ類或Ⅱ類分子抗體掩蔽的影響。這表明CIK細胞對腫瘤細胞有直接殺傷作用，不需要以靶細胞MHC分子為介導[11]。CIK細胞不參與抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用(ADCC)。由于CIK細胞膜缺乏CD16，導致其對一些免疫藥物耐藥，包括環(huán)孢素A 和FK506[12]。CIK細胞對化療藥物敏感，極易被化療藥物殺滅，故臨床應用時限制了化療和CIK細胞治療的同時應用。有研究將MDR1的重組質粒轉染CIK，觀察CIK細胞耐藥性，結果顯示轉染后CIK細胞MDR1基因的轉錄產物mRNA陽性，P-gp的表達較轉染前明顯增高，且對順鉑的耐藥性明顯提高。故MDR1基因轉入CIK細胞后，細胞獲得了多藥耐藥性，同時保持了對原有腫瘤細胞的殺傷活性，為化療同時進行CIK細胞治療提供了實驗依據[13]。另外，CIK細胞通過識別NKG2D配體發(fā)揮殺傷腫瘤細胞能力，NKG2D向CIK細胞傳遞活化信號，使CIK細胞具有攻擊靶細胞的能力。NKG2D能增強CIK細胞的細胞毒性和促進CIK細胞增殖，CIK細胞通過NKG2D發(fā)揮細胞毒活性[14]。

4 CIK細胞的臨床應用

大量研究顯示惡性腫瘤根治性切除術后，輔助CIK免疫治療是可以獲益的[15]。有研究顯示肝癌根治性切除術后或微創(chuàng)術后的CIK輔助治療可以有效降低復發(fā)率和轉移率[16,17]。CIK細胞主要以非主要組織相容性復合體殺傷腫瘤細胞，因此對任何一種腫瘤均具有殺滅作用，無法進行手術、放療、化療的中晚期患者級放化療失敗的患者等均可以考慮行CIK維持治療，維持治療可以明顯改善患者的預后，獲益大小與回輸次數具有相關性[18]。

從20世紀90年代起，國內外主要采用患者自體的CIK細胞進行腫瘤治療。Schmidt-Wolf等[11]采用編碼IL-2基因的質粒載體轉染自體CIK細胞來治療實體瘤(轉移性腎癌、結腸癌、淋巴瘤)，CIK細胞毒活性明顯增強。Shi等[19]證實了自體CIK細胞在原發(fā)性肝癌的臨床Ⅰ期試驗中的安全性。最近，國外有報道thymoglobulin結合IFN-g和IL-2在擴大CIK細胞方面比CD3單克隆抗體更有效，CIK細胞結合甲狀腺球蛋白(TG)在殺死K562細胞方面比TG聯合抗CD3單克隆抗體更有效，并且可以釋放較大量的具有生物活性的IL-12p40[20]。在I期后續(xù)研究中，給5例放化療失敗的成年腫瘤患者注入了結合TG的CIK細胞，結果證明其安全無副作用。應該強調的是：功能性的含有TG的CIK細胞會危害有轉移性腫瘤的患者，因為會改變病情正在進展中的癌癥患者的免疫抑制機制。進一步研究發(fā)現，患者來源的CIK細胞只能表達較低水平的激活/抑制NK受體的作用和在體外實驗中較低的裂解活性。最近，CIK細胞的國際認證組織IRCC報道了426例患有肝癌、胃癌和復發(fā)性淋巴瘤的患者，通過輸入自體或異體移植CIK細胞治療的臨床試驗結果[21]，成功回訪并觀察到臨床反應的有384例，雖然腫瘤縮小的只有3例，但與未輸注CIK細胞的對照組相比，輸注CIK免疫治療的患者預后更好。在移植異基因造血干細胞后，一些輸入異體CIK細胞的患者會出現血液惡性腫瘤復發(fā)的情況。在劑量遞增的研究中，CIK細胞來自于通過最初的供體,擴展為具有抗CD43抗性、IFN-g和IL-2活性的細胞，作用于18例血液惡性腫瘤成年患者，在CIK輸注后的20個月隨訪當中，總生存期的平均值為28個月，有2例患者發(fā)生了急性移植物抗宿主病。值得一提的是，5例患者通過輸注CIK細胞治療病情獲得了長時間的緩解。效果比輸注同種異基因造血干細胞的患者還要好，在另一項研究中，輸注了CIK細胞的11例患者中，有3例接受同種異基因移植者完全康復。11例中觀察到4例急性移植物抗宿主病(1級和2級)，2例進展為慢性移植物抗宿主病[22]。

