王 凱，陳 敏，武冬梅，李 潔，張明升，張軒萍

據(jù)最新調(diào)查顯示［1］，我國(guó)成人糖尿病發(fā)病率已高達(dá)9.7%，而且還在不斷增長(zhǎng)，且有向年輕化發(fā)展的趨勢(shì)。微血管病變作為糖尿病的特征性并發(fā)癥之一，是糖尿病患者致死、致殘的主要原因。糖尿病微血管并發(fā)癥主要有糖尿病腎病（DM）和糖尿病視網(wǎng)膜病變，同時(shí)也對(duì)腸系膜等組織的微循環(huán)造成影響。由于腸系膜微循環(huán)系統(tǒng)是機(jī)體最大的血管床之一，且易于進(jìn)行捕捉觀察，故腸系膜微循環(huán)是研究臟器微循環(huán)較理想的部位之一［2］。有報(bào)道研究糖尿病大鼠離體腸系膜血管對(duì)去甲腎上腺素（NE）的反應(yīng)性下降［3］，而有關(guān)NE對(duì)在體腸系膜微循環(huán)的研究鮮有報(bào)道，故本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用BI－2000生物醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)，觀察局部滴加NE對(duì)正常大鼠及STZ誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠腸系膜微循環(huán)的影響。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 鏈脲佐菌素（STZ）：美國(guó)Sigma公司，批號(hào)20130809－7＃。去甲腎上腺素：Sigma公司，批號(hào)086K1540。HEPES：AMRESCO公司，批號(hào)CAS號(hào)7365－45－9。甲磺酸酚妥拉明注射液：上海旭東海普有限公司，批號(hào)120606。生理鹽溶液（physiological salt solution，PSS）：NaCl 144 mmol／L，KCl 5.8 mmol／L，MgCl21.2 mmol／L，CaCl22.5 mmol／L，Glucose 11.1 mmol／L，HEPES 5 mmol／L，加 入 1 mol／L 的NaOH將PSS液pH分別調(diào)節(jié)為7.4、7.6、7.8、8.0、8.2。

1.2 儀器與設(shè)備 HW－2000微循環(huán)數(shù)字恒溫儀系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；彩色攝像機(jī)（成都泰盟科技有限公司）；BI－2000微循環(huán)觀測(cè)系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；強(qiáng)生穩(wěn)豪?倍易型血糖儀；ONE TOUCH Ultra血糖試紙。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Sprague－Dawley（SD）雄性大鼠30只，體重180 g～220 g，由鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（豫）2005－0001。所有大鼠飼養(yǎng)在23℃～25℃室內(nèi)，自由飲水，自由攝食。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，隨機(jī)選取12只作為對(duì)照組，其余18只腹腔注射 STZ 60 mg／kg［4］，72 h后尾靜脈采血，空腹血糖＞16.7 mmol／L為造模成功，將12只造模成功大鼠列為實(shí)驗(yàn)組（STZ組）。

1.4 微循環(huán)實(shí)驗(yàn)方法 右側(cè)腹壁剪毛后，開(kāi)一長(zhǎng)約2 cm切口，輕取出回腸段腸管置于37℃恒溫浴槽內(nèi)的觀測(cè)槽上，在光學(xué)顯微鏡下（×400）選擇內(nèi)徑100μm以下的毛細(xì)血管進(jìn)行觀察。在浴槽的觀測(cè)槽、顯微鏡視野下局部滴加100μL NE，滴加的濃度依次為10－12mol／L，10－11mol／L，10－10mol／L，10－9mol／L，10－8mol／L，10－7mol／L，10－6mol／L，10－5mol／L，10－4mol／L，記錄滴加藥物后1 min時(shí)腸系膜微動(dòng)、靜脈血管的直徑大小，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算直徑變化率。酚妥拉明（濃度為1.6×10－5mol／L）孵育1 min，局部滴加4×10－9mol／L的NE，記錄滴加藥物后1 min時(shí)腸系膜微動(dòng)、靜脈血管的直徑大小，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算直徑變化率。用37℃pH7.4的HEPES液沖洗3次，達(dá)到靜息狀態(tài)時(shí)的血管直徑后繼續(xù)滴加下一濃度，記錄靜息及灌胃藥物后腸系膜微動(dòng)、靜脈血管的直徑大小，用系統(tǒng)中自帶的卡尺分別測(cè)量微動(dòng)脈和微靜脈直徑3次，并計(jì)算其平均值。所有結(jié)果均計(jì)算其直徑變化率，直徑變化率（%）＝（給藥后直徑－靜息直徑）／靜息直徑。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，所有實(shí)驗(yàn)資料采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組血糖值、體重比較（見(jiàn)表1、表2） 腹腔注射STZ72 h后尾靜脈采血，采用強(qiáng)生穩(wěn)豪?倍易型血糖儀及ONE TOUCH Ultra血糖試紙測(cè)量血糖。腹腔注射STZ前、1周后分別對(duì)大鼠稱量體重，并觀察到STZ組大鼠出現(xiàn)明顯的多飲、多尿、多食和消瘦“三多一少”的糖尿病癥狀。

