廖 琪，岳新愛，彭 英，陳 平，吳秀麗，唐袁婷，胡正強(qiáng)

(四川大學(xué)華西第二醫(yī)院臨床檢驗(yàn)科，四川 成都 610041)

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VVC患者與健康育齡婦女的陰道微生態(tài)比較

廖 琪，岳新愛，彭 英，陳 平，吳秀麗，唐袁婷，胡正強(qiáng)

(四川大學(xué)華西第二醫(yī)院臨床檢驗(yàn)科，四川 成都 610041)

目的：通過陰道微生態(tài)評價指標(biāo)，了解外陰陰道假絲酵母菌病(VVC)患者與健康人群的陰道微生態(tài)差異。方法：隨機(jī)選取四川大學(xué)華西第二醫(yī)院婦科門診診斷為VVC患者199例，健康育齡婦女412例。經(jīng)調(diào)查病史、年齡后，取陰道分泌物進(jìn)行陰道微生態(tài)檢查，包括菌群密集度、菌群多樣性、乳酸桿菌、乳酸桿菌分級、唾液酸酶、Nugent評分、白細(xì)胞、清潔度、線索細(xì)胞、pH值等，進(jìn)行分析比較。結(jié)果：VVC組與健康對照組比較，除菌群多樣性和pH值沒有顯著性差異(P>0.05)外，其余指標(biāo)均有顯著性差異(P<0.05)。VVC患者平均年齡顯著低于健康婦女，菌群密集度、乳酸桿菌、乳酸桿菌分級、唾液酸酶、Nugent評分、白細(xì)胞、清潔度和線索細(xì)胞明顯高于健康對照組。結(jié)論：VVC好發(fā)于低年齡育齡婦女；通過監(jiān)測陰道微生態(tài)指標(biāo)的改變，臨床醫(yī)生可根據(jù)VVC患者的具體微生態(tài)狀況而針對性用藥。

外陰陰道炎癥；陰道微生態(tài)；外陰陰道假絲酵母菌病；育齡婦女

外陰陰道假絲酵母菌病(volvovagina candidiasis,VVC)是一種由假絲酵母菌的條件致病菌引起的外陰陰道炎癥。有研究顯示，VVC是假絲酵母菌在宿主外陰、陰道以及陰道環(huán)境相互作用的結(jié)果[1]。國外顯示約75%的女性一生中患過1次VVC，45%的女性經(jīng)歷過2次及以上的發(fā)作[2]。國內(nèi)14所醫(yī)院對VVC患者的流行病學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)，婦科門診患者以陰道炎癥最多(31.3%)，在陰道炎中VVC又居首位(11.6%)[3]。外陰陰道假絲酵母菌病治療效果好，但復(fù)發(fā)率高的問題是一直困擾廣大女性的問題。它是一種內(nèi)源性的難治性疾病。VVC的發(fā)生與陰道內(nèi)環(huán)境的變化有著很大的關(guān)系。陰道內(nèi)乳酸桿菌的減少往往是VVC發(fā)生的基礎(chǔ)，當(dāng)陰道生態(tài)平衡被打破，或有外源性的病原體入侵時，就會導(dǎo)致VVC的發(fā)生。所以我們可以通過微生態(tài)的指標(biāo)以及菌群的密集度、多樣性來觀察VVC與健康人群的差異。現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 對象 調(diào)查2014年4—7月來我院婦科門診就診并有較好依從性和易于隨訪的VVC患者199例，為VVC組。并在同時間段抽取正常健康女性412例，為健康對照組。分析比較2組現(xiàn)病史、既往病史、年齡、診斷等資料。

1.2 VVC和健康人群的篩選 (1)癥狀：外陰瘙癢，伴有尿痛并性交痛的癥狀，白帶增多。(2)體征：陰道分泌物呈白色豆腐渣樣，且外陰潮紅、水腫，并伴明顯抓痕。(3)實(shí)驗(yàn)室檢查：陰道分泌物以及微生態(tài)由專業(yè)醫(yī)生取到后，送至檢驗(yàn)科檢查(確保整個過程不受其它外界環(huán)境的污染)。記錄陰道微生態(tài)檢查結(jié)果。

