李 峰，呂素芳，張文通，劉吉山，李書光，郭廣君，張松林，王文秀

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東濱州256600；2.山東綠都生物科技有限公司，山東濱州256600）

豬偽狂犬病（Pseudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（PRV）感染引起的豬場常見傳染病之一，能夠引起種豬繁殖障礙，新生仔豬發(fā)熱、震顫及急性死亡，生長豬、育肥豬呼吸道癥狀等。其臨床癥狀取決于感染豬只的年齡、感染途徑、感染毒株的毒力和自身免疫情況等［1－2］。該病在世界范圍內(nèi)發(fā)生，特別是養(yǎng)殖密度比較大的國家，包括南美洲、歐洲。疫苗免疫－檢測凈化成為根除PRV 的有效手段，其實施前提是對區(qū)域內(nèi)豬群PRV免疫和感染情況進(jìn)行正確判斷［3］。本研究對濱州部分養(yǎng)豬場的豬進(jìn)行了隨機(jī)采樣和血清抗體檢測，以期對該市相關(guān)情況進(jìn)行評判，合理指導(dǎo)該病防控。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣品 采集自濱州市惠民、鄒平、濱城、沾化等縣區(qū)43家不同規(guī)模自繁自養(yǎng)場能繁母豬和育肥豬血樣453份，其中能繁母豬血樣303份，育肥豬血樣150份（表1）。

1.1.2 試劑盒 豬偽狂犬病病毒gB 抗體ELISA 檢測試劑盒由山東省濱州預(yù)防獸醫(yī)學(xué)與動物生物技術(shù)重點(diǎn)開放實驗室生產(chǎn)，批號：2014061301；豬偽狂犬病病毒gE 抗體ELISA 檢測試劑盒由武漢科前動物生物制品責(zé)任公司生產(chǎn)，批號：20140706。

1.2 方法

1.2.1 血樣采集和調(diào)查 耳緣靜脈或前腔靜脈采血，3 mL／頭～5 mL／頭，常規(guī)方法分離血清。采樣時，同時對該場偽狂犬病疫苗免疫情況進(jìn)行調(diào)查登記。

1.2.2 PRV gB抗體檢測 采取ELISA 檢測法，按照試劑盒說明書進(jìn)行。試驗有效性判斷：陰性對照OD450nm 值≤0.2；陽性對照OD450nm 值≥0.4。臨界值（CO）的計算：臨界值＝0.18＋陰性對照均值；陰性對照OD450nm 值大于0.2 時應(yīng)舍棄，所有陰性對照OD450nm 值都大于0.2 時須重復(fù)試驗；陰性對照低于0.05 時以0.05 計算。結(jié)果判定：檢測樣品OD450nm 值≥臨界值，判定該檢測樣品為陽性；檢測樣品OD450nm 值＜臨界值，判定該檢測樣品為陰性。

1.2.3 PRV gE 抗 體 檢 測 采 取 阻 斷ELISA 檢 測法，按照試劑盒說明書進(jìn)行。結(jié)果判定：試驗成立的條件是陰性對照孔平均OD630nm 值與陽性對照平均OD630nm 值之差≤0.3。S＝樣品孔OD630nm值，N＝陰性對照孔平均OD630nm 值。若S／N 比值≤0.35，樣品判為gE 抗體陽性。若S／N 比值≤0.4但≤0.35，樣品判為可疑。該樣品必須重測，如結(jié)果相同，則判為gE抗體陽性。若S／N 比值＞0.4，樣品判為gE抗體陰性。

2 結(jié)果

2.1 疫苗免疫情況統(tǒng)計

對隨機(jī)采樣的43個自繁自養(yǎng)場PRV 疫苗免疫情況進(jìn)行統(tǒng)計，35個豬場使用過偽狂犬病疫苗，約占調(diào)查場數(shù)的81.40%；整體免疫密度達(dá)到91.46%。按照村養(yǎng)能繁母豬數(shù)量是否≥30頭為界統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，從免疫場數(shù)和免疫密度來看，規(guī)?！?0頭的豬場明顯優(yōu)于＜30頭的豬場（表2）。

