郭旭光，鄭子棟，郭毅

(河南省食品藥品檢驗(yàn)所，鄭州 450003)

毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定達(dá)沙替尼原料藥中6種殘留溶劑

郭旭光，鄭子棟，郭毅

(河南省食品藥品檢驗(yàn)所，鄭州 450003)

目的 建立毛細(xì)管氣相色譜測(cè)定達(dá)沙替尼原料藥中吡啶、二氯甲烷、甲醇、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、乙醇6種有機(jī)溶劑殘留量的方法。方法 采用DB-624 (30 m×0.53 mm，3 μm)毛細(xì)管柱；氫火焰離子化檢測(cè)器；程序升溫：初始溫度25 ℃(維持13 min)，再以15 ℃·min-1升至150 ℃(維持5 min)，再以40 ℃·min-1升至220 ℃(維持5 min)；載氣為氮?dú)猓恢魉贋?.0 mL·min-1；進(jìn)樣口溫度：230 ℃；檢測(cè)器溫度：250 ℃；分流直接進(jìn)樣，以N，N-二甲基乙酰胺為溶劑，進(jìn)樣體積為0.5 μL。結(jié)果 6組分均能良好分離，6組分峰面積與濃度均呈良好的線性關(guān)系，其中吡啶、二氯甲烷、甲醇、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、乙醇的線性范圍分別為4.16～31.21 μg·mL-1(r=0.999 8)，12.12～90.92 μg·mL-1(r=0.999 4)，59.98～449.85 μg·mL-1(r=0.999 8)，18.16～136.19 μg·mL-1(r=0.999 3)，100.25～751.87 μg·mL-1(r=0.999 1)，100.30～752.28 μg·mL-1(r=0.999 9)，平均回收率為98.4%～101.3%(RSD=2.8%～5.0%)。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)單、靈敏、準(zhǔn)確，可用于測(cè)定達(dá)沙替尼原料藥中的殘留溶劑。

達(dá)沙替尼；殘留溶劑；色譜法，毛細(xì)管氣相

達(dá)沙替尼是一種新型ABL和Scr家族酪氨酸激酶抑制藥[1]，為對(duì)伊馬替尼耐藥的BCR/ABL陽(yáng)性白血病患者提供了一個(gè)有效的治療選擇[2]。本品在合成過(guò)程中溶劑有二氯甲烷和甲醇，結(jié)晶過(guò)程中溶劑有二甲亞砜和乙醇，起始原料還可能含有甲醇、吡啶、二甲基甲酰胺等殘留溶劑[3-6]。其中吡啶、二氯甲烷、甲醇、N，N-二甲基甲酰胺為第二類(lèi)有機(jī)劑，二甲亞砜和乙醇為第三類(lèi)有機(jī)溶劑，按《中華人民共和國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定均應(yīng)控制其殘留量[7]。氣相色譜同時(shí)測(cè)定達(dá)沙替尼原料藥中的上述6種殘留溶劑的方法未見(jiàn)報(bào)道，筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)采用毛細(xì)管氣相色譜直接進(jìn)樣測(cè)定了達(dá)沙替尼原料藥中上述6種殘留溶劑[8-12]。方法簡(jiǎn)單靈敏，快速準(zhǔn)確，結(jié)果可靠。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 6890N氣相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司)，氫火焰離子化檢測(cè)器，DB-624毛細(xì)管柱(30 m×0.53 mm，3 μm)。AL104分析天平(梅特勒-托利多公司，感量：0.1 mg)。

1.2 試藥 吡啶、 二氯甲烷、二甲亞砜、甲苯(分析純，均購(gòu)于天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司)，N，N-二甲基乙酰胺(分析純，天津市瑞金特化學(xué)品有限公司)，乙醇(分析純，北京化工廠)，甲醇(色譜純，默克公司)，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(色譜純，美國(guó)VBS公司)。達(dá)沙替尼原料藥(新鄉(xiāng)雙鷺?biāo)帢I(yè)有限公司，批號(hào)：20130701，20130702，20130703)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：DB-624 (30 m×0.53 mm，3 μm)毛細(xì)管色譜柱；載氣為高純氮；柱流速為2.0 mL·min-1；分流比：2：1；進(jìn)樣口溫度：230 ℃；氫火焰離子化檢測(cè)器溫度：250 ℃；程序升溫，初始溫度25 ℃(維持13 min)，再以15 ℃·min-1的升溫速率升至150 ℃(維持5 min)，再以40 ℃·min-1的升溫速率升至220 ℃(維持5 min)；進(jìn)樣量0.5 μL，自動(dòng)進(jìn)樣。