1.3 儀器和試劑 革蘭染液由貝索生物技術(shù)有限公司提供；細(xì)菌性陰道病聯(lián)合檢測試劑盒由珠海麗珠生物技術(shù)有限公司提供；烤片機(jī)、染色架、顯微鏡、孵育儀。

1.4 標(biāo)本采集 由專業(yè)醫(yī)師用無菌棉拭子自陰道側(cè)壁上1/3處旋轉(zhuǎn)留取陰道分泌物，裝入干凈隔離的塑料瓶中送檢。

1.5 實(shí)驗(yàn)室檢查 標(biāo)本運(yùn)送至檢驗(yàn)科后，用烤片機(jī)烘干1 min固定后，進(jìn)行革蘭染色。(1)初染。將放有涂片標(biāo)本的染色架放入結(jié)晶紫乙醇飽和液缸內(nèi)，染色約10 s，自來水沖洗干凈。(2)媒染。將染色架吸干多余水分后，放入堿性碘液缸內(nèi)，染色約15 s,自來水沖洗。(3)脫色。將染色架吸干多余水分后，放入30%丙酮酒精缸內(nèi)，脫色5～20 s，自來水沖洗。(4)復(fù)染。將染色架吸干多余水分后，放入堿性復(fù)紅乙醇飽和液缸內(nèi)，染色約40 s，自來水沖洗干凈。5)烤干。VVC組和健康對照組均行陰道微生態(tài)檢查。陰道微生態(tài)檢查方法：先用細(xì)菌性陰道病聯(lián)合檢測試劑盒檢測pH值、唾液酸酶、過氧化氫和白細(xì)胞酯酶；涂片革蘭染色后，由顯微鏡觀察VVC組和健康對照組陰道分泌物鏡下的形態(tài)，包括假絲酵母菌孢子、假菌絲、芽生孢子、細(xì)菌群密度、菌群多樣性、乳酸桿菌、乳酸桿菌分級、Nugent評分、白細(xì)胞、清潔度、線索細(xì)胞等并記錄。微生態(tài)指標(biāo)如唾液酸酶、pH值同時記錄。由于過氧化氫受外界因素影響，白細(xì)胞酯酶為破壞白細(xì)胞釋放的酯酶，僅反映既往炎癥狀況，均排除本研究。

1.6 陰道微生態(tài)判斷標(biāo)準(zhǔn) 陰道微生態(tài)正常的標(biāo)準(zhǔn)是正常菌群密度和菌群多樣性為Ⅱ～Ⅲ級、優(yōu)勢菌為乳酸桿菌、清潔度Ⅰ～Ⅱ度、過氧化氫(乳酸桿菌功能)陰性、白細(xì)胞酯酶以及唾液酸酶(厭氧菌指標(biāo))陰性、陰道pH<4.5。

1.7 微生態(tài)指標(biāo)的判斷標(biāo)準(zhǔn) 乳酸桿菌分級是根據(jù)與其他菌群的消長關(guān)系進(jìn)行分級。Ⅰ級：許多多形乳桿菌，無其他細(xì)菌。Ⅱa級：混合菌群，主要為乳桿菌。Ⅱb級：混合菌群，但乳桿菌比例明顯減少。Ⅲ級：乳酸菌嚴(yán)重減少或缺失，其它菌群過度生長。Nugent評分為BV診斷的實(shí)驗(yàn)室金標(biāo)準(zhǔn)[4]，其診斷方法為：0～3分為正常，4～6分為臨界范圍，7～10分可診斷BV。菌群密集度是指在油鏡下觀察每視野平均細(xì)菌數(shù)，Ⅰ級(+)1～9個，Ⅱ級()10～99個，Ⅲ級()100～999個，Ⅳ級()細(xì)菌聚集成團(tuán)。菌群多樣性表示在油鏡下觀察辨別每視野細(xì)菌種類，Ⅰ級(+)1～3種細(xì)菌，Ⅱ級()4～6種細(xì)菌，Ⅲ級()7～10種細(xì)菌，Ⅳ級()11種及以上細(xì)菌。