2.2 PRV gB抗體檢測情況

共檢測樣品453份，其中332份陽性，總體陽性率約為73.29%。按照能繁母豬、育肥豬分別進(jìn)行了統(tǒng)計分析，并對能繁母豬抗體陽性率分布區(qū)間進(jìn)行了統(tǒng)計。

2.2.1 母豬PRV gB抗體檢測結(jié)果 采集的303份血清中229份為陽性，總體陽性率為75.58%。39個豬場有樣品檢測結(jié)果為陽性，占豬場總數(shù)的90.70%。其中35個免疫豬場的樣品檢測陽性率為77.08%，明顯好于非免疫豬場68.0%的陽性率（表3）。

2.2.2 育肥豬PRV gB抗體檢測情況 采集的150份血清中103份檢測為陽性，總體陽性率為68.67%。24個豬場有樣品檢測結(jié)果為陽性，占豬場總數(shù)的80.0%（表4）。

2.2.3 PRV gB抗體陽性率統(tǒng)計分析 對采樣的43個豬場能繁母豬偽狂犬病病毒gB抗體陽性率進(jìn)行了統(tǒng)計，其中陽性率高于90%豬場為19家，占采樣豬場總數(shù)的44.19%；陽性率高于80%的豬場總數(shù)為25家，約占采樣豬場總數(shù)的58.14%；低于70%，即免疫保護(hù)率不合格的有11家豬場，約占采樣豬場總數(shù)的25.58%（表5）。

2.3 PRV gE抗體檢測情況

2.3.1 母豬PRV gE抗體檢測結(jié)果 經(jīng)檢測，303份血清樣品中有77份為偽狂犬病病毒gE抗體陽性，陽性率為25.41%；陽性樣品來自于20個豬場，豬場陽性率為46.51%。按照是否免疫及能繁母豬規(guī)模劃分為4個組別進(jìn)行了統(tǒng)計分析，其中免疫豬場中養(yǎng)殖規(guī)模能繁母豬小于30 頭的豬場陽性率最低，為35.29%，與非免疫組差異不顯著；免疫豬場中養(yǎng)殖規(guī)模能繁母豬大于等于30 頭的樣品陽性率最低，為22.99%，與非免疫組差異顯著（表6）。

表1 樣品來源及分布情況Table 1 The sample source and distribution

表2 PRV疫苗免疫情況統(tǒng)計表Table 2 Statistics of PRV vaccine immunization

表3 母豬PRV gB抗體檢測結(jié)果統(tǒng)計表Table 3 Statistics results of sow PRV gB antibody detection

表4 育肥豬PRV gB抗體檢測結(jié)果統(tǒng)計表Table 4 Statistics results of PRV gB antibody detection in fattening pigs

2.3.2 育肥豬PRV gE抗體檢測情況 150份育肥豬血樣中40份樣品檢測結(jié)果為PRV gE抗體陽性，陽性率為26.67%；13個豬場檢出陽性，豬場陽性率為44.33%。樣品陽性率和豬場陽性率兩個指標(biāo)，免疫豬場均明顯優(yōu)于非免疫豬場（表7）。

2.3.3 不同豬場PRV gE抗體陽性率分析 根據(jù)采樣不同區(qū)縣對檢測結(jié)果統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，4個縣區(qū)PRV gE抗體豬場陽性率在36.36%～55.55%，樣品陽性率介于20.78%～32.20%之間，不同區(qū)縣之間具有明顯差異（表8）。

表5 母豬PRV gB抗體陽性率分布情況表Table 5 PRV gB antibody positive rate distribution in sows

表6 母豬PRV gE抗體檢測結(jié)果統(tǒng)計表Table 6 Statistics results of sow PRV gE antibody detection