[3] Lirm YC， Hui KM． Cytokine-induced NK-like T cells： from bench to bedside[J]． J Biomed Biotechnol， 2010，2010(3)：435745．

[4] 艾軍，白引蒔，張超，等．CIK細胞的生物學特性及荷瘤鼠體內分布特點研究[J]．中國免疫學雜志，2010，26(7)：606-610．

[5] Wang ZH， Li H， Zhang CY， et al． Antitumor Immunity and vaccine effect induced by IL-12 sylnergizes B7-1 gene transfected cells[J]．Chin J Cancer Res， 2003，15(1)：5-8．

[6] Stasi A, Tey SK, Dotti G,et al. Inducible apoptosis as a safety switch for adoptive cell therapy[J]. N Engl J Med,2011,365(18):1673-1683 .

[9] Introna M, Borleri G, Conti E, et al. Repeated infusions of donor-derived cytokine-induced killer cells in patients relapsing after allogeneic stem cell transplantation: a Phase I study[J]. Haematologica,2007, 92(7):952-959 .

[10] Olioso P, Giancola R, Riti M, et al. Immunotherapy with cytokine induced killer cells in solid and hematopoietic tumours: a pilot clinical trial[J]. Hematol Oncol, 2009,27(3):130-139.

[11] Schmidt-Wolf IG, Negrin RS, Kiem HP, et al. Use of a SCID mouse/human lymphoma model to evaluate cytokine-induced killer cells with potent antitumor cell activity[J]. J Exp Med,1991, 174(1):139-149.

[13] Deng Q,Bai X,Xian X,et a1．Revemion of muhidmg resistance by ClK in K562/ADR ceils and its mechanism exploration[J]．Chin J Hematoline，2011,32(1)：52-56．

[15] Sangiolo D. Cytokine induced kifier cells as promising immunotherapy for solid tumors[J]． J Cancer, 2011,35(2)：363-368．

[16] Hui D,Qiang L, Jian W， et al． A randomized，controlled trial of postoperative adjuvant cytokine-induced killer cells immunelherapy after radical resection of hepatocellular carcinoma[J]． Dig Liver Dis， 2009,4l(1)：36-41．

[17] Weng DS， Zhou J， Zhou QM， et al． Minimally invasive treatment combined with cytokine-induced kiler cells therapy lower the shortterm recurrence ratea of hepatocellular carcinomas[J]．J Immunother，2008，31(1)：63-71．

[18] Liu L, Zhang W， Qi X, el al． Randomined study of autologous cytokine-induced killer cell immunotherapy in metastatic renal eareinom[J]．Clin Cancer Res， 2012,18(6)：1751-179．

[19] Shi M， Zhang B， Tang ZR， et al． Autologous cytokine-induced killer cell therapy in clinical trial phase I is safe in patients with primary hepatocellular carcinoma[J]．World J Gastroenterol， 2004，10(8)：1146-1151．

[20] Rutella S, Locatelli F, et al. Is there a role for Cytokin-induced killer cells in cancer immunotherapy[J]. Immuno-Therapy, 2012,4(9):867-869.

[21] Hontscha C, Borck Y, Zhou H, et al. Clinical trials on CIK cells: first report of the international registry on CIK cells (IRCC)[J]. J Cancer Res Clin Oncol,2011,137(2):305-310.

國家中醫(yī)藥管理局重點學科建設項目(201232)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.06.037

R730.5

A

1002-266X(2015)06-0095-03

2014-11-15)