2.2 溶液的制備

2.2.1 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密稱(chēng)取甲苯約100 mg，置100 mL量瓶中，加N，N-二甲基乙酰胺稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2 對(duì)照品儲(chǔ)備液制備 精密稱(chēng)取吡啶208.07 mg、二氯甲烷606.10 mg、甲醇2 999.01 mg、N，N-二甲基甲酰胺907.93 mg、二甲亞砜5 012.43 mg和乙醇5 015.17 mg置50 mL量瓶中，加N，N-二甲基乙酰胺稀釋至刻度，搖勻，再精密量取1 mL，置20 mL量瓶中，加N，N-二甲基乙酰胺稀釋至刻度，搖勻作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.3 對(duì)照品溶液制備 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL、內(nèi)標(biāo)溶液1 mL置同一10 mL量瓶中，加N，N-二甲基乙酰胺稀釋至刻度，搖勻。

2.2.4 供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取本品1 g，置10 mL量瓶中，加N，N-二甲基乙酰胺適量，超聲使溶解，加內(nèi)標(biāo)溶液1.0 mL，加N，N-二甲基乙酰胺稀釋至刻度，搖勻。

2.3 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各0.5 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定各有機(jī)溶劑的分離度和柱效，結(jié)果見(jiàn)圖1，溶劑N，N-二甲基乙酰胺對(duì)各被測(cè)溶劑無(wú)干擾，被測(cè)溶劑的理論板數(shù)均應(yīng)>5 000，相鄰溶劑的分離度均>1.5。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn) 精密量取“2.2.3”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液0.5 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定各被測(cè)溶劑的峰面積，結(jié)果吡啶、二氯甲烷、甲醇、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜和乙醇峰面積的RSD分別為1.85%，1.16%，0.58%，1.04%，0.69%，1.47%。

1.甲醇；2.二氯甲烷；3.乙醇；4.甲苯；5.吡啶；6.N，N-二甲基甲酰胺；7.二甲亞砜

圖1 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)各待測(cè)溶劑分離色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察 精密量取“2.2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品儲(chǔ)備液0.2，0.5，0.8，1.0，1.2，1.5 mL，分別置10 mL量瓶中，各加內(nèi)標(biāo)液1.0 mL，加N，N-二甲基乙酰胺稀釋至刻度，搖勻，得線性范圍系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。取系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)樣0.5 μL，記錄色譜圖，以溶液濃度X(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)峰面積比值(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.6 檢測(cè)限與定量限 取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用N，N-二甲基乙酰胺分別稀釋制成系列濃度的溶液，照上述的色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，以S/N約為3計(jì)算檢測(cè)限，結(jié)果吡啶、二氯甲烷、甲醇、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、乙醇的檢測(cè)限分別為0.042，1.21，0.05，0.004 5，0.05，0.09 μg·mL-1；以S/N≥10計(jì)算定量限，結(jié)果吡啶、二氯甲烷、甲醇、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、乙醇定量限分別為0.2，4.6，1.2，0.007，0.1，1.5 μg·mL-1。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取本品(批號(hào)：20130701)適

量，照“2.2.4”項(xiàng)下制備供試品溶液，共6份，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，檢出本品中含吡啶、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜和乙醇分別為：0.001 72%，0.038%，0.054%，0.1%，RSD分別為：0.9%，1.1%，0.2%，0.8%。二氯甲烷和甲醇均未檢出。

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取“2.2.3”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，在室溫下分別于0，2，4，6，12，24 h后，按上述色譜條件，進(jìn)樣測(cè)定，吡啶、二氯甲烷、甲醇、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、乙醇峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積比值RSD分別為：0.3%，0.8%，1.4%，1.3%，2.4%，1.2%。表明溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 耐用性實(shí)驗(yàn) 分別對(duì)載氣流速、初始溫度、進(jìn)樣口及檢測(cè)器溫度進(jìn)行了考察，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明載氣流速、初始溫度、進(jìn)樣口及檢測(cè)器溫度微小變動(dòng)對(duì)殘留溶劑的測(cè)定沒(méi)有影響，殘留溶劑峰的分離度均符合要求，該色譜條件耐用性良好。