表7 育肥豬PRV gE抗體檢測結(jié)果統(tǒng)計表Table 7 Statistics results of PRV gE antibody detection in fattening pigs of different regions

表8 育肥豬PRV gE抗體檢測結(jié)果統(tǒng)計表Table 8 Statistics results of PRV gE antibody detection of fattening pigs

3 討論

2014年度濱州市不同縣區(qū)43家不同規(guī)模自繁自養(yǎng)場能繁母豬PRV gB抗體豬場陽性率高于70%的豬場占比為74.42%，樣品陽性率為75.58%，較2012年和2013年檢測數(shù)據(jù)略好［4］。育肥豬樣品陽性率為68.67%，低于同區(qū)域能繁母豬陽性率。這與戴愛玲等［5］的調(diào)查結(jié)果相同，他們發(fā)現(xiàn)種豬免疫抗體陽性率明顯高于育肥豬，且育肥豬免疫抗體陽性率出現(xiàn)明顯的波動，其中130日齡～160日齡陽性率最高，60日齡～80日齡次之，80～130日齡時陽性率最低，這可能與隨著日齡增長，豬體內(nèi)母源抗體逐漸消失，120日齡左右基本消失有關(guān)。本研究表明濱州市各區(qū)域PRV gB抗體陽性率低于2013年全國88.05%的平均水平［6］。分析認(rèn)為，PRV gB抗體滴度與PRV 疫苗免疫頻次和密度相關(guān)。經(jīng)調(diào)查，該市母豬PRV 多采取跟胎免疫的疫苗免疫程序，即在產(chǎn)前30日齡～35日齡免疫，免疫間隔時間過長，容易產(chǎn)生空白期。

2014年度濱州市不同縣區(qū)43家不同規(guī)模自繁自養(yǎng)場能繁母豬PRV gE 抗體豬場陽性率為46.51%，樣品陽性率為25.41%；育肥豬PRV gE 抗體豬場陽性率為44.33%，樣品陽性率為26.67%。與張三軍［8］報道相似。較張顯浩等［7］報道的豬場陽性率38.1%，血清樣品野毒抗體陽性率14.96%相比均要偏高，可見該區(qū)域PRV 野毒感染較為嚴(yán)重，呈地方流行性。對本區(qū)域而言，有必要采取一定的防控及凈化措施。統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，能繁母豬與育肥豬PRV gE抗體陽性率并不直接相關(guān)。其病毒感染與豬場生物安全管理、區(qū)域病毒變異及豬群自身免疫水平相關(guān)。這與有關(guān)報道結(jié)論相吻合［9］?？刂圃摬〉年P(guān)鍵在于母豬的免疫質(zhì)量，做好母豬偽狂犬病病毒野毒抗體檢測，及時清除帶毒豬，并結(jié)合進(jìn)行免疫抗體的監(jiān)測和評估，對偽狂犬病的控制和凈化至關(guān)重要［10］。

本試驗掌握了該市PRV 疫苗免疫效果和野毒感染的基本情況，為該市制定區(qū)域性防控和凈化方案提供參考資料。豬偽狂犬病病毒基因缺失疫苗和gE ELISA檢測試劑盒的配合應(yīng)用，為豬偽狂犬病凈化提供了可行的技術(shù)方案，并得到了充分實施和驗證［11－14］。該市應(yīng)提高對該病的重視，選擇優(yōu)質(zhì)高效疫苗，提高免疫密度，改進(jìn)免疫程序。建議母豬采取普免措施，3次／年～4次／年；商品豬采取1日齡～3日齡滴鼻，30 日齡肌注的兩次免疫程序。選擇gB ELISA和gE ELISA 檢測試劑盒，對后備和種豬豬群加強(qiáng)監(jiān)測，對不產(chǎn)生免疫抗體和gE抗體陽性的種豬和后備豬堅決予以淘汰，并持續(xù)改進(jìn)生物安全管理措施。

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