1.8 數(shù)據(jù)的處理 本實(shí)驗(yàn)選取菌群密集度、菌群多樣性、乳酸桿菌、乳酸桿菌分級、唾液酸酶、Nugent評分、白細(xì)胞、清潔度、線索細(xì)胞、pH值、年齡這11個指標(biāo)，以此對比VVC組和正常健康人群的微生態(tài)結(jié)果差異。將結(jié)果進(jìn)行量化，以便進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析。將所有項(xiàng)目結(jié)果中的未見和陰性均量化為0，查見和陽性以及弱陽量化為1；線索細(xì)胞：未見量化為0，1%～20%為1，>20%為2；白細(xì)胞：0～5個為量化0，5～15個為1，15～30為2，>30個為3；乳酸桿菌：<1個量化為0，1～5個/油鏡量化為1，6～30個/油鏡為2，>30個/油鏡為3；菌群密集度和菌群多樣性：Ⅰ級量化為1，Ⅱ級為2，Ⅲ級為3，Ⅳ級為4；乳酸桿菌分級：Ⅰ級量化為1，Ⅱa級為2，Ⅱb級為3，Ⅲ級為4，“無”為0；清潔度：Ⅰ度為1，Ⅱ度為2，Ⅲ度為3，Ⅳ度為4。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)算2組數(shù)據(jù)的均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差。2組間比較用成組資料比較的t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2組患者年齡和各微生態(tài)指標(biāo)的比較結(jié)果詳見表1。

表1 2組年齡和各微生態(tài)指標(biāo)的比較

注：1)與對照組比較P<0.05；2)與對照組比較P<0.01

VVC組和對照組比較，在年齡、菌群密集度、乳酸桿菌、乳酸桿菌分級、唾液酸酶、Nugent評分、白細(xì)胞、清潔度、線索細(xì)胞方面比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05 或P<0.01)，而pH值、菌群多樣性方面比較無顯著性差異(P>0.05)。

3 討 論

VVC是婦科常見病，容易治療，但是復(fù)發(fā)率特別高，也較易轉(zhuǎn)變成復(fù)發(fā)性外陰陰道假絲酵母菌病(recurrent vulvovaginalcandidiasis，RVVC)。其機(jī)理不明確，有學(xué)者認(rèn)為可能VVC的發(fā)生與陰道局部微生態(tài)環(huán)境異常有直接關(guān)系[5]。而陰道微生態(tài)體系是由陰道內(nèi)正常菌群、機(jī)體內(nèi)分泌調(diào)節(jié)和解剖生理結(jié)構(gòu)共同組成，在受到內(nèi)源性和外源性因素的共同影響時，容易發(fā)生改變[6]。正常情況下乳酸桿菌為優(yōu)勢菌，可以黏附與競爭性地排斥假絲酵母菌，分解陰道上皮細(xì)胞的糖原產(chǎn)生乳酸降低陰道pH值[7]，產(chǎn)生過氧化氫[8]、細(xì)菌素、類菌素、表面活性物質(zhì)[9]，抑制其他細(xì)菌的過度繁殖。乳酸桿菌的減少可致菌群失調(diào)，給了其他細(xì)菌生長的機(jī)會，就會引起相應(yīng)的陰道炎癥，從而使pH值、菌群密集度、過氧化氫、乳酸桿菌等一系列微生態(tài)指標(biāo)發(fā)生改變。從而對臨床上的診斷有很大的幫助。