2.10 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 分別精密稱(chēng)取本品(批號(hào)：20130701)9份(約1.0 g)，分別置10 mL量瓶中，加N，N-二甲基乙酰胺適量使溶解，再分別加“2.2.1”項(xiàng)下的內(nèi)標(biāo)溶液1.0 mL；取3份分別加“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液的0.5 mL，再加N，N-二甲基乙酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為殘留溶劑限量濃度的50%；另取3份加“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液的1.0 mL溶液，再加N，N-二甲基乙酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為殘留溶劑限量濃度的100%溶液；另取3份加“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液的1.5 mL溶液，再加N，N-二甲基乙酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為殘留溶劑限量濃度的150%溶液。取上述溶液，照“2.5”項(xiàng)下的方法測(cè)定含量，計(jì)算回收率和RSD，結(jié)果測(cè)得各溶劑的平均回收率分別為：吡啶98.4%、二氯甲烷99.4%、甲醇100.5%、N，N-二甲基甲酰胺101.3%、二甲亞砜99.7%、乙醇98.8%，RSD分別為3.9%，4.1%，3.2%，5.0%，4.7%，2.8%。

2.11 樣品測(cè)定 分別取“2.2.3”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液和“2.2.4”項(xiàng)下供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積比計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2，樣品圖見(jiàn)圖2。

表1 線性范圍與回歸方程n=6

表2 達(dá)沙替尼樣品中殘留溶劑檢測(cè)結(jié)果 %，n=2

1.乙醇；2.甲苯；3.吡啶；4.N，N-二甲基甲酰胺；5.二甲亞砜

圖2 供試品溶液氣相色譜圖

3 討論

3.1 溶劑的選擇 達(dá)沙替尼在水中為極微溶，在二甲基乙酰胺中易溶，且二甲基乙酰胺能與本研究被測(cè)溶劑混溶，本研究色譜條件下二甲基乙酰胺峰與上述被測(cè)溶劑峰分離完好，故選擇二甲基乙酰胺作為溶劑。

3.2 氣化溫度的選擇 本實(shí)驗(yàn)被測(cè)殘留溶劑中甲醇、二氯甲烷和乙醇沸點(diǎn)較接近，均在50 ℃左右，甲苯、吡啶、二甲亞砜、N，N-二甲基甲酰胺和N，N-二甲基乙酰胺沸點(diǎn)較高均在100～200 ℃之間，選擇230 ℃為進(jìn)樣口溫度使待測(cè)組分能夠迅速氣化，預(yù)防拖尾改善峰形，且不會(huì)分解，達(dá)到較好的分離效果。

3.3 柱溫的選擇 筆者曾考察柱溫初始為35 ℃保持12 min，以35 ℃·min-1的速度升溫至220 ℃，保持8 min，其他色譜條件不變，結(jié)果乙醇和二氯甲烷的分離度小于1.5，調(diào)整初始溫度為25 ℃保持13 min，以15 ℃·min-1的速度升溫至150 ℃，保持5 min，再以40 ℃·min-1的速度升至220 ℃，保持5 min，結(jié)果各被測(cè)溶劑峰的分離度均>1.5，符合要求。

3.4 色譜柱的選擇 本實(shí)驗(yàn)所測(cè)殘留溶劑種類(lèi)較多，極性和沸點(diǎn)范圍跨度都相對(duì)較大，為了獲得較好的分離度，分別試用了極性的DB-WAX，DB-FFAP，弱極性的DB-624、DB-1301和中等極性的DB-35，HP-35等6種型號(hào)的石英毛細(xì)管柱，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以弱極性的色譜柱分離效果最好，極性柱的色譜圖二氯甲烷峰和乙醇峰合為一個(gè)峰，分析比較后以弱極性的DB-624色譜柱各被測(cè)溶劑峰的分離度最好，且峰形對(duì)稱(chēng)性較好，故最終

選用DB-624石英毛細(xì)管柱。

總之，因本實(shí)驗(yàn)所測(cè)溶劑種類(lèi)較多，沸點(diǎn)范圍跨度大，且二甲亞砜沸點(diǎn)較高，通過(guò)程序升溫分流直接進(jìn)樣，無(wú)造成對(duì)柱子的污染，使各被測(cè)溶劑達(dá)到完好分離，理論板數(shù)均>5 000。該方法切實(shí)可行可以用于本品殘留溶劑的測(cè)定。

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DOI 10.3870/yydb.2015.08.025

2014-05-04

2014-08-06

郭旭光(1972-)，男，河南襄城人，主管藥師，碩士，研究方向：食品藥品質(zhì)量控制。電話：0371-63388290，E-mail：gxg0371@126.com。

R973；R927.1

B

1004-0781(2015)08-1081-03