表1 兩組血糖比較（x±s） mmol／L

95 STZ組 192.27±7.08 157.87±7.371）與空白對(duì)照組比較，1）P＜0.05。組別 給藥前 給藥后空白對(duì)照組 197.75±8.76 231.35±5.

2.2 NE對(duì)STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠腸系膜微血管的影響 局部滴加100μL NE 1 min后對(duì)照組大鼠腸系膜微動(dòng)脈的直徑濃度依賴性減小，對(duì)微動(dòng)脈血管的最大收縮效應(yīng)（Emax）為（24.62±0.84）%，半最大效應(yīng)濃度（EC50）為（4.14±0.35）×10－9mol／L。與對(duì)照組相比，STZ組大鼠腸系膜微動(dòng)脈對(duì)NE的反應(yīng)性較對(duì)照組明顯減弱（見(jiàn)圖1），對(duì)微動(dòng)脈血管的Emax為（14.62±0.57）%，EC50為（5.39±0.29）×10－8mol／L（見(jiàn)圖1）。

局部滴加100μL NE 1 min后對(duì)照組大鼠腸系膜微靜脈的直徑濃度依賴性減小，對(duì)微靜脈血管的Emax為（22.70±0.57）%，EC50為（2.95±0.48）×10－8mol／L。與對(duì)照組相比，STZ組大鼠腸系膜微靜脈對(duì)NE的反應(yīng)性較對(duì)照組明顯減弱（見(jiàn)圖1），對(duì)微靜脈血管的Emax為（13.47±0.68）%，EC50為（4.78±0.39）×10－8mol／L（見(jiàn)圖1）。

圖1 NE對(duì)STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠腸系膜微血管的影響

2.3 酚妥拉明孵育后NE對(duì)STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠腸系膜微血管的影響 酚妥拉明孵育1 min后，局部滴加4×10－9mol／L的NE，NE對(duì)對(duì)照組大鼠腸系膜微血管的收縮作用明顯強(qiáng)于STZ組（見(jiàn)圖2）。

圖2 酚妥拉明孵育后NE對(duì)STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠腸系膜微血管的影響

3 討 論

糖尿病已成為繼心腦血管疾病和腫瘤之外的第三大非傳染性疾病，控制糖尿病的發(fā)病率具有重要意義。微血管病變是糖尿病的常見(jiàn)并發(fā)癥，是糖尿病并發(fā)多種器官損害的病理學(xué)基礎(chǔ)［5，6］。疾病發(fā)生時(shí)毛細(xì)血管及其前、后的括約肌對(duì)血管活動(dòng)物質(zhì)的反應(yīng)極為活躍和復(fù)雜［7］，因而血管活性物質(zhì)往往成為支配微循環(huán)血?jiǎng)恿Φ闹饕蛩亍?/p>

鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病大鼠是目前比較成熟的研究糖尿病的經(jīng)典動(dòng)物模型。鏈脲佐菌素可通過(guò)GLUT2葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（GLUT2 glucose trasport protein）獨(dú)立進(jìn)入細(xì)胞，對(duì)胰腺胰島β－細(xì)胞具有毒性，造成胰島素分泌絕對(duì)或相對(duì)不足。血液中高濃度的葡萄糖及其代謝產(chǎn)物是參與糖尿病患者血管損傷的重要物質(zhì)［8，9］。本實(shí)驗(yàn)著重探討NE對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠腸系膜微循環(huán)的影響。

本實(shí)驗(yàn)中NE濃度依賴性收縮大鼠腸系膜微動(dòng)、靜脈直徑，且對(duì)微動(dòng)脈的收縮作用強(qiáng)于微靜脈，這與NE激動(dòng)α1受體引起血管收縮的機(jī)制相符。與空白對(duì)照組相比，STZ誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠腸系膜微循環(huán)對(duì)NE的反應(yīng)性明顯減弱。酚妥拉明是α受體阻斷劑，微血管在酚妥拉明孵育后，表現(xiàn)為NE對(duì)STZ組大鼠腸系膜微循環(huán)的收縮率較對(duì)照組明顯減弱，提示在糖尿病時(shí)NE對(duì)受體的作用減弱。因此在臨床需要應(yīng)用NE救治時(shí)，應(yīng)該考慮NE對(duì)微血管的收縮作用減弱這一情況。

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