本次研究發(fā)現(xiàn)，2組菌群密集度、乳酸桿菌、乳酸桿菌分級、唾液酸酶、Nugent評分、白細(xì)胞、清潔度、線索細(xì)胞有顯著性差異，說明在VVC患者微生態(tài)中菌群密集度、乳酸桿菌、乳酸桿菌分級、唾液酸酶、Nugent評分、白細(xì)胞、清潔度、線索細(xì)胞存在顯著改變。在VVC組與健康對照組的年齡對比中，VVC組顯著低于健康對照組，表明低年齡育齡婦女容易感染VVC。而對于VVC患者來說，pH值、菌群多樣性與健康婦女無顯著性差異，這可能與下列有關(guān)：(1)樣本量較少，還可以擴(kuò)大樣本量；(2)乳酸桿菌還存留一些功能正常能產(chǎn)酸的桿菌，使其pH值變化不大；(3)乳酸桿菌與假絲酵母菌在一定程度上達(dá)到了平衡，從而使陰道內(nèi)的菌群種類控制在正常范圍，沒有引起其他細(xì)菌的過度生長。(4)由于假絲酵母菌的大量繁殖，控制了陰道內(nèi)的營養(yǎng)來源，而抑制了其他細(xì)菌的生長繁殖。

綜上所述，VVC患者可以通過陰道微生態(tài)檢查反映臨床上是否治愈或者好轉(zhuǎn)，使陰道微生態(tài)成為指導(dǎo)臨床醫(yī)生合理用藥的一個重要指標(biāo)。臨床治愈時，有約40%的患者微生態(tài)處于紊亂狀態(tài)，通過積極的恢復(fù)陰道微生態(tài)環(huán)境，復(fù)發(fā)率可下降2.3%[10]。在VVC患者的治療過程中通過動態(tài)監(jiān)測微生態(tài)的指標(biāo)變化，臨床醫(yī)生可以根據(jù)患者的具體微生態(tài)狀況而針對性用藥，這樣既可減輕醫(yī)生的治療麻煩又可減輕患者在治療過程中的痛苦。而對于正常健康育齡婦女，應(yīng)注重個人衛(wèi)生，保持陰道微生態(tài)平衡，避免VVC的發(fā)生。

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The Vaginal Micro Ecological Differences between Patients with VVC and Healthy Women of Reproductive Age

LIAO Qi,YUE Xinai,PENG Ying,CHEN Ping,WU Xiuli, TANG Yuanting, HU Zhengqiang

(Department of Laboratory Medicine,West China Second University Hospital,Sichuan University,Sichuan Chengdu 610041,China)

Objective:To investigate the vaginal micro ecological differences between patients with VVC (case group) and healthy women of reproductive age (control group) through the evaluation of vaginal micro ecological indicators.Methods:199 patients who were diagnosed as VVC in gynecological outpatient department of West China Second University Hospital,Sichuan University and 412 women of control group were enrolled in our study randomly.Their mrdical history and ages were investigated,and the vaginal micro ecosystem of vaginal discharge were evaluated,which were bacteria density,flora diversity,Lactobacillus, Lactobacillus classification,sialidase,Nugent scores,white blood cells,vaginal depuratory degree,clue cells,pH value and so on.The differences between the two study groups were calculated with statistical methods.Results:There were significant differences between the case group and the control group inmicro ecological indicators(P<0.05) except flora diversity and pH value(P>0.05).The average age of patients with VVC was lower than that of healthy women.The bacteria density,Lactobacillus,Lactobacillus classification,sialidase,Nugent score, white blood cells,vaginal depuratory degree and clue cells of patients with VVC were significantly higher than that of healthy women.Conclusion:VVC often occurs in women of low reproductive age.By monitoring the changes of vaginal micro-ecosystem,clinicians can use targeted drugs in treatment of patients with VVC according to the specific micro ecological status.

vulva vaginitis;vaginal micro-ecosystem; vulvovaginal candidiasis; women of childbearing age

四川省衛(wèi)生廳科研項(xiàng)目(編號：120266)

胡正強(qiáng)，hufly747@163.com

R711.31

A

10.11851/j.issn.1673-1557.2015.06.007

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1688.R.20151113.1236.016.html

2015-01-04)